液相色譜

孫玉飛

摘 要 硝基呋喃類藥物是一類合成的抗菌藥物總稱， 對多數革蘭氏陽性、陰性細菌有抗菌作用，該藥價格低廉，抗菌療效好，曾被廣泛應用于畜禽和水產養殖業，治療由大腸桿菌或沙門氏菌所引發的疾病。硝基呋喃類藥物及其代謝物對人體危害較大有致畸、致突變和可疑致癌作用。硝基呋喃類藥物對光敏感，在動物體內代謝速度快，而代謝物以蛋白結合物的形式可以長期保持穩定狀態，特別是水產品中硝基呋喃類代謝物殘留會通過食物鏈進行富集，最終對人體健康產生危害，我國2002 年農業部第193 號公告禁止使用呋喃唑酮和呋喃他酮，2005 年農業部第560 號公告將呋喃妥因和呋喃西林列入首批《獸藥地方標準廢止目錄》，硝基呋喃類藥物及其代謝物的檢測對保證食品安全具有重要意義。

關鍵詞 液相色譜-串聯質譜法 水產品 硝基呋喃類代謝物 研究

由于硝基呋喃類藥物代謝迅速，通常以硝基呋喃類藥物代謝物為目標分析物。液相色譜-質譜聯用法具有檢測限低、靈敏度高、抗干擾能力強、定性定量準確等特點，所以廣泛應用于硝基呋喃代謝物的檢測和確證。我國已制定了很多相關標準如《獸藥殘留檢測標準操作規程-2008 肌肉組織中硝基呋喃類代謝物殘留檢測方法——高效液相色譜-串聯質譜法》、《農業部783號公告-1-2006 水產品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》、《GB/T 20752-2006 豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》，使用液液萃取方法對硝基呋喃代謝物進行提取，內標法定量，該方法操作簡便，回收率良好，檢測速度較快，適合開展水產品中硝基呋喃類代謝物的檢測工作。

樣品的制備：樣品中脂肪對檢測影響較大，在樣品制備時要盡量選取水產品的肌肉部分充分均質。

水解和衍生化：稱取2g均質后樣品于50ml離心管中進行衍生，衍生試劑選擇0.2mol/L的鹽酸和2-硝基苯甲醛的二甲亞砜溶液。衍生效果對檢測結果影響較大，可適當增大2-硝基苯甲醛的用量，實驗中采用0.1g 2-硝基苯甲醛溶于10ml二甲亞砜溶液中，效果良好。二甲基亞砜是一種含硫有機化合物，常溫下為無色無臭的透明液體，是一種吸濕性的可燃液體。具有高極性、高沸點、熱穩定性好、非質子、與水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多數有機物，被譽為"萬能溶劑”，本實驗中選擇二甲亞砜作為溶劑效果較好。將樣品37℃恒溫水浴振蕩16小時，由于硝基呋喃類藥物對光敏感，恒溫水浴時要注意避光。

提取凈化：使用乙酸乙酯進行液液萃取凈化。對衍生后的溶液加入5ml 1mol/ L的磷酸二氫鉀溶液，注意調節溶液的pH，pH值在7.0-7.5之間效果最好，可以使用1mol/L的氫氧化鈉進行調節。每次使用4ml的乙酸乙酯至少進行兩次提取。合并提取液氮氣吹干，采用流動相初始濃度溶液或10%的甲醇水復溶。

實驗所用儀器為超高效液相色譜質譜聯用儀Waters TQD型號，不同儀器需要根據實際情況調整液相條件和質譜條件。

液相條件：A相為甲醇，B相為加入0.05%甲酸水的2mmol/L的乙酸銨溶液，流速為0.3ml/min。實驗中乙酸銨可以有效的改善峰型。注意乙酸銨容易污染儀器，不可超過2mmol/L，每次檢測后用大量水進行沖洗。

質譜條件：電噴霧電離元（ESI）；正離子掃描；多反應監測（MRM）模式；毛細管電壓：3.00 kV ；錐孔電壓：30 V ；脫溶劑氣體溫度：350℃；脫溶劑氣體流量：700 L/h ；錐孔氣體流量：150 L/h；以子母離子的保留時間和豐度比定性，以峰面積定量。

采用超高效液相色譜– 串聯質譜法測定水產品中的硝基呋喃代謝物，該法簡便、可靠，檢出限低，準確度和精密度符合殘留分析要求，能滿足相關部門的監督檢測需求，在實際檢測過程中可根據實際情況對相關標準進行優化操作，以得到滿意檢測結果。