鐵皮石斛及其凍干粉對免疫抑制小鼠的免疫調節作用差異研究

張靜　朱雅琴　祝宇龍

摘要? [目的]探討鐵皮石斛及其凍干粉對提升免疫抑制小鼠的免疫調節作用差異。[方法]120只SPF級昆明雄性小鼠分為空白對照組、環磷酰胺模型組、鐵皮石斛組和鐵皮石斛凍干粉組。兩組給藥組連續灌胃30 d后，24 h內模型組、鐵皮石斛及其凍干粉組一次性腹腔注射200 mg/kg的環磷酰胺免疫抑制造模。試驗結束后測定胸腺系數、脾臟系數、足趾腫脹度，以及血清中的細胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6的含量。[結果]鐵皮石斛及其凍干粉均可以升高免疫抑制小鼠的胸腺和脾臟系數;增加免疫抑制小鼠的足趾腫脹度;上調免疫抑制小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2和IL-6的水平。[結論]鐵皮石斛及其凍干粉對環磷酰胺引起的免疫抑制具有明顯的改善作用，且后者藥效更好。

關鍵詞? 鐵皮石斛;凍干粉;環磷酰胺;細胞因子;免疫調節

中圖分類號? R285.5??? 文獻標識碼? A

文章編號? 0517-6611（2019）24-0180-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.24.054

Study on the Difference of Immunomodulatory Effects of Dendrobium officinale and Its Lyophilized Power on Immunosuppressed Mice

ZHANG Jing1，2，3，4，ZHU Ya-qin1，2，4，ZHU Yu-long1，2，4? （1.School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230012;2.Anhui Province Key Laboratory of Chinese Medicine Formula，Hefei，Anhui 230012;3.Institute of Pharmaceutics，Anhui Academy of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230012;4.Synergetic Innovation Center of Anhui Authentic Chinese Medicine Quality Improvement，Hefei，Anhui 230012）

Abstract? [Objective]The research aimed to study the difference in immunomodulatory effects of Dendrobium officinale and its lyophilized power on immunosuppressed mice.[Method]120 SPF Kunming male mice were divided into control group，cyclophosphamide modle group，Dendrobium officinale and its lyophilized power group.Dendrobium officinale and its lyophilized power groups were continuously administrated for 30 days.At 24 hours before the end of the experiment，the model group，Dendrobium officinale and its lyophilized power group were intraperitoneally injected with 200 mg/kg cyclophosphamide.At the end of the experiment，the thymus index，spleen index，DTH，and serum cytokines IFN-γ，IL-2 and IL-6 were measured.[Result]Dendrobium officinale and its lyophilized power increased the thymus index，spleen index and toe swelling，up-regulated the levels of IFN-γ，IL-2 and IL-6 in the serum of immunosuppressed mice.[Conclusion]Dendrobium officinale and its lyophilized power has a significant improvement on the immunosuppression caused by cyclophosphamide，and the latter is better.

Key words? Dendrobium officinale;Lyophilized power;Cyclophosphamide;Cytokine;Immunoregulation

基金項目? 安徽省科技重大專項（17030801015）。

作者簡介? 張靜（1996—），女，安徽宿州人，碩士研究生，研究方向：藥劑學。

收稿日期? 2019-07-02

鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）為蘭科石斛屬植物，位列中華九大仙草之首，是一種名貴的中草藥。鐵皮石斛中主要活性成分為多糖、生物堿、氨基酸、芐類及其衍生物、揮發性成分以及微量元素等[1-4]。鐵皮石斛因其具有免疫調節作用、抗腫瘤和抗氧化等特性[5-7]，越來越受到現代醫學的關注。而在實際應用中，鐵皮石斛的應用人群往往是免疫力低下者。鐵皮石斛凍干粉不僅最大限度地保留了鐵皮石斛有效成分的生物活性和臨床有效性，并且生物活性更高、臨床有效性更好，更容易被人體消化吸收，能夠更好地發揮藥效。環磷酰胺（cyclophosphamide，CP）屬于烷化劑類免疫抑制劑，是可阻斷復制，破壞DNA結構從而導致細胞死亡的一種細胞毒性化合物。因此為了探討鐵皮石斛及其凍干粉在增強免疫力功效方面的差異性，筆者采用CP建立免疫抑制動物模型[8]，通過比較鐵皮石斛凍干粉和鐵皮石斛免疫調節藥效，為鐵皮石斛凍干粉的藥用價值提供依據，也為其深層次的開發和應用打下基礎。

1? 材料與方法

1.1? 儀器? 離心機（TG16-WS，常州市萬豐儀器制造有限公司）;十萬分之一電子天平（BT 25 S型，賽多利斯科學儀器北京有限公司）;酶標儀（RT-6000，雷杜生命科學有限公司）;恒溫水浴鍋。

1.2? 試材

鐵皮石斛購買于安徽亳州藥材市場，由安徽中醫藥大學俞年軍老師鑒定為蘭科石斛屬植物鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）的干燥根莖，鐵皮石斛純粉和鐵皮石斛凍干粉是于安徽中醫藥大學藥學院藥劑實驗室制得。環磷酰胺購自江蘇恒瑞醫藥股份有限公司;ELISA試劑盒購于武漢基因美生物科技有限公司;綿羊紅細胞（SRBC）、生理鹽水等。

1.3? 試驗動物及分組處理

健康SPF級昆明雄性小鼠120只，來自安徽醫科大學實驗動物中心，生產許可證號為Scxk（皖）2017-001。小鼠隨機分為4組（鐵皮石斛原藥材組、鐵皮石斛凍干粉組、模型組和空白對照組），每組30只，鐵皮石斛及其凍干粉按照《中華人民共和國藥典》推薦量6～12 g的中間量9 g/（人·d）[0.15 g/（kg·d）]的10倍，即1.5 g/（kg·d）給藥。空白對照組和模型組等劑量給予生理鹽水，1.5 g鐵皮石斛及其凍干粉加蒸餾水至100 mL，煎煮后水浴蒸發濃縮，灌胃。每日一次，連續30 d。試驗結束前24 h，模型組、鐵皮石斛及其凍干粉組一次性腹腔注射200 mg/kg的環磷酰胺[8-9]。

1.4? 指標測定

1.4.1? 免疫器官臟器系數。

末次給藥24 h禁食不禁水后，精確稱定小鼠體質量，4組每組10只小鼠摘眼球取血后處死，取小鼠胸腺和脾臟，用濾紙吸干臟器表面血污，并稱其質量，按照公式：臟器指數=臟器質量（mg）/體質量（10 g）來分別計算胸腺系數和脾臟系數。

1.4.2? 遲發型變態反應（DTH）。

4組每組10只小鼠用2%綿羊紅細胞（SRBC）0.2 mL腹腔注射致敏。致敏4 d后，測量左后足趾部厚度，并在該測量部位皮下注射20%的SRBC 20 μL，注射24 h后再重新測量左后足趾部厚度。用注射前后足趾厚度的差值（足趾腫脹度）來表示遲發型變態反應的程度。

1.4.3? 血清中細胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6的含量。

末次給藥24 h禁食不禁水后，每組10只小鼠摘眼球取血，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，取上清，-80 ℃冰箱凍存備用。按照ELISA試劑盒說明書操作，檢測血清中IFN-γ、IL-2和IL-6的含量。

1.5? 數據統計分析

用Excel和SPSS軟件進行數據分析處理，數據用±S表示。

2? 結果與分析

2.1? 鐵皮石斛及其凍干粉對免疫抑制小鼠免疫器官臟器系數及遲發型變態反應（DTH）的影響

由表1可見，與空白對照組相比，模型組小鼠的脾臟系數、胸腺系數和足趾腫脹系數都有極為顯著的統計學意義（P<0.01）;鐵皮石斛凍干粉組與環磷酰胺模型組相比有顯著的統計學差異（P<0.05）;鐵皮石斛組與模型組相比僅有統計學差異（P<0.05）。

2.2? 血清中細胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6的含量

由表2可見，與空白對照組相比，模型組小鼠的細胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6有顯著性差異（P<0.01）。鐵皮石斛凍干粉組與鐵皮石斛組相比，小鼠血清中IFN-γ、IL-2和IL-6水平增加，鐵皮石斛凍干粉組與模型組相比有顯著性差異（P<0.01）;鐵皮石斛組與模型組相比細胞因子IFN-γ和IL-6有顯著性差異（P<0.01），而因子IL-2有統計學差異（P<0.05）。

3? 討論

天然植物多糖被認為是最有前途的免疫調節劑，相對無毒且沒有明顯的副作用。鐵皮石斛經常以水提取物的方式服用，其中發揮最大藥效的成分是石斛多糖。植物多糖可誘導如TNF-α、IL-1h、IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ和IFN-β細胞因子的產生[10]。該研究中通過煎煮鐵皮石斛及其凍干粉的濃縮液灌胃給藥，腹腔注射環磷酰胺后，結果顯示模型組小鼠的免疫器官臟器系數、足趾腫脹度和血清中IFN-γ、IL-2、IL-6均降低，表明免疫抑制模型建立成功。而灌胃給予鐵皮石斛及其凍干粉后，各個指標數均明顯升高，表明鐵皮石斛及其凍干粉具有增強免疫力的作用，且尤以鐵皮石斛凍干粉的療效更加顯著。

該研究發現鐵皮石斛具有增強免疫力的作用，其作用機制可能與上調細胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6等的表達水平有關。但是機體免疫調節系統是一個極其復雜的系統，目前對石斛尤其是鐵皮石斛及其凍干粉的研究依然處于比較淺顯的階段，其具體機制還有待進一步的深入研究。

參考文獻

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