輪鐘花果實(shí)化學(xué)成分的研究

王建霞郭洪偉田云剛李 明畢紹文魏 華

（1.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南吉首 416000； 2.湖南省土家醫(yī)藥研究中心，湖南吉首 416000； 3.曲靖市沾益區(qū)萬(wàn)遠(yuǎn)中藥材種植農(nóng)民專業(yè)合作社，云南曲靖 655000）

輪鐘花Cyclocodon lancifolius（Roxburgh） Kurz，別名野靈果、肉算盤(pán)等，系桔梗科輪鐘花屬多年生草本植物［1］。1983 年版《中國(guó)植物志》 記載其為金錢豹屬植物長(zhǎng)葉輪鐘草［2］，主要分布于云南（東南部）、貴州、湖南和東南亞等，根可入藥，無(wú)毒，甘而微苦，有益氣補(bǔ)虛、祛瘀止痛之效［1］。《中華本草》 記載其有“治療勞倦氣虛乏力、跌打損傷、腸絞痛”等效用［3］。它為湘西苗族、貴州民間常用藥植物，肉質(zhì)根，胡蘿卜狀，當(dāng)?shù)厝嗣窠?jīng)常以其根代替人參作為大病初愈后的滋補(bǔ)品，有“南方人參”之稱，果實(shí)呈漿果球狀，營(yíng)養(yǎng)豐富，富含原花青素、果膠和多糖，具有較強(qiáng)的抗氧化作用［4-5］，但對(duì)其成分的研究?jī)H限于初探，主要含有糖類、生物堿、黃酮、酚類、甾體、蒽醌、三萜［6］。為了更好地開(kāi)發(fā)利用該植物資源，本實(shí)驗(yàn)對(duì)輪鐘花果實(shí)70%乙醇提取物化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到8 個(gè)化合物，均為首次從輪鐘花屬植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

AVANCE Ⅲ-600 型核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；LTQ-Obitrap XL 液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)賽默飛世爾公司）；LC-20AT 高效液相色譜儀（日本島津公司）；Rotavapor R-210 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；LE204E 電子分析天平［梅特勒-托利多儀器（上海） 有限公司］；WFH-203B 三用紫外分析儀、BSZ-160F 自動(dòng)餾分收集器（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

柱色譜用硅膠、薄層色譜用硅膠GF254、柱色譜用硅膠 （青島海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20 凝膠（瑞士Pharmacia 公司）；HW-40C 凝膠（日本Toyopearl 公司）。二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇（分析純，成都金山化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；水為怡寶水［華潤(rùn)怡寶飲料（中國(guó)） 有限公司］。

輪鐘花果實(shí)于2018 年12 月采自云南省曲靖市沾益區(qū)炎方鄉(xiāng)小古山村，由畢邵文先生提供，經(jīng)吉首大學(xué)張代貴教授鑒定為桔梗科輪鐘花屬植物輪鐘花Cyclocodon lancifolius（Roxburgh） Kurz 的果實(shí)，憑證標(biāo)本（JIU.WU20181201） 保存于湖南省土家醫(yī)藥研究中心。

2 提取與分離

輪鐘花果實(shí)（鮮重35 kg） 搗碎后，加70%乙醇40 L，于70 ℃提取4 次（每次2.5 h），合并提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得總浸膏3 668 g。硅膠拌樣粗分，經(jīng)硅膠柱色譜層析，石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮梯度洗脫，減壓濃縮后得乙酸乙酯部位浸膏48.9 g、丙酮部位浸膏46.5 g。

丙酮部位粗浸膏（46.5 g） 用硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（40∶1～2∶1） 梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)合并，得到4 個(gè)部分FrA.1～4。FrA.1 經(jīng)硅膠柱色譜層析，二氯甲烷-甲醇（35∶1～2∶1） 梯度洗脫，經(jīng)TLC 檢測(cè)合并得到6 個(gè)流分 FrA.1-1～1-6，F(xiàn)rA.1-4 經(jīng)硅膠柱層析，乙酸乙酯-甲醇（50∶1～20∶1） 梯度洗脫，得到3 個(gè)流分FrA.1-4-1～1-4-3；FrA.1-4-2 經(jīng)Sephadex LH-20 （甲醇）洗脫，得到化合物1 （585.1 mg）。FrA.2 經(jīng)硅膠柱色譜層析，二氯甲烷-甲醇（25∶1～2∶1） 梯度洗脫，經(jīng)TLC 檢測(cè)合并得到6 個(gè)流分FrA.2-1～2-6，F(xiàn)rA.2-1-1 經(jīng)硅膠柱層析和HW-40C 柱（甲醇） 洗脫，得化合物2 （9.4 mg）。FrA.3 經(jīng)硅膠柱色譜層析，二氯甲烷-甲醇（20∶1～1∶1） 梯度洗脫，經(jīng)TLC 檢測(cè)合并得到5 個(gè)流分FrA.3-1～3-5，F(xiàn)rA.3-1-3 經(jīng)硅膠柱層析、HW-40C 柱 （甲醇）、HPLC（甲醇-水＝13∶ 87），得到化合物3 （6.8 mg）、4（4.4 mg）、5 （20.1 mg）。Fr.4 經(jīng)硅膠柱層析，乙酸乙酯-甲醇（30∶1～10∶1） 梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)合并，得到4 個(gè)流分FrA.4-1～4-4，F(xiàn)rA.4-1-3經(jīng)硅膠柱層析、Sephadex LH-20 柱（甲醇） 洗脫，得到化合物6 （4.8 mg），F(xiàn)rA.4-1-4 經(jīng)硅膠柱層析、Sephadex LH-20 柱 （甲醇）、HPLC （甲醇-水＝40∶60），得到化合物7 （144.1 mg）。乙酸乙酯部位粗浸膏（48.9 g） 經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-乙酸乙酯（15∶1～2∶1） ／二氯甲烷-甲醇（15∶1～8∶1） 梯度洗脫，TLC 檢測(cè)合并得到5 個(gè)部分FrB.1～5，F(xiàn)rB.2 經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜層析、HPLC（甲醇-水＝43∶57），得化合物8 （3.7 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末。ESI-MSm／z：309［M＋Na］＋，分子式C15H10O6。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：7.34 （1H，dd，J＝1.8，8.4 Hz，H-6′），7.33 （1H，s，H-2′），6.85 （1H，d，J＝8.4 Hz，H-5′），6.49（1H，s，H-3），6.39 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），6.15 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-6）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：93.6 （C-8），98.7 （C-6），102.4（C-3），103.9 （C-10），112.7 （C-6′），115.4 （C-5′），118.9 （C-2′），122.3 （C-1′），145.7 （C-3′），149.6 （C-4′），158.0 （C-9），161.8 （C-5），164.7（C-7），164.9 （C-2），182.5 （C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為木犀草素。

化合物2：淡黃色粉末。ESI-MSm／z：149［M＋Na］＋，分子式C6H6O3。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：9.50 （1H，s，-CHO），7.35 （1H，d，J＝3.0 Hz，H-3），6.55 （1H，d，J＝3.0 Hz，H-4），4.57 （2H，s，H-α）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：56.0 （C-α），107.5 （C-3），109.5 （C-4），152.5（C-2），161.8 （C-5），178.0 （-CHO）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］基本一致，故鑒定為5-羥甲基糠醛。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm／z：231 ［M＋Na］＋，分子式C8H16O6。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：4.21 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），3.81～3.83 （1H，m，H-1a），3.60～3.63 （1H，m，H-1b），1.19 （3H，t，J＝7.2 Hz，H-2）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：14.1 （C-2），61.4 （C-6′），63.0 （C-1），70.2 （C-4′），73.7 （C-2′），76.5 （C-3′），76.7 （C-5′），102.7 （C-1′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為乙基β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm／z：266 ［M＋Na］＋，分子式C9H13N3O5。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：7.98 （1H，d，J＝8.4 Hz，H-6），5.86（1H，d，J＝4.8 Hz，H-1′），5.65 （1H，d，J＝8.4 Hz，H-5），4.13 （1H，t，J＝4.8 Hz，H-2′），4.10（1H，t，J＝4.8 Hz，H-3′），3.97～3.95 （1H，m，H-4′），3.79 （1H，dd，J＝3.0，12.0 Hz，H-5′ a），3.70 （1H，dd，J＝3.0，12.0 Hz，H-5′ b）；13CNMR （150 MHz，CD3OD）δ：60.9 （C-5′），69.9（C-2′），74.3 （C-3′），84.9 （C-4′），89.2 （C-1′），101.2 （C-5），141.3 （C-6），151.1 （C-2），164.8（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為胞苷。

化合物5：白色粉末。ESI-MSm／z：395 ［M＋Na］＋，分子式C17H24O9。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：6.71 （2H，s，H-2，6），6.51 （1H，d，J＝15.6 Hz，H-7），6.29 （1H，dt，J＝15.6，6.0 Hz，H-8），4.83 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.18（1H，dd，J＝6.0，1.8 Hz，H-9），3.82 （6H，s，3，5-OCH3），3.74 （1H，dd，J＝2.4，12.0 Hz，H-2′），3.62 （1H，dd，J＝7.2，12.0 Hz，H-3′），3.42～3.45 （1H，m，H-4′），3.36～3.38 （1H，m，H-5′a），3.15～3.18 （1H，m，H-5′ b）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：55.6 （3，5-OCH3），61.1 （C-6′），62.2 （C-9），69.9 （C-4′），74.3 （C-2′），76.4（C-5′），77.0 （C-3′），103.9 （C-1′），104.0 （C-2，6），128.6 （C-8），129.9 （C-1，7），133.9 （C-4），153.0 （C-3，5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為紫丁香苷。

化合物6：淡黃色油狀物。ESI-MSm／z：148［M＋Na］＋，分子式C6H7NO2。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：7.96 （1H，d，J＝3.0 Hz，H-2），7.32（1H，d，J＝9.0 Hz，H-5），7.19 （1H，dd，J＝9.0，3.0 Hz，H-4），4.54 （2H，s，H-7）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：63.8 （C-7），121.9 （C-4），123.7（C-5），135.9 （C-2），150.9 （C-6），153.5 （C-3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為5-羥基-2-羥甲基吡啶。

化合物7：淡黃色粉末。ESI-MSm／z：419［M＋Na］＋，分子式C20H28O8。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：6.30 （1H，dq，J＝15.6，6.6 Hz，H-2），5.88 （1H，dt，J＝15.6，7.2 Hz，H-11），5.55（1H，d，J＝15.6 Hz，H-3），5.43 （1H，dd，J＝15.6，8.4 Hz，H-10），4.40 （1H，d，J＝6.6 Hz，H-8），4.29 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.24 （1H，dd，J＝8.4，6.6 Hz，H-9），3.55 （2H，t，J＝6.6 Hz，H-14），2.16 （1H，td，J＝14.4，7.2 Hz，H-12），1.78 （3H，dd，J＝6.6，1.8 Hz，H-1），1.60-1.65 （1H，m，H-13），3.82 （1H，dd，J＝12.0，1.8 Hz，H-2′），3.62 （1H，dd，J＝12.0，6.0 Hz，H-3′），3.27～3.30 （1H，m，H-4′），3.23～3.26（1H，m，H-6′ a），3.16 （1H，m，H-5′ b）；13CNMR （150 MHz，CD3OD）δ：17.6 （C-1），28.4 （C-12），31.5 （C-13），60.9 （C-14），61.3 （C-6′），65.1 （C-8），69.9 （C-7），70.2 （C-4′），71.1 （C-6），73.4 （C-2′），76.5 （C-3′），76.6 （C-5′），76.8（C-5），79.8 （C-9），80.4 （C-4），99.3 （C-1′），109.1 （C-3），125.1 （C-10），137.6 （C-11），144.1（C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為黨參炔苷。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm／z：169 ［M＋Na］＋，分子式C9H6O2。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：7.72 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），7.54 （1H，t，J＝7.8 Hz，H-7），7.49 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-5），7.34 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-6），7.28 （1H，t，J＝7.8 Hz，H-8），6.43 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：116.7 （C-3），117.0 （C-8），118.9 （C-10），124.5 （C-6），127.9（C-5），131.9 （C-7），143.5 （C-4），154.1 （C-9），160.9 （C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為香豆素。

4 討論

本研究從輪鐘花果實(shí)70% 乙醇提取物中分離得到8 個(gè)化合物，均為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)，涉及黃酮類、聚乙炔醇類、苯丙素類等。其中，黃酮類木犀草素和聚乙炔醇類黨參炔苷分離出的量相對(duì)較多，可能是主要成分。

文獻(xiàn)報(bào)道，天然來(lái)源的木犀草素具有抗腫瘤、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理活性［15］；紫丁香苷具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)［16-17］作用；5-羥甲基糠醛具有抗氧化、抗心肌缺血、抗腫瘤細(xì)胞增殖等多種生物活性［18］；黨參炔苷對(duì)醇、酸等所致胃黏膜損傷有一定的保護(hù)作用，呈現(xiàn)較好的抗?jié)兓钚裕?9］。本研究豐富了輪鐘花物質(zhì)基礎(chǔ)，可為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。