實時熒光PCR檢測乙肝病毒DNA的效果評價

方志軍

摘要：目的 ?觀察應用實時熒光PCR檢驗法檢測乙肝病毒DNA的效果，為臨床提高診斷乙型肝炎病毒的準確性提供思路。方法 ?選取2015年11月～2018年7月于本院就診的458例乙型肝炎患者作為研究對象，所有患者均經(jīng)標準的abbot藥盒檢測確診，其中大三陽患者241例，小三陽患者217例。患者入院后均采集空腹靜脈血，制樣本后采用酶聯(lián)免疫吸附檢驗法和實時熒光PCR檢驗，比較兩種檢驗方法對患者乙肝類型的陽性檢出率。結果 ?實時熒光PCR檢驗法對大三陽的陽性檢出率為95.43%，小三陽的陽性檢出率為69.58%，均高于酶聯(lián)免疫吸附檢驗法的85.06%、55.76%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 ?實時熒光PCR檢驗法可直觀的反映乙型肝炎病情狀況，具有較高的診斷效果，臨床醫(yī)師可在實際工作中根據(jù)患者經(jīng)濟、病情等綜合因素進行選用。

關鍵詞：實時熒光PCR檢驗;乙肝病毒DNA;酶聯(lián)免疫吸附檢驗法;乙型肝炎

中圖分類號：R446.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.22.062

文章編號：1006-1959（2019）22-0175-03

Evaluation of the Effect of Real-time Fluorescent PCR on Detection of Hepatitis B Virus DNA

FANG Zhi-jun

（1.Department of Clinical Laboratory，the Fourth Hospital of Huangshi，Huangshi 435006，Hubei，China;

2.Yiyang Medical Laboratory Of Huangshi，Huangshi 435006，Hubei，China）

Abstract：Objective ?To observe the effect of real-time fluorescent PCR assay for detecting hepatitis B virus DNA， and to provide ideas for clinical improvement of hepatitis B virus accuracy. Methods ?A total of 458 patients with hepatitis B who were admitted to our hospital from November 2015 to July 2018 were enrolled in the study. All patients were diagnosed by standard abbot kit. Among them， 241 patients with Dasanyang patients and 217 patients with Xiaosanyang patients. example. Fasting venous blood was collected from all patients after admission. After the samples were prepared， enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and real-time fluorescent PCR were used to compare the positive detection rates of the two test methods for patients with hepatitis B type. Results ?The positive detection rate of Dasanyang by real-time fluorescent PCR assay was 95.43%， and the positive detection rate of Xiaosanyang was 69.58%. Both were higher than 85.06% and 55.76% of the enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA），the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ?Real-time fluorescent PCR assay can directly reflect the status of hepatitis B， and has a high diagnostic effect. Clinicians can choose according to the comprehensive factors such as patient's economy and condition in actual work.

Key words：Real-time fluorescent PCR test;Hepatitis B virus DNA;Enzyme-linked immunosorbent assay;Hepatitis B

近年來，隨著乙型肝炎（viral hepatitis type B）患者比例在世界各地的不斷增長，使得乙肝疾病的診療受到越來越多的關注和重視。乙肝作為臨床常見的一類慢性肝炎，具有較高的感染率和轉(zhuǎn)化率，患者感染乙肝病毒后，隨著肝臟炎性反應過程的進行可能發(fā)展為肝硬化或肝癌，對患者生命安全造成嚴重威脅，故需要在臨床中采用具有較高檢出率的方法對患者予以診斷。但由于乙型肝炎類型較為復雜，臨床上無法對各類抗原實現(xiàn)有效檢驗，存在一定的漏診概率，影響患者后期診療進度和效果[1，2]。因此，本研究通過比較應用實時熒光PCR檢驗法及酶聯(lián)免疫吸附檢驗法診斷乙型肝炎的效果，旨在為臨床提高診斷乙型肝炎的準確性提供思路，特選取本院458例乙肝患者展開研究，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 ?選取2015年11月～2018年7月于湖北省黃石市第四醫(yī)院接受診療的乙肝患者458例作為研究對象，經(jīng)過標準abbot藥盒檢測確診大三陽患者241例，小三陽患者217例。大三陽患者中男135例，女106例，年齡19～45歲，平均年齡（32.08±4.21）歲，病程2～13年，平均病程（7.42±2.58）年，經(jīng)免疫學檢驗后乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝核心抗體（抗HBC）三項檢驗結果均為陽性;小三陽患者中，男126例，女91例，年齡20～41歲，平均年齡（30.46±4.12）歲，病程1～11年，平均病程（6.15±2.34）年。大三陽與小三陽患者年齡、性別及病程比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），兩類檢驗法最終檢驗結果可對比。

1.2檢驗設備及儀器 ?實時熒光PCR檢驗采用賽默飛世爾科技（中國）有限公司生產(chǎn)的實時熒光定量 PCR 檢驗儀，及配套檢驗試劑。酶聯(lián)免疫吸附檢驗法采用上海酶聯(lián)生物科技有限公司生產(chǎn)的人乙肝兩對半（HBV Casset）ELISA試劑盒。

1.3檢驗方法 ?所有患者在入院第2天取清晨空腹狀態(tài)肘靜脈血3～5 ml，離心機3000 r/min分離血清，血清樣本完成后儲存于設備箱中，備用。其后按照乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）的順序?qū)λ谢颊哐鍢颖具M行酶聯(lián)免疫吸附與實時熒光PCR檢驗。檢驗操作需嚴格按照儀器及試劑盒說明進行，避免檢驗結果偏差[3]。

1.4觀察指標 ?比較兩種檢驗方法對患者乙肝類型的陽性檢出率。大三陽診斷指標：HBsAg（+）、HBsAb（-）、HBeAg（+）、HBeAb（-）、HBcAb（+） ，表明患者處于乙肝急性或慢性期且病毒復制活躍，具有較高傳染性。小三陽診斷指標：HBsAg（+）、HBsAb（-）、HBeAg（-）、HBeAb（+）、HBcAb（+） ，表明患者處于急性乙肝病毒感染恢復期，且攜帶有慢性乙肝表面抗原。

1.5統(tǒng)計學方法 ?本研究數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 25.0統(tǒng)計學軟件統(tǒng)計處理，計數(shù)資料用（n，%）表示，比較行？字2檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2結果

實時熒光PCR檢驗法對大三陽、小三陽患者的陽性檢出率均高于酶聯(lián)免疫吸附檢驗法，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

3討論

乙型肝炎作為一種具有較高傳染率的肝臟疾病，傳播途徑多種多樣，其中血液與母嬰傳播的感染率較高。患者感染后，若無法及時診斷和治療，則極易在急性期轉(zhuǎn)化為慢性乙肝，加重患者病情。目前臨床中對于乙肝的診斷主要采用酶聯(lián)免疫吸附檢驗法，通過試劑盒對患者血清進行免疫反應檢測，但僅可評估患者病情進展，無法實現(xiàn)對實際病毒載量和傳染性的檢驗，且易由于操作不當影響檢驗結果[4，5]。

本研究結果顯示，實時熒光PCR檢驗法對大三陽患者的陽性檢出率為95.43%，小三陽患者的陽性檢出率為69.58%，均高于酶聯(lián)免疫吸附檢驗法的85.06%、55.76%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。分析原因，實時熒光PCR檢驗法對血清中各類乙肝抗原、抗體進行染色，利用熒光染料在檢驗中表現(xiàn)出的特殊波長，便于熒光探針對反應信號的收集，從而實現(xiàn)對患者乙肝抗原、抗體載量的實時檢測。除此之外，實時熒光PCR檢驗法對于部分乙肝前期且未在酶聯(lián)免疫吸附檢驗中檢出乙肝表面抗原的患者，具有較高的診斷特異性，提高診斷準確性。實時熒光PCR檢驗對患者體內(nèi)乙肝病毒的變異性具有較好的檢測效果，能夠?qū)Σ《镜母腥拘赃M行有效評估，降低感染、傳染風險，且相較于傳統(tǒng)ELISA檢測法，實時熒光PCR檢測可對乙肝病毒復制情況及數(shù)量進行準確反映。但是，該方法仍存在一定的缺陷，因為即使在HBeAg指標轉(zhuǎn)陰及患者肝功基本復常的情況下，患者體內(nèi)仍存在少量HBV-DNA，且HBV表達在實際檢驗操作中受人體免疫等因素影響較為明顯，導致在實際應用中，雖然實時熒光PCR檢驗法可對乙肝各類型及乙肝病毒載量進行準確反映，但無法對恢復期患者的乙肝病毒活躍性進行檢測或受到患者自身健康狀況影響檢驗結果缺乏可參考性，且檢測費用相對較高，故需要在實際應用中根據(jù)患者實際選取檢驗方法。

乙肝治療的根本目的在于長期持續(xù)抑制病毒的復制，阻止疾病進展。在多個國家和地區(qū)的慢性乙肝防治指南中，均將實時熒光PCR檢驗法檢測不到HBV-DNA作為停藥的重要指征。定量檢測血清中的HBV-DNA是乙肝抗病毒治療過程中療效評估和治療終點判定的關鍵因素，乙肝病毒DNA檢測對用藥的劑量、用藥時間、是否需要聯(lián)合用藥以及用藥效果等提供了重要參考依據(jù)。同時，乙肝病毒DNA檢測還可以反映病毒復制的活躍程度，間接反映機體的免疫應答水平，對乙肝的治療起到輔助作用，可以增強患者的治療信心。

綜上所述，在臨床診斷中采用實時熒光PCR檢驗法，可對患者乙肝病情相較為直觀的反映，且對患者病情具有較好的診斷效果，可在實際診療中根據(jù)患者經(jīng)濟、病情等綜合因素進行選用。

參考文獻：

[1]陳艷.實時熒光PCR檢驗用于乙肝病毒DNA檢測的臨床價值[J].臨床研究，2018，26（10）：146-148.

[2]姚兆基.實時熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA和乙肝病毒標志物的價值[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志，2017，49（4）：485-486.

[3]杜鍇.實時熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA的價值分析與研究[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2017，11（1）：55-57.

[4]汪圣強，耿合員，殷鵬飛，等.實時熒光PCR在乙肝病毒DNA檢測中的臨床意義[J].中國醫(yī)學工程，2015，23（3）：29-30.

[5]杜清標.實時熒光PCR檢測乙肝病毒DNA的臨床意義探析[J].醫(yī)學信息，2015，28（45）：73-74.

收稿日期：2019-6-5;修回日期：2019-6-19

編輯/錢洪飛