黃芪多糖對四氯化碳誘導的大鼠肝纖維化的保護作用

孫佳石 劉寶磊

肝纖維化是各種治病因子引起肝內結締組織增生的一種病例生理過程，如不及時緩解，長期肝纖維化會形成肝硬化，導致肝臟代償功能降低，影響機體正常代謝[1-2]。臨床上，肝纖維化的治療主要采用抗肝纖維化藥物，其中黃芪及其復方制劑效果顯著，引起人們的廣泛關注[3]。黃芪是一種中藥材，應用于氣虛乏力、自汗久瀉等癥的治療中，具有保肝利尿、托毒排膿、補氣固表、增強免疫功能等功效，為了改善肝纖維化預后，了解黃芪作用及其治療機制具有很大的必要性[4-5]。黃芪多糖是黃芪主要成分之一，據相關研究發現，黃芪多糖與肝纖維化程度具有緊密的聯系[6]。為此，本研究對60只SPF級SD大鼠進行動物模型組建，其中12只為正常大鼠，另外48只為四氯化碳（CCL4）誘導肝纖維化大鼠，探究黃芪多糖對肝纖維化的保護作用，實施過程如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2019年2月我院選取SPF級SD大鼠（廣東省醫學實驗動物中心）60只，雌雄各半，體質量為1.9～2.1 kg不等；黃芪多糖（南京澤朗醫藥科技集團有限公司）；CCL4（天津富宇精細化工有效公司），檢測儀器為包括全自動生化分析儀。

1.2 動物模型組建

將60只SD大鼠隨機分為正常組（A組）、模型組（B組）和黃芪多糖低、中、高劑量組（C組、D組、E組）5組各12只，A組正常喂養，B、C、D和E組在正常喂養的基礎上，腹腔注射濃度為40%的CCL4橄欖油溶液，注射劑量為1 mL/kg，2次/周，連續注射4周，對其進行肝纖四項和肝組織HE染色檢驗，顯示建立CCL4誘導大鼠肝纖維化模型成功。

1.3 治療方式

對C、D和E組大鼠分別給予劑量為0.2 g/kg、0.4 g/kg、0.8 g/kg黃芪多糖灌胃，1次/d；A組和B組則分別給予等體積的生理鹽水，連續給藥2周，末次給藥1 h后，對大鼠采用水合氯醛麻醉，收集其腹主動脈血5 mL。

1.4 觀察指標

統計五組大鼠用藥后肝纖維四項有關數據，并給予分析比較。

肝纖維四項：包含III型前膠原（PCIII）、IV型膠原（IVC）、層粘連蛋白（LN）和透明質酸酶（HA）；將五組大鼠的血液樣本以3 000 r/min的速度離心，時間為15 min，取其血清，放置于-20℃下保存，采用全自動生化分析儀檢測肝纖維四項。

1.5 統計學處理

本研究數據輸入SPSS 18.0軟件中進行分析，肝纖四項（PCIII、IV-C、LN和HA）分別以（s） 、F描述和檢驗。P＜0.05，差異具有統計學意義。

2 結果

A組為正常大鼠的肝纖四項指標，B組為CCL4誘導肝纖維化大鼠的肝纖四項指標，C、D、E組為CCL4誘導肝纖維化大鼠經不同濃度的黃芪多糖治療后肝纖四項指標。在本研究結果中，A組肝纖四項數據低于B、C、D及E組，其中D、E組肝纖四項指標數據小于B、C組，數據差異有統計學意義（P＜0.05）；在不同劑量的黃芪多糖治療方面，D、E兩組治療后數據差異不具有統計學意義，與其相比，C組肝纖四項指標較高，組間差異具有統計學意義（P＜0.05），詳細數據見表1所示。

3 討論

肝纖維化是一種生理或病理過程，肝臟損傷時，其修復愈合過程中會發生肝纖維化，如致病因子長期存在，肝內結締組織會發生異常增生，逐漸發展為肝硬化，使肝臟功能嚴重降低[7-8]。據相關研究顯示[9]，肝纖維化的形成是由多種因素和通路的調節所致，在抗肝纖維化過程中，要在清除其誘因的同時，需要采用抗肝纖維化藥物進行緩解。中醫上，肝纖維化屬于“痞積”“臌脹”等范疇，在其治療藥物中，黃芪應用較多，且效果顯著，其主要作用成分為黃芪多糖[10-11]。黃芪多糖是由葡萄糖、果糖、半乳糖醛酸、糖醛酸、鼠李糖等組成的一種藥物，在臨床上可作為免疫調節劑，具有抗病毒、抗腫瘤、保肝、抗氧化等作用[12]，在抗肝纖維化中具有一定的臨床價值。

在本研究中，對SPF級SD大鼠皮下注射60%CCL4，8周大鼠表現為行動遲緩、精神萎靡、體質量降低、毛色發黃干枯等癥狀，通過肝纖四項等檢查顯示，CCL4誘導大鼠肝纖維化模型成功建立，除正常組和對照組，對C、D、E組大鼠給予不同劑量的黃芪多糖，其能夠避免肝糖原減少，對醋氨酚和D-半乳糖胺導致的肝損傷具有緩解作用，其中黃芪苷能夠抗生物氧化，調節代謝，能夠有效阻止肝纖維化發展，以達到抗肝纖維化作用，進而降低肝纖四項水平。經本文研究發現，給藥后D組肝纖四項水平比B、C組低，E組也低于B、C組，其差異均具有統計學優于（P＜0.05），說明黃芪多糖對CCL4誘導大鼠肝纖維化具有積極作用，能夠緩解肝纖維化癥狀。在對肝纖維化干預中，黃芪多糖的劑量要保證充足，否則其作用輕微，不能充分發揮其護肝作用；本研究對不同劑量的黃芪多糖進行探究，對其分別給予劑量為0.2 g/kg、0.4 g/kg和0.8 g/kg的黃芪多糖進行治療，發現0.2 g/kg的大鼠肝纖四項有所降低，但效果不夠顯著；增加其用藥劑量，發現0.4 g/kg黃芪多糖對肝纖四項的改善作用較為顯著，增加至0.8 g/kg則對肝纖四項變化不顯著，故C組的肝纖四項指標低于D組和E組，組間差異無統計學意義（P＞0.05），該結果在一定程度上對黃芪多糖的應用劑量提供有效的參考依據。除此之外，本研究未對黃芪多糖的安全性進行探討，藥物通常會具有一定的輔作用，因此，需要對其用藥劑量進行控制，避免劑量過高對其無法充分代謝，產生嚴重不良反應，故黃芪多糖的應用劑量以0.4 g/kg為宜。

表1 觀察指標數據的對比分析（ng/mL）

表1 觀察指標數據的對比分析（ng/mL）

綜上所述，足量（0.4 g/kg）的黃芪多糖能夠降低大鼠肝纖維化，對其肝纖維化癥狀緩解具有積極作用，以達到護肝的效果，該藥物在抗肝纖維化治療中具有臨床價值。