新型PPAR-γ調控劑VSP-17對DSS誘導潰瘍性結腸炎的抑制作用

徐笑天，王宇暉

（桂林醫學院，廣西 桂林 541004）

0 引言

潰瘍性結腸炎（UC）是一種容易反復發作并且難以根治的腸道疾病，臨床癥狀主要表現為腹痛、腹瀉、便血、體重減輕等[1]，其發病機制尚不明確，目前認為UC的發病與環境因素、飲食因素、遺傳因素有關[2-3]。當前臨床常使用的羅格列酮不良反應較多，因此研究出一種不良反應少并且高效的藥物迫在眉睫[4]。本實驗擬通過構建小鼠UC模型，探討新型PPAR-γ調控劑VSP-17對UC的抑制作用，并比較VSP-17和羅格列酮的抗UC療效和不良反應，為VSP-17的臨床應用提供有效依據。

1 材料與方法

1.1 儀器。XS105DU電子天平（瑞士mettler toledo梅特勒托利有限公司）；GENEX單道可調移液器（上海寶予德科學儀器有限公司）；正置成像系統顯微鏡（OIYMPUS DP27上海比目儀器廠）；Medium-S800UVF實驗室純水系統（上海和泰儀器有限公司）。

1.2 試劑的配制

1.2.1 2.5%DSS溶液：精密稱取12.0 g DSS，溶于480 mL超純水中，現配現用。

1.2.2 0.01MPBS溶液：稱取10 g磷酸緩沖鹽粉劑，溶于1000 mL超純水中。

1.2.3 3%過氧化氫溶液：取9 mL的雙蒸水，加入1 mL 30%過氧化氫，混勻。

1.2.4 10 g/L鄰甲苯胺溶液：取8.5 mL的冰醋酸，加入1.5 mL的鄰甲苯胺，混勻，避光保存。

1.3 實驗動物。健康雄性SPF級C57BL/6小鼠53只，6-8周齡，體重18-22 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK2014-0002。

1.4 實驗方法。將53只C57BL/6小鼠隨機分為6組，即正常組、模型組、美沙拉嗪組（200 mg/kg）、羅格列酮低劑量組（20 mg/kg）、羅格列酮高劑量組（100 mg/kg）、VSP-17組（20 mg/kg），其中正常組6只，模型組15只，其余每組各8只。正常組自由飲用超純水，其余各組給予相同體積的2.5%DSS溶液7d建立模型，隨后更換超純水自由飲用3 d。在建立模型期間，除正常組和模型組外，其余的分組每天灌胃給予相應藥物，并且每天對小鼠進行稱重并記錄，收集糞便，觀察糞便性狀及進行DAI評分。在第10 d灌胃后一小時，頸椎脫臼處死，將小鼠解剖，取小鼠結腸，測量并記錄結腸長度，隨后用0.01 mol/L PBS溶液清洗結腸，從遠心端處取結腸1 cm置于4%組織細胞固定液，用于HE染色，作結腸病理組織學檢查，在光學顯微鏡下觀察結腸病變情況。

1.5 統計學分析。利用GraphPad Prism 5.0統計軟件進行數據分析。以P＜0.05為具有統計學差異。

2 結果

2.1 DAI評分情況。正常組小鼠DAI分數無明顯浮動，與正常組相比較，從第2天開始，模型組由于體重不斷減輕、糞便出現隱血和稀便的情況，DAI分數逐漸上升，至實驗進行的第8天達到高峰值；與模型組相比較，給藥組的DAI分數在第8天達到高峰值后逐漸下降，其中VSP-17組的下降最為明顯（P＜0.05），其次是羅格列酮低劑量組、美沙拉嗪組、羅格列酮高劑量組。說明藥物對疾病均有抑制作用且VSP-17的抑制作用最明顯，詳見表1。

2.2 小鼠結腸長度變化。與正常組相比較，模型組小鼠由于腸道受到刺激，結腸有所縮短；與模型組相比較，VSP-17組、美沙拉嗪組和羅格列酮低劑量組的結腸有所增長，其中羅格列酮低劑量組的結腸長度最長（P＜0.05），羅格列酮高劑量的結腸最短。

表1 藥物對各組小鼠DAI評分的影響

表1 藥物對各組小鼠DAI評分的影響

注：##P＜0.01，模型組vs正常組；?P＜0.05，給藥組vs模型組；??P＜0.01，給藥組vs模型組。

天數 正常組 模型組 VSP-17組 美沙拉嗪組 羅格列酮低劑量組 羅格列酮高劑量組第一天 0.000±0.000 0.000±0.000 0.000±0.000 0.000±0.000 0.000±0.000 0.000±0.000第二天 0.000±0.000 0.337±0.561 0.331±0.179 0.291±0.213 0.374±0.215 0.500±0.182第三天 0.000±0.000 0.889±0.500## 0.293±0.322?? 0.166±0.252?? 0.375±0.452? 0.709±0.376第四天 0.000±0.000 1.533±0.414## 0.334±0.310?? 0.208±0.248?? 0.459±0.435?? 0.959±0.486??第五天 0.000±0.000 1.599±0.362## 0.709±0.376?? 0.541±0.250?? 0.750±0.427?? 1.081±0.387??第六天 0.000±0.000 1.912±0.511## 1.249±0.429?? 1.084±0.387?? 1.415±0.526? 1.665±0.504第七天 0.000±0.000 2.444±0.411## 1.916±0.577? 1.750±0.345?? 1.791±0.307?? 1.876±0.171??第八天 0.000±0.000 3.111±0.483## 2.418±0.529?? 2.625±0.601? 2.459±0.588?? 2.666±0.436?第九天 0.000±0.000 2.868±0.328## 2.290±0.576?? 2.418±0.791 2.333±0.565?? 2.584±0.495第十天 0.000±0.000 2.555±0.450## 2.043±0.330? 2.375±0.654 2.251±0.427 2.458±0.397

2.3 小鼠病理組織學變化。HE染色后，將小鼠結腸組織做成切片，在光學顯微鏡下觀察到正常組小鼠的腸壁組織上有完整的杯狀細胞，沒有充血、水腫等現象；與正常組相比較，模型組隨著炎癥細胞的浸潤，小鼠腸壁上的杯狀細胞遭到破壞，并且會伴有糜爛、水腫或充血的現象；與模型組相比較，給藥組隨著藥物的作用小鼠腸壁上原本出現的糜爛、水腫、充血等現象以及炎癥細胞的浸潤減少，其中VSP-17的效果較好，羅格列酮高劑量組的效果差[5]。

3 結論

通過實驗發現VSP-17能改善小鼠體重下降情況，降低

DAI分數，減少糞便隱血，改善結腸縮短情況，減小結腸損傷程度。提示，VSP-17對DSS誘導UC有抑制作用。