三顆針水提物體的鎮痛與抗炎作用

宋繼華 吳靜蔓.牡丹江醫學院.黑龍江牡丹江市.157000

三顆針是一種很常見的中藥材，而且藥理作用顯著，尤其是在抗菌消炎，清熱解毒 ，降壓，利膽等方面，因三棵針有毒，應病愈即止，且不宜長期服用。主治：肝炎。配方：三顆針（三錢）、地星宿（一兩）、木通（一兩），煎水內服 ，每天三次、每次100ml。主治：肝炎復水 。配方：三顆針（三錢），鐵筷子（五錢）、狗地菜草根（五錢）、甘草（二錢）、木通（一兩），煎水內服，每天三次、每次100ml。本人導師名吳必發，以上配方是他為病人治療時所用的配方，以期為探索其抗炎鎮痛作用提供依據。

實驗部分

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明小鼠，體質量（20±1）g，清潔級，由貴陽醫學院研究中心提供。實驗前將動物在室內適應性飼養3d，室溫(20~28℃)，相對濕度60%~80%。

1.2 藥品與試劑

硫酸羅通定注射液（浙江誠意藥業股份有限公司、規格：60mg/2ml、批號：134018）；醋酸地塞米松片（天津藥業新鄭制藥有限公司、規格：每片75mg、批號140643）；二甲苯（青島正華化工有限公司、批號 ：130418）；甲醇（東光鑫源化工有限公司、批號：21300737）；冰醋酸（國藥集團化學試劑有限公司、批號：T20090625）；氯化鈉注射液（貴州天地藥業有限責任公司、批號：A12092120）。

1.3 儀器與設備

TGL-16B離心機（上海安亭科學儀器廠）；YLS-6B型智能熱板儀（淮北正華生物儀器設備有限公司）；752型紫外分光光度計（南京麒麟分析儀器有限公司）；電子分析天平（奧斯國際貿易（上海）有限公司）；L-204電子天平（梅特勒-托利多中國分公司）。

1.4 實驗方法

1.4.1 對醋酸致小鼠扭體反應次數的影響[12-14].取小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，空白對照組，羅通定組（60mg/kg），三顆針水提物大（21.3mg/kg）、中（10.2mg/kg）、?。?.1mg/kg）劑量組。均灌胃給藥20ml/kg .qd，連續4d 。空白對照組給予同體積純凈水。末次藥后1h、小鼠腹腔注射0.7%醋酸溶液10ml/kg，記錄注射醋酸后15min內小鼠扭體反應次數。

1.4.2. 對熱板儀致小鼠疼痛的影響 [14-15].取雌性小鼠，放入(55±4) ℃熱板測痛儀，各小鼠自放入到出現舔后足所需時間即為痛閾值，5min后重復1次。痛閾〈5s或〉30s者，以及喜跳者，棄去不用。小鼠分組及給藥同“1.4.1”項，分別在末次給藥后30、60、90、120min測定小鼠的痛閾。小鼠在熱板測痛閾儀內60s仍無痛覺反應則取出，按60s計。

1.4.3 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響[15-16].取雄性小鼠50只，隨機分為5組，即空白對照組，地塞米松組（5.0mg/kg），三顆針水提物小（5.1mg/kg）、中（10.2mg/kg）、大（21.3mg/kg）劑量組。均灌胃給藥，20ml/kg.qd，連續7d，空白對照組給予同體積純凈水。于末次1h，各組小鼠于右耳廓滴二甲苯20微升致炎（正、反面各滴10微升），15min后脫勁椎處死，直徑6mm打孔器打下左右耳朵，稱定質量，以兩耳質量差值作為腫脹度，并計算抑制率（%）=（空白對照組平均兩耳質量差—給藥組平均兩耳質量差）/空白對照組平均兩耳質量差×100%。

1.4.4 對小鼠腹腔通透性的影響 [17-18].分組及給藥方法同“1.4.3”項，于末次給藥后1h，經小鼠尾靜脈注射0.25%伊文思藍，10ml/kg，小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液10ml/kg，15min后將小鼠處死，腹腔注射0.9%氯化鈉溶液6ml沖洗，腹腔洗出液2000r/min 離心10min(r=8cm)，取上清液體用紫外-分光光度計于590nm波長處測定吸光度（A）值。

1.5 統計學方法 應用SPSS17.0版軟件進行統計學分析，計量數據以均數±標準差（ ±s）表示，采用t檢驗，以P〈0.05表示差異有統計學意義。

2.結果

2.1 對醋酸小鼠扭體反應的影響 見表1。.三顆針水提物大、中劑量組扭體反應次數明顯少于空白對照組，差異有統計學意義（P〈0.01或P〈0.05）。提示三顆針水提物對醋酸致小鼠扭體反應有抑制作用。

表1 5組小鼠扭體反應測定結果Tab.1 Determination results of twisting test on five groups of mice. ±s.n=10

2.2 對熱板儀致小鼠疼痛的影響. 見表2。.三顆針水提物大劑量組小鼠30、60、90、120min痛閾值均明顯低于空白對照組，差異有統計學意義（P〈0.01，P〈0.05）；中劑量組小鼠60min 痛閾值明顯低于空白對照組，差異有統計學意義（P〈0.05）；小劑量組小鼠120min痛閾值明顯低于空白對照組，差異有統計學意義（P〈0.05）。提示三顆針水提物可提高熱板致小鼠疼痛的痛閾。

表2 5組小鼠不同時間痛閾值測定結果Tab .2 determination results of pain threshold in five groups of mice at different time points. s, ±s ,n=10

2.3 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響.見表3。 三顆針水提物大、中劑量組耳腫脹明顯低于空白對照組，差異有統計學意義（P〈0.01，P〈0.05）。提示三顆針水提物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹有抑制作用。

表3 5組小鼠耳腫脹實驗結果Tab.3 determination results of pain threshold in five groups of mice at different time points. s, ±s ,n=10

2.4 對小鼠腹腔通透性的影響 見表4。 三顆針水提物小、中劑量組腹腔通透性A值明顯低于空白對照組，差異有統計學意義（P〈0.05）。提示三顆針水提物對0.6%醋酸致小鼠腹腔通透性增加有抑制作用。

表4 5組小鼠腹腔通透性吸光度值測定結果Tab.4 Absorbance value of peritoneal permeability in five groups of mice.±s.n=10

3 討論

主治：肝炎。配方：三顆針（三錢），地星宿（一兩），木通（一兩），煎水內服 ，每天三次、每次100ml，本土苗醫用此配方治好無數個肝炎患者。由此可做猜想其中應有一味或一味以上的藥材有抗炎鎮痛作用。在本次實驗中已經得到論證，所以在探尋某未知物是否有抗炎鎮痛作用時可以運用此實驗方法。小鼠熱板法屬于反射性疼痛模型，對僅有外周鎮痛作用的非甾體抗炎藥不敏感，是區分麻醉性鎮痛藥和非甾體抗炎藥有效模型【19】。

實驗結果表明，三顆針水提物大、中劑量對醋酸致小鼠扭體反應次數有抑制作用；大劑量三顆針水提物在30、60、90、120min 可高提熱板致小鼠疼痛的痛閾；三顆針水提物中劑量組在60min可提高熱板致小鼠疼痛的痛閾；三顆針水提物小劑量組小鼠在120min痛閾值高于空白對照組。

炎癥是機體對組織損傷或致炎因子侵入所產生的防御為主的反應。炎癥的主要表現為紅、腫、熱、痛。實驗結果表明，三顆針水提物大、中劑量可抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹度產生；三顆針水提物大、小劑量可抑制0.6%醋酸所致小鼠腹腔通透性增加。

4 結論

三顆針水提物具有顯著的鎮痛效果，三顆針水提物大劑量組的鎮痛效果最好，其鎮痛機制目前仍不清楚，需要進一步實驗論證。