連錢草正丁醇部位化學成分研究

熊曉麗，吳西，袁銘銘，鐘瑞建*

1.江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，南昌 330029；2.江西中醫藥大學，南昌 330004

連錢草為唇形科多年生草本植物活血丹Glechoma longituba(Nakai) Kupr 的地上部分［1］。具有利濕通淋，清熱解毒，散瘀消腫之功效，用于黃疸型肝炎、膽囊炎、膽石癥、腎結石、膀胱結實、跌打損傷、腹痛等癥［2］。研究表明其具有利尿利膽、調血脂、溶石、降血糖、抗炎、抗菌、抗癌等作用［3-5］。為更好利用連錢草藥用資源，本論文對連錢草進行較為系統的化學成分研究。采用各種色譜技術從連錢草醇提物的正丁醇部位分離鑒定了6 個化物，分別為：①丁香脂素-O-β-D-葡萄糖苷；②芹菜素-7-O-β-D-芹糖（1→2）-β-D-葡萄糖苷；③Shimobashiric acid C；④（+）-異落葉松脂素9′-O-β-葡萄糖苷；⑤（7S，8R）dehydrodiconiferyl alcohol 9 ′-β-glucopyranoside；⑥3-（3,4-dihydroxyphenyl）-acrylic acid 1-（3,4-dihydroxyphenyl）-2-methox-ycarbonylethyl ester。

1 儀器與材料

Varian UNITY INOVA 600 超導核磁共振儀（美國Varian 公司）；Micromass ZabSpec 質譜儀（美國Micromass 公司）；Agilent1260 型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Büchi 中壓液相制備色譜儀（瑞士步琦公司）；島津20-AR 型半制備液相色譜儀；C18 反相填料為資生堂產品；EYELA SB-1000 旋轉蒸發儀（日本EYELA 公司）；數顯恒溫水浴鍋（常州億通分析儀器制造有限公司）。水為超純水，氘代試劑CD3OD、C5D5N 和DMSO-d6 為美國劍橋公司CIL 生產；色譜級試劑為Sigma 公司生產；分析級試劑為國藥集團化學試劑有限公司生產；D101 大孔樹脂、柱層析硅膠（100～200 目）和薄層層析硅膠均為青島海洋化工廠生產。

連錢草藥材由江西南昌濟生制藥廠提供，經江西省藥品檢驗檢測研究院周國平主任中藥師鑒定為唇形科植物活血丹Glechoma longituba（Nakai）Kupr 的全草。標本保存在江西省藥品檢驗檢測研究院中藥室標本館。

2 提取與分離

連錢草全草（25 kg），粉碎后用75%乙醇回流提取2 次，每次2 h，提取液合并減壓濃縮后得到無醇干浸膏8 kg。然后加20 倍水溶解成混懸液，用等體積的二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取三次，分別減壓濃縮至干浸膏，得到正丁醇部分。取正丁醇部分405 g，加水適量溶解，過經處理的D101型大孔樹脂，依次用水、10%、30%、50%、70%、95%乙醇溶液梯度洗脫，除水部分外，其余部分洗脫液分別減壓濃縮至干浸膏，稱重得10%乙醇部分21.86 g，30%乙醇部分57.00 g，50%乙醇部分58.21 g，70%乙醇部分16.08 g，95%乙醇部位19.36 g。

10%乙醇部分以C18 粉末拌樣過C18 柱，以甲醇-水（10∶90～40∶60）梯度洗脫，經高效液相色譜檢測后，合并為15 個部分（Fr1-1～Fr1-15）。Fr1-5（1.26 g）過Sephadex LH-20 凝膠柱（純甲醇洗脫），經薄層色譜檢視，合并相近的組分，得Fr1-5-1～Fr1-5-2。Fr1-5-1（54 mg）經反相高效制備液相色譜，以乙腈-0.1%三氟乙酸（16∶84）為流動相，得到化合物1（9 mg）。Fr1-5-2（43 mg）經反相高效制備液相色譜，以乙腈-0.2%三氟乙酸（17∶83）為流動相，得到化合物2（8 mg）。Fr1-6（1.1 g）經硅膠柱層析（100～200 目），以二氯甲烷-甲醇（40∶1～10∶1）為洗脫劑梯度洗脫，得餾分Fr1-6-1～Fr1-6-5，Fr1-6-1（89 mg）經Sephadex LH-20 凝膠柱純化（純甲醇洗脫），經薄層色譜檢視，合并相近的組分，得Fr1-6-1-1～Fr1-6-1-2。Fr1-6-1-2（43 mg）經反相高效制備液相色譜，以乙腈-0.01%三氟乙酸（17∶83）為流動相，得到化合物3（13 mg）。

30%乙醇部分經硅膠柱層析（100～200 目），以二氯甲烷-甲醇（20∶1，15∶1，10∶1，7∶1，5∶1，3∶1，1∶1）為洗脫劑梯度洗脫，經薄層色譜檢視，合并相近的組分，得餾分Fr2-1～Fr2-9。Fr2-6（24.0 g）經C18 粉末拌樣過C18 柱，以甲醇-水（10:90～50∶50）梯度洗脫，經薄層色譜檢視后，合并為8 個部分Fr2-6-1～Fr2-6-8。組分Fr2-6-1（1.2 g）經重結晶后，溶解部分（980 mg）經Sephadex LH-20凝膠柱純化（純甲醇洗脫），經薄層色譜檢視，合并相近的組分得Fr2-6-1-1～Fr2-6-1-3，組分Fr2-6-1-1（45 mg）經反相高效制備液相色譜，以甲醇-水（23∶77）為流動相，得到化合物4（11 mg）。組分Fr2-6-1-2（120 mg）經反相高效制備液相色譜，以甲醇-水（27∶73）為流動相，得到化合物5（21 mg）。組分Fr2-6-2（1.4 g）經反相高效制備液相色譜，以乙腈-0.01%三氟乙酸（23∶77）為流動相，得到化合物6（40 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：白色無定形粉末，溶于甲醇。ESI-MS（m/z）：579［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，C5D5N）δ：7.00（2H，s，H-2，6），6.97（2H，s，H-2′，6′），5.00（2H，s，H-7，7′），4.42-4.36（4H，m，H-9，9′），4.08（2H，ddd，J=9.0，7.7，4.4 Hz，H-6″），3.86（6H，s，H-3′，5′），3.82（6H，s，H-3，5），4.00-3.91（4H，m，H-2″，H-5″），3.31-3.21（2H，m，H-8，8′）；13C-NMR（151 MHz，C5D5N）δ：136.0（C-1），105.5（C-2），154.4（C-3），138.9（C-4），154.4（C-5），105.5（C-6），87.1（C-7），55.3（C-8），72.6（C-9），132.6（C-1′），105.3（C-2′），149.8（C-3′）.137.9（C-4′），149.8（C-5′），105.3（C-6′），86.8（C-7′），55.5（C-8′），72.8（C-9′），105.3（C-1″），76.5（C-2″），78.9（C-3″），72.1（C-4″），79.3（C-5″），63.1（C-6″），57.2（3-OCH3），57.0（3′-OCH3）。以上數據與文獻［6］報道的數據基本一致，故鑒定該化合物為丁香脂素-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物2：黃色無定形粉末，易溶于DMSO。ESI-MS（m/z）:563［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：12.97（1H，s，5-OH），10.47（1H，s，4′-OH），7.95（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.3 Hz，H-3′，5′），6.87（1H，s，H-3），6.81（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.42（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），5.33（1H，d，J=1.2 Hz，H-1'''），5.18（1H，s，H-1″），3.91（1H，d，J=9.4 Hz，H-4b'''），3.72（1H，br d，J=5.2 Hz，H-2'''），3.71（1H，dd，J=10.4，5.6 Hz，H-6b″），3.66（1H，d，J=9.3 Hz，H-4a'''），3.51（1H，m，H-2″），3.49（1H，m，H-3″），3.46（1H，m，H-5″），3.44（1H，m，H-6a″），3.29（2H，s，H-5'''），3.19（1H，m，H-4″）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：164.7（C-2），103.6（C-3），182.5（C-4），161.9（C-5），99.8（C-6），163.1（C-7），95.3（C-8），157.4（C-9），105.8（C-10），121.5（C-1′），129.1（C-2′，6′），161.6（C-4′），116.5（C-3′，5′），98.5（C-1″），76.1（C-2″），76.5（C-3″），70.2（C-4″），77.5（C-5″），61.0（C-6″），109.2（C-1'''），77.3（C-2'''），79.8（C-3'''），74.5（C-4'''），64.7（C-5'''）。以上數據與文獻［7］報道的數據基本一致，故鑒定該化合物芹菜素-7-O-β-D-芹糖（1 →2）-β-D-葡萄糖苷，又名芹菜苷。

化合物3：白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS（m/z）:719［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.78（1H，d，J=2.2 Hz，H-2'''），6.71（1H，d，J=8.1 Hz，H-5″），6.68（1H，d，J=6.0 Hz，H-2′），6.67（1H，d，J=8.0 Hz，H-5'''），6.66（1H，s，H-5），6.65（1H，d，J=2.2 Hz，H-2″），6.63（1H，d，J=2.0 Hz，H-5′），6.62（1H，d，J=4.0 Hz，H-2），6.54（1H，dd，J=8.1，2.1 Hz，H-6″），6.48（1H，m，H-6'''），6.45（1H，dd，J=8.1，2.1 Hz，H-6），6.33（1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-6′），4.71（1H，dd，J=7.7，5.0 Hz，H-8″），4.57（1H，t，J=5.9 Hz，H-8），4.20（2H，ddd，J=11.1，6.0，4.1 Hz，H-7′，H-7'''），3.91（1H，dd，J=10.7，7.4 Hz，H-8′），3.74（1H，dd，J=10.4，6.5 Hz，H-8'''），2.87（1H，dd，J=14.1，5.0 Hz，Ha-7″），2.81（1H，dd，J=14.1，7.7 Hz，Hb-7″），2.71（1H，dd，J=14.1，6.3 Hz，Ha-7），2.60（1H，dd，J=14.1，5.7 Hz，Hb-7）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：128.9（C-1），120.5（C-2），146.2b（C-3），145.5a（C-4），116.4（C-5），122.2（C-6），37.5（C-7），74.9（C-8），172.7（C-9），131.5（C-1′），116.5（C-2′），146.0b（C-3′），145.3a（C-4′），116.5c（C-5′），117.5c（C-6′），42.1（C-7′），47.9（C-8′），173.4（C-9′），128.6（C-1″），119.4（C-2″），146.1b（C-3″），146.2a（C-4″），116.4c（C-5″），122.2（C-6″），37.9（C-7″），75.0（C-8″），173.4（C-9″），131.7（C-1'''），115.5（C-2'''），145.9b（C-3'''），145.2 a（C-4'''），116.4（C-5'''），117.8（C-6'''），42.8（C-7'''），49.6（C-8'''），172.7（C-9'''）。以上數據與文獻［8］報道的數據基本一致，故鑒定該化合物為Shimobashiric acid C。

化合物4：灰色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS（m/z）:521［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.81（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.76（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.70-6.63（2H，m，H-6，H-6′），6.19（（1H，s，H-3），4.13（1H，d，J=7.8 Hz，Glc-H-1），4.09（1H，m，H-7′），4.07（1H，d，J=2.7 Hz，Hb-9′），3.84（1H，m，Glc-Hb-6），3.82（3H，s，6-OCH3），3.81（3H，s，3′-OCH3），3.79（1H，dd，J=10.9，3.7 Hz，Hb-9），3.74（1H，dd，J=11.0，6.0 Hz，Ha-9），3.66（1H，dd，J=11.9，5.7 Hz，Glc-Ha-6），3.36（1H，t，J=9.0 Hz，，Glc-H-3），3.29（1H，t，J=9.3 Hz，，Glc-H-4），3.25（1H，m，Ha-9′），3.21（2H，tt，J=7.3，2.4 Hz，Glc-H-2，H-5），2.90-2.79（2H，m，Hb-7，Ha-7），2.14-2.06（1H，m，H-8），1.87（1H，tt，J=10.5，3.0 Hz，H-8′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：129.1（C-1），134.4（C-2），117.4（C-3），145.8（C-4），147.1（C-5），112.4（C-6），33.9（C-7），39.5（C-8），65.2（C-9），138.7（C-1′），114.3（C-2′），148.8（C-3′），145.1（C-4′，116.1（C-5′），123.1（C-6′），47.9（C-7′），45.9（C-8′），69.4（C-9′），105.2（Glc-C-1），75.2（Glc-C-2），78.1（Glc-C-3），71.6（Glc-C-4），77.8（Glc-C-5），62.8（Glc-C-6），56.4（5-OCH3），56.4（3′-OCH3）。以上數據與文獻［9］報道的數據基本一致，故鑒定該化合物為(+)-異落葉松脂素 9′-O-β-葡萄糖苷。

化合物5：黃色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS（m/z）:523［M+Na］+。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.97（1H，s，H-6′），6.95（1H，s，H-2′），6.94（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），6.81（1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-6），6.76（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.61（1H，dd，J=15.9，1.5 Hz，H-7′），6.22（1H，ddd，J=15.9，6.8，5.9 Hz，H-8′），5.52（1H，d，J=6.3 Hz，H-7），4.49（1H，ddd，J=12.5，5.8，1.5 Hz，H-9a′），4.36（1H，d，J=7.8 Hz，glc-1），4.30（1H，ddd，J=12.5，6.8，1.4 Hz，H-9b′），3.88（1H，m，glc-6a），3.86，3.80（each 3H，s，4，4′-OCH3），3.83（1H，dd，J=5.4，11.1Hz，H-9a），3.77（1H，dd，J=11.0，7.0 Hz，H-9b），3.67（1H，dd，J=5.4，11.9 Hz，glc-6b），3.48（1H，q，J=6.2 Hz，H-8），3.35（1H，t，J=8.6 Hz，glc-3），3.30-3.24（2H，m，glc-4，glc-5），3.22（1H，dd，J=9.2，7.8 Hz，glc-2）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：134.4（C-1），110.6（C-2），149.0（C-3），147.6（C-4），116.0（C-5），119.7（C-6），89.3（C-7），56.7（C-8），64.8（C-9），132.4（C-1′），112.0（C-2′），145.5（C-3′），149.3（C-4′），130.3（C-5′），116.6（C-6′），134.3（C-7′），124.2（C-8′），70.9（C-9′），103.1（Glc-C-1），75.2（Glc-C-2），78.0（Glc-C-3），71.7（Glc-C-4），78.1（Glc-C-5），62.8（Glc-C-6），55.1（3-OCH3），56.3（3′-OCH3）。以上數據與文獻［10］報道的數據基本一致，故鑒定該化合物為（7S，8R) dehydrodiconiferyl alcohol 9′-β-glucopyranoside。

化合物6：淡黃色無定形粉末，溶于甲醇。ESI-MS（m/z）:375.1［M+H］+。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.54（1H，d，J=15.9 Hz，H -3），7.04（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′′′），6.94（1H，dd，J =8.2 Hz，2.1 Hz，H-6'''），6.77（1H，d，J=8.1 Hz，H-5′′′），6.70（1H，d，J=2.1 Hz，H-2″），6.69（1H，d，J =8.0 Hz，H-5″），6.56（1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-6″），6.25（1H，d，J =15.9 Hz，H-2），5.18（1H，dd，J=7.7 Hz，5.1 Hz，H-1′），3.69（3H，s，OCH3-1′），3.08-2.97（2H，m，H-2′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：168.3（C-1），114.1（C-2），147.9（C-3），74.6（C-1 ′），37.9（C-2 ′），172.2（C-3 ′），128.7（C-1″），117.5（C-2″），146.2（C-3″），145.3（C-4″），116.3（C-5″），121.8（C-6″），127.5（C-1′′′），115.2（C-2′′′），146.8（C-3′′′），149.7（C-4′′′），116.5（C-5′′′），123.2（C-6′′′），52.6（OMe-1′）。以 上數據與文獻［11］報道的數據基本一致，故鑒定該化合物為3-（3，4-dihydroxyphenyl）-acrylic acid 1-（3,4-dihydroxyphenyl）-2-methoxycarbonylethyl ester。