臨床體液常規檢驗的技術現狀與規范

胡曉波

（上海中醫藥大學附屬龍華醫院檢驗科，上海 200032）

近十多年來，國際上先后出版了一系列體液（腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液、糞便、精液和陰道分泌物等）檢驗的標準和指南文件，從標本采集、轉運和儲存，理學檢驗，化學檢驗，免疫學檢驗，細胞學檢驗等方面提出了相關要求。本專題特別邀請了相關領域的專家和學者對體液檢驗所涉及的相關問題進行研究，并分享了各自的研究成果。

1 標本采集、轉運和儲存

1.1 標本采集

1.1.1 由臨床醫護人員負責采集 腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液、陰道分泌物等標本多由臨床醫護人員采集，但臨床實驗室須告知影響檢驗結果的相關因素，例如標本是來自腰椎還是腦室的腦脊液，是胸腔、腹腔還是心包腔的積液，是陰道側壁的分泌物（有助于判斷細菌性陰道病）還是陰道后穹隆的分泌物（有助于判斷滴蟲性陰道炎），并制訂相關文件等。

1.1.2 由患者自行采集 糞便、精液等標本由患者自行采集，臨床實驗室須向患者提供標本采集口頭或書面說明，并提供符合要求的采集容器。如采集糞便標本時，要告知患者盡量選取附著黏液、膿液、血液等的蠶豆大小的新鮮糞便，并避免污染。在精液標本采集后還需記錄采集方法、時間、標本完整性、禁欲時間等內容。

1.1.3 提供正確的標本采集器材 不同標本應該使用不同標本采集器材進行采集，如腦脊液標本采集于無菌試管，玻璃試管因可影響細胞學檢查盡量避免使用，無需添加抗凝劑，標本量為3～5 mL。而漿膜腔積液標本采集時，行細胞計數和分類計數應使用紫蓋的乙二胺四乙酸抗凝管，標本量為5～8 mL；行化學和免疫學檢驗可不抗凝（也可用于凝固性檢查）或使用綠蓋的肝素抗凝管，標本量為8～10 mL；行微生物檢查可不抗凝或用黃蓋的含多聚茴香腦磺酸鈉試管，標本量為8～10 mL，而抗酸桿菌培養標本量為15～50 mL；行細胞病理學檢查可不抗凝或使用綠蓋的肝素或紫蓋的乙二胺四乙酸抗凝管，標本量為5～50 mL[1]。

1.1.4 采集多管標本的順序 目前腦脊液檢驗多管標本采集的順序國際上比較統一的觀點是：第1管用于化學和免疫學檢查，第2管用于微生物學檢查（涂片、培養、核酸分子檢查），第3管用于細胞計數和分類計數，第4管用于其他檢查（細胞病理學檢查等）。因第1管易受皮膚細菌污染而不再用于微生物學檢查[2]。

1.2 標本轉運和處理

1.2.1 標本轉運要求 標本應在室溫（18～25 ℃）條件下盡快（盡量在1 h內）送檢。如糞便標本采集后宜1 h內送檢，溫度較低的冬季可延長至2 h；但查原蟲滋養體時須排便后立即送檢，冬季還需采取保溫措施，檢查陰道毛滴蟲標本也需采取類似措施。

1.2.2 標本儲存要求 腦脊液、漿膜腔積液和關節腔積液若行細胞計數和分類計數宜1 h內完成，若無法及時檢測，細胞分類計數需在采集后4 h內完成涂片和染色，并在2～8 ℃條件下保存，48 h內完成檢測，若4 h內不能完成涂片和染色，按國際血液學標準化委員會要求，在報告中應注明“細胞分類計數結果可能不可靠”[3]。用于蛋白質和核酸分析的標本可冷凍儲存。精液檢驗要求在標本采集后1 h內評估精液液化狀況和外觀，測量精液體積，檢查精子活力、精子存活率，制備精液涂片用于精子形態評估，進行精子計數和精液離心處理用于化學檢查；采集后3 h內進行微生物學檢查；采集后4 h內完成精子形態和精液化學檢查；精子存活率檢查建議在30 min內完成，盡量不超過1 h[4]。微生物學檢查標本不可冷藏，如冷藏的陰道分泌物標本不利于淋病奈瑟菌復蘇，但冷藏可用于沙眼衣原體或病毒（單純皰疹病毒）檢查。

2 理學檢查

2.1 基本規范

在同一個臨床實驗室內，須規范腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液、糞便等理學檢查指標的描述，統一報告的格式。

2.2 觀察指標

腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液主要觀察顏色、透明度、凝固性等，關節腔積液還需檢測黏稠度。糞便除觀察顏色外，還需觀察硬度/形狀、黏液等。精液除觀察顏色、透明度外，還需檢測體積、液化時間和黏稠度等。

3 化學和免疫學檢查

3.1 基本規范

當用體液標本做化學和免疫學檢查時，需同時檢測血清標本中相應物質含量，并進行比值計算，如腦脊液/血清白蛋白比值增大支持細菌性腦膜炎、隱球菌性腦膜炎、結核性腦膜炎、軟腦膜轉移性腫瘤的診斷[5]。在開展體液檢驗項目檢測時要注意不同檢測方法的靈敏度和特異性，尤其是當體液中大多數物質含量較血清濃度低或可報告范圍要求更寬廣時，應選擇適宜的檢測方法。如糞便隱血試驗有化學法、免疫法，2類方法靈敏度和特異性存在差異，在選用方法前應明確其分析性能，當一種方法檢測結果與臨床表現不符時，應采用另一種方法進行驗證。

3.2 常規檢驗項目

除常規檢測葡萄糖、總蛋白、乳酸外，腦脊液檢驗還包括氯化物、酶、蛋白電泳、免疫球蛋白和髓鞘堿性蛋白等；漿膜腔積液檢驗還包括酶、免疫球蛋白和腫瘤標志物等；關節腔積液檢驗還包括尿酸、脂類、自身抗體和類風濕因子等。上述項目大多采用定量方法進行檢測，但腦脊液蛋白定性的潘氏試驗、漿膜腔積液蛋白定性的李凡他試驗等操作過程繁瑣、主觀因素較多，且檢測性能較差，國際上均已不再使用[2]。

精液可選擇酸性磷酸酶、果糖、鋅測定來反映前列腺、精囊腺、尿道球腺等附屬性腺的功能；選擇中性α-葡糖苷酶測定來反映附睪的功能；選擇乳酸脫氫酶同工酶Ⅹ和精子頂體精氨酸酰胺酶測定來反映精子的功能[4]。

4 細胞學檢查

4.1 手工法

4.1.1 細胞計數 腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液的細胞總數、紅細胞計數、有核細胞計數宜用血細胞定量計數板法計數。外觀正常的標本無需稀釋；而渾濁和血性標本需稀釋，如細胞總數、紅細胞計數可用等滲0.9%氯化鈉溶液稀釋。建議有核細胞計數、紅細胞計數在同一計數池內完成，否則需取2個計數池計數結果均值，以×106/L為單位報告[1]。

4.1.2 有核細胞分類計數 腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液有核細胞分類計數宜采用細胞離心法制片，待干后采用Romanovsky類染液（Wright、Wright-Giemsa、Diff-Quik等）染色并鏡檢[1]。分類計數結果以百分比形式報告。當細胞類型無法確定時，可將其歸入“非典型細胞”，并在報告中加以描述。若發現可疑形態細胞，應及時告知臨床進行細胞病理學檢查。

對精子進行形態學分析時，需制備精液涂片，并做巴氏染色、Shorr染色或Diff-Quik染色，低倍鏡下至少計數200個精子，計算并報告正常和異常形態精子百分比。在評估生精功能時，需在油鏡下觀察精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞及精子的比例。

4.1.3 濕片檢查糞便標本 制作厚薄適宜的涂片，按一定方式（“城垛”式）查找標本中細胞、真菌、細菌、寄生蟲、蟲卵和原蟲等成分。如遇可疑寄生蟲蟲卵或罕見蟲卵時應請上級檢驗人員復核或技術水平更高的實驗室進行確認。結果以“（最低數～最高數）/高倍鏡”形式報告，寄生蟲及蟲卵、原蟲和真菌等以“有/無、找到/未找到或出現/未出現”形式報告[6]。

精液標本中精子活力檢查可在光學顯微鏡高倍鏡下對濕片進行檢查，至少計數200個精子，計算前向運動、非前向運動和不活動精子百分比；精子存活率檢查可用染色法（伊紅、伊紅-苯胺黑染色）或低滲膨脹試驗計算活精子百分比[4]。

4.2 儀器法

4.2.1 腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液等自動化檢驗 目前，大多血液分析儀已具備體液細胞檢測功能，能對體液細胞進行自動化分析，包括細胞計數和初步分類。在儀器用于臨床標本檢測前，首先應對儀器進行性能驗證，包括本底計數、精密度、靈敏度、分析特異性、正確度和可報告范圍等，尤其需關注體液中有核細胞、紅細胞計數檢測下限；其次是建立復檢規則，分類結果異常、細胞分類散點圖異常、計數結果低于檢測下限和與大細胞相關參數升高等，應采用鏡檢法和涂片染色法復檢[5]；最后是開展室內質控，參加室間質評，并定期對多個檢測系統結果進行比對。

4.2.2 其他標本自動化檢驗 糞便的自動分析儀在用于標本檢測臨床前，應對精密度、可比性和有形成分檢出率等性能進行驗證。精液的自動分析儀在用于臨床標本檢測前，應核查重復性和可靠性等性能指標，尤其是檢測高濃度（＞50×109/L）精子時，應對標本進行適當稀釋[4]。

5 總結

綜上所述，在腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液、糞便、精液和陰道分泌物標本檢查中，臨床醫師和檢驗人員應更新觀念，了解先進檢測技術；注意規范從標本采集到結果報告過程中的各類操作；檢測人員應與臨床充分溝通、密切合作，保證體液實驗室檢測結果能更好地服務于臨床。