經(jīng)皮穴位電刺激預(yù)處理對運(yùn)動(dòng)性疲勞模型大鼠血腦鈉素和尾加壓素Ⅱ水平的影響

石君杰 蘭加陸 胡贏贏 葉祥明

適量的運(yùn)動(dòng)負(fù)荷可促使心肌舒縮因子的適度分泌，有利于心肌自由基的清除；而劇烈運(yùn)動(dòng)會(huì)使心肌細(xì)胞產(chǎn)生過多的自由基，引起心肌能量相關(guān)酶的活性降低，導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)性疲勞[1]。因此，在運(yùn)動(dòng)性疲勞的研究中，維護(hù)心臟機(jī)能正常，防止發(fā)生心肌疲勞，是防治運(yùn)動(dòng)性疲勞的關(guān)鍵。經(jīng)皮穴位電刺激療法（transcutaneous electrical acupoint stimulation，TEAS）融合了經(jīng)皮電刺激療法和針刺療法的特點(diǎn)，較之針刺療法減少了創(chuàng)傷和疼痛，又可通過經(jīng)絡(luò)、腧穴發(fā)揮整體和良性調(diào)節(jié)作用。目前，TEAS 在防治運(yùn)動(dòng)性疲勞方面得到廣泛應(yīng)用[2]。課題組前期研究顯示，TEAS“足三里”穴具有良好的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞效應(yīng)，并對胃黏膜有一定的保護(hù)作用[3-4]。但有關(guān)TEAS 對運(yùn)動(dòng)性疲勞心肌損傷作用機(jī)制的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)擬在前期研究工作的基礎(chǔ)上，采用TEAS“足三里”穴預(yù)處理的方式，觀察其對運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心臟內(nèi)分泌激素腦鈉素（brain natriuretic pepti-de，BNP）、尾加壓素Ⅱ（urotensinⅡ，UⅡ）的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng) 物 清潔級(jí)雄性SD 大鼠21 只，體質(zhì)量（200±20）g，購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SYXX（浙）2013-0184。實(shí)驗(yàn)過程中對動(dòng)物的處置符合相關(guān)動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)條例。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。

1.2 試劑與儀器 BNP 酶聯(lián)免疫試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所，批號(hào)20170116）、UⅡ酶聯(lián)免疫試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所，批號(hào)20170325）。韓式穴位神經(jīng)刺激儀（LH 202 H 型，成都鑫奧醫(yī)療器械公司）；γ-放射免疫計(jì)數(shù)器（GC1500，安徽中佳科學(xué)儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組與模型制備 21 只SD 大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組和TEAS 組，每組7只。參照文獻(xiàn)[5]，在課題組前期研究工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步改良建模方法。模型組與TEAS 組參照Bedford建立的漸增負(fù)荷法（跑臺(tái)坡度與速度）建立運(yùn)動(dòng)性疲勞模型。一級(jí)負(fù)荷：0°，8.2m/min，運(yùn)動(dòng)15min（相當(dāng)于53%V02max）；二級(jí)負(fù)荷：5°，15m/min，運(yùn)動(dòng)15min（相當(dāng)于64%V02max）；三級(jí)負(fù)荷：10°，19.3m/min，運(yùn)動(dòng)90min（相當(dāng)于76%V02max）?？傔\(yùn)動(dòng)時(shí)間為120min。運(yùn)動(dòng)中采取毛刷刺激驅(qū)使大鼠維持足夠的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。每天1 次，共7 天。第7 天，保持大鼠在三級(jí)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷下持續(xù)運(yùn)動(dòng)至力竭狀態(tài)。力竭狀態(tài)判斷標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)給大鼠施加毛刷刺激后，大鼠不能繼續(xù)跑動(dòng)，下跑臺(tái)后疲態(tài)明顯，連續(xù)喘息，暫時(shí)無逃避反應(yīng)。正常組不進(jìn)行任何操作，僅每天適應(yīng)跑臺(tái)環(huán)境。

2.2 針刺干預(yù) TEAS 組大鼠每天運(yùn)動(dòng)前在雙側(cè)“足三里”穴處進(jìn)行TEAS 治療。大鼠的穴位定位參照中國針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)制定的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜》[6]，足三里穴位于大鼠后肢膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下約5mm 處。治療參數(shù)為連續(xù)波、頻率2Hz、強(qiáng)度5mA、持續(xù)30min，以大鼠肢體微顫為度。正常組、模型組不做任何處理。

2.3 指標(biāo)檢測

2.3.1 力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間 實(shí)驗(yàn)最后1 天，大鼠在三級(jí)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷下運(yùn)動(dòng)90min 后，繼續(xù)施加毛刷刺激使大鼠持續(xù)運(yùn)動(dòng)，直至力竭狀態(tài)，由獨(dú)立觀察者記錄大鼠從開始運(yùn)動(dòng)到出現(xiàn)力竭狀態(tài)的時(shí)間。

2.3.2 腦鈉素、尾加壓素Ⅱ 實(shí)驗(yàn)最后1 天，大鼠力竭運(yùn)動(dòng)后，麻醉，消毒，心尖部取血5mL，4℃、3000r/min離心15min，取上清液放入離心管，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA 法）測定大鼠血BNP、UⅡ水平。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間比較 與正常組比較，模型組大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間明顯縮短（P＜0.01）；與模型組比較，TEAS 組力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間明顯延長（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間比較（min，）

表1 各組大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間比較（min，）

注：正常組和模型組運(yùn)動(dòng)前不予任何處理；TEAS 組運(yùn)動(dòng)前TEAS 足三里穴；TEAS 為經(jīng)皮穴位電刺激療法；與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.05

3.2 各組大鼠心臟內(nèi)分泌激素水平比較 與正常組比較，模型組大鼠血BNP 含量升高、UⅡ含量降低（P均＜0.01）；與模型組比較，TEAS 組大鼠BNP 含量降低、UⅡ含量升高（P 均＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠血BNP、UⅡ水平比較（）

表2 各組大鼠血BNP、UⅡ水平比較（）

注：正常組和模型組運(yùn)動(dòng)前不予任何處理，TEAS 組運(yùn)動(dòng)前TEAS 足三里穴；TEAS 為經(jīng)皮穴位電刺激療法；BNP 為腦鈉素；UⅡ?yàn)槲布訅核丌?；與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.05

4 討論

延緩或消除心肌損傷，防止心臟過度負(fù)荷已成為運(yùn)動(dòng)性疲勞的研究熱點(diǎn)之一。BNP 是重要的心臟舒血管因子，在對抗腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的縮血管作用等方面發(fā)揮著重要作用。UⅡ是重要的心臟縮血管因子，其縮血管活性比內(nèi)皮素強(qiáng)8～110 倍。BNP、UⅡ作為心肌應(yīng)激的敏感因子，能靈敏反映心臟機(jī)能變化，用于監(jiān)測心肌機(jī)能，在運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練中具有重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)，超長時(shí)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷能引起心肌受損，使得血清BNP 含量明顯增加；也有研究報(bào)道進(jìn)行大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后的大鼠心肌BNP mRNA 表達(dá)增強(qiáng)[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組比較，運(yùn)動(dòng)性疲勞模型組大鼠UⅡ含量降低，BNP 含量升高，與運(yùn)動(dòng)性疲勞心肌損傷的病理改變相符合。

運(yùn)動(dòng)性疲勞屬中醫(yī)“虛證”范疇，與臟腑虛弱、功能失調(diào)密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，針灸療法對消除運(yùn)動(dòng)性疲勞、改善機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力，有較為肯定的作用，并具有整體性和良性調(diào)節(jié)的特點(diǎn)[8]。應(yīng)曉明等[9]認(rèn)為，TEAS抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的療效優(yōu)于穴位注射療法和艾灸療法。在針灸療法防治運(yùn)動(dòng)性疲勞選用的穴位中，以足三里穴的選用頻率最高。足三里穴屬足陽明胃經(jīng)，胃經(jīng)與脾經(jīng)相表里。脾主肌肉四肢，脾胃又為氣血生化之源、后天之本；《針灸大成》載足三里穴主“臟氣虛憊，真氣不足”，《靈樞·海論》曰“胃者，水谷之海，……下至足三里”，說明足三里具有補(bǔ)益氣血、扶正培元之功效。

防治運(yùn)動(dòng)性疲勞的關(guān)鍵在于早期干預(yù)。根據(jù)中醫(yī)“治未病”思想，古代醫(yī)家提出“逆針灸”方法進(jìn)行早期干預(yù)。明高武《針灸聚英》提出“無病而先針灸曰逆。逆，未至而迎之也”。陳澤斌等[10]、楊翼等[11]在此基礎(chǔ)上提出“穴位針刺預(yù)處理”方法，證實(shí)針刺預(yù)處理可以啟動(dòng)機(jī)體內(nèi)源性自我保護(hù)機(jī)制。本研究以TEAS預(yù)處理的方法，通過對足三里穴的刺激，增強(qiáng)機(jī)體對運(yùn)動(dòng)性疲勞的預(yù)適應(yīng)性和耐受性。研究結(jié)果表明，TEAS 組力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間比模型組明顯延長（P＜0.05），血BNP 含量降低、UⅡ含量升高（P＜0.05），提示TEAS“足三里”穴預(yù)處理，可消除或延緩運(yùn)動(dòng)性疲勞的產(chǎn)生，能減少BNP 水平升高程度，增加UⅡ分泌，提高心肌應(yīng)激能力，對運(yùn)動(dòng)性疲勞心臟機(jī)能具有一定保護(hù)作用。