干擾素誘導蛋白10對早期HCV感染病情進展預測價值的研究

徐 杰，趙亞楠，喬桂芳，劉桂海，孫煥芹，孫堅萍，代艷超，張永宏

(首都醫科大學附屬北京佑安醫院 生物醫學信息中心,北京100069)

在世界范圍內，約有7100萬人感染丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)，而慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)也是引起肝硬化和肝癌的主要原因之一，每年約有399000人死于丙肝相關肝臟疾病，在HCV感染急性階段約有15%-45%感染者病毒自發清除，55%-85%感染者進展為CHC，而慢性HCV感染者15%-30%在20年內進展為肝硬化[1]。多數研究發現HCV抗體(抗HCV)、HCV核糖核酸(HCV RNA)、丙氨酸氨基轉移酶(AlanineAminoacidtransfer,ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(Aspartate Transaminase，AST)在判斷體內HCV復制、肝臟炎癥活動以及CHC預后方面具有重要的預測價值[2,3]。雖然抗HCV和HCV RNA 是確定現癥感染的重要指標[4]，但是單純依照上述指標并不能準確判斷感染HCV的患者是否會發生自發性病毒清除或進入慢性感染階段。盡管目前抗HCV治療有效率可達95%，但對于HCV感染的早期臨床轉歸預測方面仍有不足之處。HCV感染階段宿主有效的免疫應答對病毒的清除以及肝臟炎癥反應的程度具有重要的影響，且研究發現干擾素誘導蛋白10(interferon-γ-inducible peotein-10,IP-10)在慢性HCV感染過程中與肝臟的炎癥程度明顯相關[5,6]，但其表達水平對CHC早期疾病轉歸的影響尚不清楚，本研究通過對IP-10等HCV感染相關指標進行檢測，探討IP-10與HCV自發清除及疾病慢性進展的相關性，觀察其對HCV疾病轉歸的早期預測價值。

1 資料與方法

1.1 納入和排除標準對2016年1月至2018年3月在北京佑安醫院樣本庫中儲存的HCV感染患者血標本按以下標準進行回顧性篩選：(1)具有完整臨床資料的患者；(2)根據2016年丙型肝炎防治指南(2016更新版)[7]可明確診斷為HCV感染的患者；(3)臨床資料以及診斷指標提示發生HCV自發性清除(HCVr)和HCV慢性感染(HCVc)的患者。排除標準：(1)經抗HCV治療的患者；(2)合并甲型肝炎、乙型肝炎以及戊型肝炎等其他類型病毒性肝炎的患者。共篩選符合入組標準的患者66例，其中HCVc組49例，HCVr組17例。

1.2 檢測方法外周血HCV抗體檢測采用羅氏Cobas e601全自動電化學發光免疫分析儀。HCV病毒載量檢測采用丙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒(羅氏Cobas)，嚴格參照試劑操作規程進行。血生化檢測采用富士700全自動干生化分析儀，操作按說明書進行。采用Luminex 技術檢測外周血中趨化因子IP-10含量，檢測儀器為Luminex200液相懸浮芯片系統，細胞因子試劑盒Bio-Plex Human Cytokine 27-plex Panel購自Bio-Rad公司(美國)，按照操作說明書進行檢測。

2 結果

2.1 HCVc組與HCVr組患者一般資料比較

共入組HCV感染者66例(表1)，其中HCVc組49例，男性24例，女性25例，平均年齡56.22±5.878歲，HCVr組17例，男性6例，女性11例，平均年齡57.47±6.829歲，兩組差異均無統計學意義(P<0.05)。基因型檢測提示，在HCVc組患者HCV基因亞型以1b和2a為主，比率分別為67.35%(33/49)、24.49%(12/49)。ALT和AST表達水平比較發現，HCVc組明顯高于HCVr組(61.127±50.520 vs 24.987±14.207,57.056±42.796 vs 25.487±9.419)，且差異均有統計學意義(P<0.001)。

表1 兩組患者一般資料比較

注：HCVc：慢性丙型肝炎；HCVr：HCV清除；a表示兩組間差異有統計學意義

2.2 HCVc組與HCVr組患者外周血IP-10表達水平比較

對兩組患者外周血IP-10表達水平比較分析后發現(圖1)，HCVc組外周血IP-10表達水平明顯高于HCVr組(717.03±351.74 pg/ml vs 502.10±254.19 pg/ml)，且兩者差異具有統計學意義(P=0.024)。

圖1 外周血IP-10表達水平比較

2.3 IP-10表達水平與HCV感染后疾病進展的相關性分析

由以上分析結果可知，IP-10的表達水平在HCVc組中明顯增高，為進一步明確其可能的相關因素，故對HVCc組患者的HCV病毒載量、ALT和AST相關指標進一步行相關性分析。分析結果提示(圖2)，在HCVc組患者外周血IP-10表達水平與HCVRNA呈明顯負相關關系(r=-0.394，P=0.006)，而與ALT、AST分別存在明顯正相關性(r=0.454，P=0.001；r=0.571，P<0.001)。

圖2 IP-10表達水平與HCV疾病進展的相關性分析

3 討論

IP-10屬趨化因子CXC亞家族，由單核細胞、內皮細胞等在γ干擾素和腫瘤壞死因子誘導下表達，與細胞表面趨化因子受體CXCR3結合,介導Th1型免疫反應[8]，募集活化的T細胞、自然殺傷細胞和單核細胞至炎癥部位，增加T細胞對內皮細胞的黏附，在HCV慢性感染狀態下可反映肝臟炎癥程度，且與疾病預后相關[9,10]。但對干擾素治療后IP-10表達水平和HCV病毒清除之間的關系仍有爭論，既往研究發現IP-10的低表達與干擾素治療后有效的病毒清除相關[11]，但也有研究發現IP-10的增加與HCV RNA的降低具有一定的相關性[12]，我們利用HCVc和HCVr兩組患者治療前IP-10的表達水平進行比較分析發現，HCVc組患者外周血IP-10的表達水平明顯高于HCVr組(717.03±351.74 pg/ml vs 502.10±254.19 pg/ml)，且差異有統計學意義(P=0.024)，由此表明，高水平的IP-10與CHC患者疾病進展相關，低水平的IP-10水平與患者自發病毒清除相關。

另外，多數研究發現外周血中IP-10的表達水平可用于評估抗病毒藥物的選擇[13]，抗病毒藥物的治療效果以及抗病毒治療后的應答反應，最近研究發現高水平的IP-10表達水平與直接抗病毒藥物的持續病毒學應答呈正相關[14]，且在慢性乙型肝炎病毒感染的研究中也發現高水平的IP-10與患者的良好預后相關[15]。本研究中我們對CHC患者治療前外周血IP-10的表達水平和HCV RNA表達水平相比較發現，IP-10的表達水平與HCVRNA呈負相關關系，與既往抗病毒治療后兩者相關性分析結果一致，由此表明治療前即可通過IP-10表達水平的檢測來評估CHC患者抗病毒治療的效果。綜合以上分析可知，在早期HCV感染后，IP-10高表達與疾病慢性進展相關，而在慢性感染的患者中，高水平的IP-10與病毒載量降低相關。

ALT和AST 作為判斷炎癥狀態下肝臟功能的重要指標，其與抗HCV和HCVRNA聯合檢測在判斷CHC疾病進展和預后方面具有重要的預測價值[2,3]，且肝細胞也可在干擾素誘導下表達IP-10，誘導T細胞在肝臟內的募集，進而殺傷HCV感染的肝細胞，促進肝內炎癥反應。本研究結果發現，在HCVc組IP-10水平明顯高于HCVr組患者，且與ALT和AST的表達水平呈正相關，從而表明HCVr組患者可誘導體內特異性T細胞免疫應答反應，進而有效的清除HCV，但CHC患者最初誘導特異性T細胞的能力相對較弱，無法快速有效的清除病毒并導致肝臟內持續的炎癥狀態。

總之，我們的研究結果表明，IP-10作為炎性細胞因子在HCV感染早期高表達與疾病的慢性進展相關。對于CHC患者，外周血IP-10，ALT和AST表達水平升高可能與患者特異性T細胞免疫功能較弱并誘導肝臟內持續炎癥反應有關。