不同原料血漿制備的冷沉淀對凝血因子Ⅷ及纖維蛋白原的影響 楊

顏菁 王艷清 謝冬梅 龔嘉聰

[摘要]目的 分析由四種原料新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀所含凝血因子Ⅷ（FⅧ）及纖維蛋白原（Fg）含量，為臨床提供優質安全的冷沉淀制劑。方法 隨機抽取2015年4月我站采集的20袋（ACD-B配方）全血，在6 h內按照成分制備標準操作規程制備四種新鮮冰凍血漿[新鮮冰凍血漿（FFP）、濾白冰凍血漿、滅活冰凍血漿、濾白滅活冰凍血漿]并速凍;1周后將制備的FFP在低溫水浴箱（4±2）℃融化后，用虹吸法原理制備出四種冷沉淀（冰凍血漿冷沉淀、濾白冷沉淀、滅活冷沉淀、濾白滅活冷沉淀）并速凍;冰凍1周后在37℃水浴箱融化后檢測凝血因子FⅧ含量及Fg含量。結果 FFP冷沉淀、濾白冷沉淀、滅活冷沉淀、濾白滅活冷沉淀的FⅧ及Fg含量依次為（1.506±0.351）、（1.352±0.217）、（1.184±0.235）、（0.724±0.281）IU/ml和（3.055±0.474）、（2.801±0.313）、（1.671±0.215）、（1.552±0.162）g/L，不同冷沉淀間的FⅧ及Fg含量比較，差異有統計學差異（P<0.05）。FFP冷沉淀、濾白冷沉淀、滅活冷沉淀、濾白滅活冷沉淀的FⅧ及Fg回收率依次為100.0%、89.7%、78.6%、48.1%和100.0%、91.7%、54.7%、50.8%，不同冷沉淀的回收率比較，差異有統計學差異（P<0.05）。結論 采用不同原料、不同方法制備出的冷沉淀FⅧ及Fg含量有所差別，FFP冷沉淀、濾白冷沉淀、滅活冷沉淀的FⅧ及Fg含量較高且符合國家標準。

[關鍵詞]新鮮冰凍血漿;凝血因子;纖維蛋白原;冷沉淀

[中圖分類號] R943? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）8（c）-0041-03

[Abstract] Objective To analyze the content of clotting factor Ⅷ （FⅧ） and fibrinogen （Fg） in cold precipitation prepared from fresh frozen plasma of four kinds of raw materials and provide high quality and safe cold precipitation preparations for clinical use. Methods A total of 20 bags of whole blood （ACD-B formula） collected by our station in April 2015 were randomly sampled， four kinds of fresh frozen plasma （cryoprecipitation of frozen plasm [FFP]， filtered frozen plasma， inactivated cold precipitation， filtering inactivated frozen plasm） were prepared and quick freezing in 6 hours according to the standard operating procedures for preparation. Four kinds of fresh frozen plasma prepared after one week were melted in a low temperature water between（4±2）℃， four kinds of cold precipitates were prepared by siphon method， and quick freezing. The content of FⅧ and Fg were detected after thawing in 37℃ water bath after 1 week of freezing. Results FFP cryoprecipitate， filtered white cold precipitate， inactivated cryoprecipitate， filtered white inactivated cryoprecipitate FⅧ and Fg content were （1.506±0.351）， （1.352±0.217）， （1.184±0.235）， （0.724±0.281） IU/ml and （3.055±0.474）， （2.801±0.313）， （1.671±0.215）， （1.552±0.162） g/L， there were statistically significant differences in FⅧ and Fg content between different cryoprecipitates （P<0.05）. The FⅧ and Fg recovery rates of FFP cryoprecipitate， filtered white cold precipitation， inactivated cryoprecipitate and whitening inactivated cryoprecipitate were 100.0% and 89.7%， respectively. 78.6%， 48.1% and 100.0%， 91.7%， 54.7%， 50.8%， the recovery rates of different cryoprecipitates were statistically different （P<0.05）. Concluison The contents of FⅧ and fibrinogen in cold precipitation， filter white cold precipitation and inactivated cold precipitation of FP are higher and meet the national standards.

[Key words] Fresh frozen plasma; Clotting factor; Fibrinogen; Cold precipitation

冷沉淀是采用特定的提取方法，將冰凍血漿在低溫條件下（一般為4℃）融化后的一些不溶性物質所提取出來的，這些不溶性物質中含有凝血過程物質，如纖維蛋白原（Fg）、凝血因子Ⅷ（FⅧ）等。在臨床工作中，由于血漿制品的缺乏，冷沉淀被廣泛用于那些由凝血功能障礙導致的疾病[1-3]。目前在血液中心工作中，制備冷沉淀時主要有新鮮冰凍血漿（FFP）、新鮮病毒滅活冰凍血漿（滅活FFP）、新鮮濾白冰凍血漿（濾白FFP）、新鮮濾白病毒滅活冰凍血漿（濾白滅活FFP），而據以往臨床研究報道，不同的方法制備出的冷沉淀其質量不同，而反應冷沉淀質量的兩個重要指標即是FⅧ及Fg含量[3-4]，本研究探討這四種冷沉淀制備方法所制備出的冷沉淀FⅧ及Fg的差異，現報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源

隨機抽取2015年4月我站采集的（ACD-B配方）400 ml全血20袋，所有血液來源均有記錄，且這些血源的獻血者和血液質量均符合國家相關規定的要求[5-6]，這些血制品保存于2～6℃條件下，并在6 h內制成冰凍血漿制品。本研究經我中心醫學倫理委員會審核批準。

1.2方法

血漿及冷沉淀制備方法及過程。將400 ml全血分成2份，每份200 ml，1份接駁5聯袋，另1份接駁濾白血袋。將接駁五聯袋的200 ml全血離心制備100 ml新鮮血漿，平均分成2份，1份為新鮮血漿，另1份進行用MB-P病毒滅活制備成滅活新鮮血漿。接駁濾白血袋的200 ml全血經濾白后以同樣的方法離心制備成濾白新鮮血漿和濾白滅活新鮮血漿。將4種新鮮血漿各接駁一空袋，并各留取5 ml樣本，將血漿和樣本速凍后放入低溫冰箱冰凍保存。4種血漿冰凍1周后取出，采用虹吸法制備冷沉淀，剩余血漿即為GRP，再放入冰箱冰凍保存。1周后取出上述4種FFP樣本和4種CRP血漿在37℃水浴箱融化后進行檢測。

1.3檢測指標

采用凝固法檢測FⅧ和Fg含量。

1.3.1試劑材料? 凝血因子試劑盒購于南京建成生物工程公司，操作流程均按照說明書進行;其余一次性使用血袋等制品均取用我站統一購買的一次性物品。

1.3.2儀器設備? 大容量低溫離心機;血漿速凍機;病毒滅活機;醫用低溫冰箱;分光光度計;全自動血凝儀;無菌接管機。以上儀器均由我站設備科提供安裝，檢測時這些儀器均處于正常工作狀態，保證測量值的準確。

1.4統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據處理，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用F檢驗，兩組間比較采用LSD-t檢驗;計數資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1四種冷沉淀FⅧ、Fg測定結果的比較

FFP冷沉淀、濾白冷沉淀、滅活冷沉淀、濾白滅活冷沉淀的FⅧ及Fg含量比較，差異有統計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2四種冷沉淀FⅧ、Fg回收結果的比較

本試驗檢測出FFP冷沉淀、濾白冷沉淀、滅活冷沉淀、濾白滅活冷沉淀的FⅧ及Fg回收率依次為100.0%、89.7%、78.6%、48.1%和100.0%、91.7%、54.7%、50.8%。濾白滅活冷沉淀Ⅷ及Fg損失率接近50.0%。各種冷沉淀的FⅧ及Fg回收率比較，差異有統計學意義（P<0.05）。

3討論

冷沉淀是冰凍血漿在4℃左右產生的不溶性白色沉淀物。冷沉淀是采用特定的提取方法，將冰凍血漿在低溫條件下（一般為4℃）融化后的一些不溶性物質所提取出來的，這些不溶性物質中含有凝血過程物質，如纖維蛋白原、凝血因子等。在臨床工作中，由于血漿制品的缺乏，冷沉淀被廣泛用于那些由凝血功能障礙導致的疾病。同時，目前對冷沉淀的制作主要有FFP、滅活FFP、濾白FFP、濾白滅活FFP，受具體血站條件限制，其選擇的制作方法有所不同[7-8]。大部分血站為了保障冷沉淀的質量，通常對血漿不做病毒滅活處理或濾除白細胞制作冷沉淀[9]。由于輸血可引起血源性疾病的傳播和同種免疫反應，對所有的血液制劑來說風險較高的是輸注冷沉淀，更容易使病毒傳染[10-11]。

國內的研究[7-8]已經證明，針對冷沉淀的制作，采用亞甲藍光化學滅活冷沉淀中的病毒被認為對于冷沉淀是一種高效、安全的滅活方式，目前在我國僅有此法被批準應用于冷沉淀的滅活。亞甲藍光化學滅活技術的原理主要是利用亞甲藍與病毒的含有磷酸雙分子層的模型結構相結合，其后在可見光的照射下發生作用而使得病毒無法復制和生存，以此達到滅活的目的[12-13]。雖然亞甲藍光化學滅活法對病毒的滅活十分有效，但是此法僅僅對游離在胞質外的病毒有效，而對在采集血液前已經寄生于細胞中的病毒卻無效。由于冷沉淀中含有的細胞多數為白細胞，所以如何除去白細胞中的病毒或直接除去白細胞成為廣大臨床輸血者共同關注的熱點問題，由于白細胞比冷沉淀的有效成分-凝血因子的直徑更大，所以對冷沉淀采用特制的濾過膜能有效的將白細胞去除[14-15]。

白細胞過濾器可降低非溶血性輸血發熱反應的發生率，降低輸血后移植物抗宿主病（GVHD）的發生率，防止部分輸血相關病毒的傳染，預防HLA同種異體免疫反應引起的血小板輸注無效，降低了輸血風險[16-17]。目前，國外采用的濾白冷沉淀制備方法在國內已被各個供血機構廣泛采用，而增加濾白冷沉淀的工序無疑會對冷沉淀的成分產生影響[18]。而我國現行冷沉淀質量控制標準中，明確規定了在200 ml冷沉淀中，FⅧ的含量應>80 IU，而對Fg的水平并未做明確規定。而經過本次檢測，采用濾白冰凍血漿制備的冷沉淀達到了質量控制標準因此可在臨床推廣應用。另一方面，對冰凍血漿進行滅活處理也能達到降低血液輸注風險的目的，因為滅活處理技術使得各種病毒失去活性，喪失了感染能力，可降低輸注風險，研究結果顯示采用滅活新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀中的FⅧ的含量達到質量控制標準因此可在臨床應用。而濾白細胞和病毒滅活同時進行制備的濾白滅活冷沉淀，其Ⅷ及Fg含量均未達到國家標準，暫不能用于臨床使用。

本研究結果提示，單采用新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀，雖然FⅧ的含量達到了質量控制標準，但其由于獻血人員健康狀況不確定、未經病毒滅活處理及可能因白細胞存在而發生異體免疫反應，使得它的應用受到較大限制;而采用了濾白和滅活兩道工序的濾白滅活冷沉淀，未能達到質量控制標準不能使用。濾白冷沉淀和滅活冷沉淀由于避免了上述風險且質量達標，故可推廣使用。

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（收稿日期：2019-05-20? 本文編輯：崔建中）