輔助性T細(xì)胞22及其細(xì)胞因子水平在慢性乙型肝炎病人中的變化特點(diǎn)及臨床意義

何進(jìn)偉，宋梅，鄧家艷，李樂，汪明星

輔助性T細(xì)胞22（Th22）是最近發(fā)現(xiàn)的輔助性T細(xì)胞新亞群［1］，表達(dá)CC類趨化因子受體（CCR）6、CCR4和CCR10，并產(chǎn)生白細(xì)胞介素（IL）-22、IL-26和IL-13，其中IL-22是最主要的效應(yīng)因子［2］。同時，

Th22不產(chǎn)生干擾素（IFN），IL4和IL-7，屬于獨(dú)立于Th1、Th2和Th17的細(xì)胞亞群［3］。Th22主要參與自身免疫性疾病、感染性疾病的免疫調(diào)節(jié)。臨床證實(shí)，Th22細(xì)胞參與惡性腫瘤、炎癥性疾病或者自身免疫性疾病的發(fā)生過程，激活自身T淋巴細(xì)胞的組織損傷作用，上調(diào)自然殺傷性T淋巴細(xì)胞的活性，促進(jìn)肝臟上皮細(xì)胞的損傷和間質(zhì)細(xì)胞的纖維化過程［4］；效應(yīng)因子IL-22的上升能夠加劇炎癥反應(yīng)，提高炎癥性細(xì)胞對于肝臟的浸潤程度［5-6］。本次研究選取慢性乙型肝炎（CHB）病人40例，探討Th22細(xì)胞、IL-22水平的表達(dá)變化，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年1月至2018年3月在連州市人民醫(yī)院治療的CHB病人40例（觀察組），納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）診斷符合中華醫(yī)學(xué)會傳染病學(xué)分會制定的標(biāo)準(zhǔn)；（2）近6個月內(nèi)未服用過抗病毒藥物及糖皮質(zhì)激素類藥物；（3）病人年齡≥18歲；（4）病人及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并有其他類型肝炎病毒感染者；（2）有自身免疫性疾病或免疫缺陷病；（3）有肝癌或其他惡性腫瘤者。同時選取肝功能正常健康者40例作為對照組，觀察組和對照組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

表1 慢性乙型肝炎病人40例與對照組40例一般資料比較

1.2 檢測方法Th22輔助性T淋巴細(xì)胞的檢測：清晨采集空腹靜脈血，按照10 000 r/min的離心速度進(jìn)行離心分離，加入5 mL抗凝劑，加入淋巴細(xì)胞分離液，按照密度梯度離心法分離淋巴細(xì)胞，ARMI 1640溶液洗滌3次。采用流式細(xì)胞儀雙標(biāo)法進(jìn)行CD4+PC5淋巴細(xì)胞的檢測。相關(guān)標(biāo)記操作于5Ml抗凝管中進(jìn)行，100 uL全血與CD4+FITC抗體室溫反應(yīng)25 min，采用紅細(xì)胞裂解液optiLYse C溶血素溶解紅細(xì)胞，PBS液體洗滌3遍，每次5 min，0.9%氯化鈉溶液重新懸浮細(xì)胞，上機(jī)檢測（FACS calibur流式細(xì)胞儀購自美國BD公司，流式細(xì)胞抗體購自羅氏檢測公司）。

IL-22檢測：采集入院后靜脈血，離心后收集上清液，采用免疫發(fā)光法檢測IL-22水平，檢測儀器為美國Bio-Bad全自動酶標(biāo)儀，配套試劑盒購自羅氏檢測公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法統(tǒng)計分析采用SPSS 19.0軟件，計量資料采用±s表示，兩組間比較使用成組t檢驗，多組間比較使用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數(shù)資料比較使用χ2檢驗。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組和對照組血清Th22、IL-22水平比較觀察組Th22細(xì)胞、IL-22水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 慢性乙型肝炎病人40例與對照組40例血清Th22、IL-22水平比較/± s

表2 慢性乙型肝炎病人40例與對照組40例血清Th22、IL-22水平比較/± s

組別對照組觀察組t值P值例數(shù)40 40 Th22細(xì)胞/%0.89±0.22 2.57±0.48 20.123 0.000 IL-22/（pg/mL）12.20±3.11 25.69±5.30 13.884 0.000

2.2 觀察組不同ALT水平病人Th22、IL-22水平比較根據(jù)病人ALT水平分為3組，即ALT＜2倍正常值，2～5倍正常值，＞5倍正常值組。ALT＞5倍正常值病人Th22細(xì)胞、IL-22水平明顯高于2～5倍正常值和＜2倍正常值病人，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 慢性乙型肝炎病人40例不同ALT水平病人Th22、IL-22水平比較/± s

表3 慢性乙型肝炎病人40例不同ALT水平病人Th22、IL-22水平比較/± s

注：與＜2倍正常值比較，aP＜0.05；與2～5倍正常值比較，bP＜0.05

IL-22/（pg/mL）21.89±4.10 22.71±3.72 30.02±5.22ab 13.254 0.000 ALT水平＜2倍正常值2～5倍正常值＞5倍正常值F值P值例數(shù)11 17 12 Th22細(xì)胞/%2.03±0.63 2.27±0.89 3.10±0.90ab 5.474 0.001

2.3 觀察組不同HBV DNA水平病人Th22、IL-22水平比較不同HBV DNA病人Th22細(xì)胞、IL-22水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表4 不同HBVDNA載量慢性乙型肝炎病人40例Th22、IL-22水平比較/± s

表4 不同HBVDNA載量慢性乙型肝炎病人40例Th22、IL-22水平比較/± s

病毒載量＜103copies/mL 103～106copies/mL＞107copies/mL F值P值例數(shù)8 26 6 Th22細(xì)胞/%2.25±0.98 2.48±0.84 2.71±0.94 0.473 0.234 IL-22/（pg/mL）24.37±6.12 25.81±7.93 26.20±8.95 0.127 0.512

2.4 相關(guān)性分析將CHB病人ALT、HBV DNA、Th22、IL-22水平進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：Th22、IL-22與ALT呈正相關(guān)（r＝0.413和0.367，P＝0.002和0.012），Th22與 IL-22呈正相關(guān)（r＝0.487，P＝0.003）。

3 討論

IL-22作為Th22主要效應(yīng)因子能夠通過對于下游糖蛋白的結(jié)合影響肝臟上皮細(xì)胞的囊泡運(yùn)輸機(jī)制和肝臟上皮細(xì)胞的能量代謝［7］，促進(jìn)ATP的利用障礙，還能誘導(dǎo)下游炎癥因子的富集［8］，促進(jìn)IL-6或者IL-10等的表達(dá)濃度的上調(diào)，實(shí)現(xiàn)對于肝臟間質(zhì)細(xì)胞的浸潤［9］，代償性膠原纖維成分的增生［10］；Th22細(xì)胞的上調(diào)，能夠通過誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的激活，提高T淋巴細(xì)胞的抗原提呈作用，增加T淋巴細(xì)胞相關(guān)的自身性免疫損傷［11］。部分研究者認(rèn)為Th22細(xì)胞或者IL-22的上升能夠?qū)е翪HB病人治療預(yù)后的惡化，提高病人的致殘率［12］，但缺乏對于Th22細(xì)胞、IL-22的表達(dá)與肝功能或者HBV-DNA的關(guān)系研究。

本研究發(fā)現(xiàn)Th22細(xì)胞或者IL-22的表達(dá)濃度均明顯的上升，預(yù)示Th22細(xì)胞和IL-22均延緩CHB的病情進(jìn)展，主要與以下因素有關(guān)［13-14］：（1）Th22細(xì)胞的上調(diào)導(dǎo)致CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的功能紊亂，肝臟上皮細(xì)胞的損傷性損傷程度的增加；（2）IL-22的表達(dá)能夠激活下游MAPK炎癥性信號通路，下游中性粒細(xì)胞的激活，提高對于肝臟組織的浸潤程度。張沛楓與趙云［15］對免疫性因素與CHB的發(fā)病關(guān)系分析，發(fā)現(xiàn)在CHB病人外周血中，IL-22的表達(dá)濃度可平均上升30%以上，肝臟纖維化較為明顯或者治療敏感性較差的病人中，自身免疫性因子的表達(dá)紊亂更為明顯。本次研究發(fā)現(xiàn)肝功能損傷程度越高，Th22細(xì)胞或者IL-22的表達(dá)上調(diào)與肝功能損傷程度密切相關(guān)，這主要由于Th22細(xì)胞或者IL-22的表達(dá)上升促進(jìn)了肝臟上皮細(xì)胞的線粒體損傷，促使肝臟上皮細(xì)胞膜完整性的破壞。本次研究中未發(fā)現(xiàn)Th22細(xì)胞或者IL-22的表達(dá)與病人體內(nèi)的HBV DNA的表達(dá)具有關(guān)系，說明Th22細(xì)胞或者IL-22的表達(dá)不會影響乙肝病毒的復(fù)制過程。綜上所述，Th22、IL-22與ALT呈正相關(guān)，Th22和IL-22水平明顯升高，與ALT存在一定相關(guān)性，Th22細(xì)胞或者IL-22參與CHB病情進(jìn)展過程。