結(jié)直腸癌組織中核運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白KPNA2的表達(dá)及其與結(jié)直腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系

馬春艷

(河北省承德縣中醫(yī)院， 河北 承德縣 067400)

結(jié)直腸癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均居較高水平，但結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制仍處于研究階段，與環(huán)境、遺傳、炎癥等不同因素均有較為密切的關(guān)系[1,2]。核轉(zhuǎn)運(yùn)單表KPNA2屬于核輸入蛋白Karyopherinα家族中的一員，該家族的蛋白能夠識(shí)別并結(jié)合親和蛋白的核內(nèi)定位信號(hào)，并形成復(fù)合物，通過核孔復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，影響細(xì)胞的基因表達(dá)等因素，在諸多腫瘤中均存在異常表達(dá)，和腫瘤發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)聯(lián)[3]。本研究旨在通過對(duì)比分析，探究結(jié)直腸癌組織中核運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白KPNA2的表達(dá)情況，并對(duì)其與結(jié)直腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系進(jìn)行分析討論。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院2017年1月至2019年3月收治的結(jié)直腸癌患者92例，年齡32～74歲，平均年齡(52.83±10.27)歲，其中男性患者55例，女性患者37例，結(jié)腸癌患者58例，直腸癌患者34例。納入標(biāo)準(zhǔn):①患者經(jīng)過手術(shù)切除腫瘤組織，通過病理學(xué)檢查確診為結(jié)直腸癌，符合《結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2015年版)》[4]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②臨床資料完整的患者；③獲取樣本前，未進(jìn)行任何輔助化療的患者；④簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①近1個(gè)月內(nèi)服用過化療藥物的患者；②存在嚴(yán)重凝血功能障礙患者；③合并其他系統(tǒng)原發(fā)性惡性腫瘤的患者；④肝腎功能嚴(yán)重受損的患者；⑤隨訪困難或失訪的患者。所有結(jié)直腸癌患者設(shè)為結(jié)直腸癌組，選取同期于我院進(jìn)行體檢的健康人92例作為正常對(duì)照組，所有患者均經(jīng)腸鏡檢查排除結(jié)直腸病變、血液系統(tǒng)功能障礙、腫瘤及肝腎功能嚴(yán)重受損者。年齡35～75歲，平均年齡(54.31±11.84)歲，男性52例，女性40例，比較兩組受試對(duì)象的一般臨床資料，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法:取所有受試對(duì)象切除的結(jié)直腸組織樣本，使用5%甲醛進(jìn)行固定，并用石蠟進(jìn)行包埋，以4μm進(jìn)行連續(xù)切片，切片組織進(jìn)行常規(guī)烤片、脫蠟、微波抗原修復(fù)以及清除內(nèi)源性過氧化物酶，使用兔多克隆抗體KPNA2進(jìn)行孵育一抗，后孵育二抗，以二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木精復(fù)染，無水乙醇脫水后，封片觀察。使用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照組，以抑制陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。采用雙盲法由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的臨床病理專家分別進(jìn)行單獨(dú)判斷，KPNA2指標(biāo)每張切片共觀察5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞，共計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞。計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的占比情況，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分；后按染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；最后按照兩項(xiàng)評(píng)分乘積將結(jié)果分為高表達(dá)(6～9分)和低表達(dá)(0～4分)。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1比較正常對(duì)照組和結(jié)直腸癌組患者間KPNA2表達(dá)的差異情況。

1.3.2比較結(jié)直腸癌組中不同病理特征患者間KPNA2表達(dá)的差異情況，比較不同年齡段、不同性別、不同腫瘤大小、不同分化程度、不同T分期、不同N分期、不同M分期的結(jié)直腸癌患者中KPNA2的表達(dá)情況。

1.3.3對(duì)各影響因素進(jìn)行獨(dú)立因素分析，賦值:腫瘤大小≤1cm為“1”，腫瘤大小>1cm為“2”；分化程度低為“1”，分化程度中為“2”，分化程度高為“3”；T1～2期為“1”，T3～4期為“2”；N0期為“1”，N1期為“2”， N2期為“3”； M0期為“1”，M1期為“2”。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS25.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，高表達(dá)率的比較采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較。使用Logistic回歸分析進(jìn)行多因素分析。單因素分析的α及多因素分析的α入、α出分別=0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1正常對(duì)照組和結(jié)直腸癌組患者間KPNA2表達(dá)的比較:結(jié)直腸癌組患者KPNA2高表達(dá)率為72.83%，顯著高于正常對(duì)照組(38.04%)(P<0.05)，見表1。

2.2結(jié)直腸癌組中不同病理特征患者間KPNA2表達(dá)的比較:KPNA2的表達(dá)在不同性別、不同年齡段的患者中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，KPNA2的表達(dá)在不同腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期的患者中存在顯著差異(P<0.05)，其中，腫瘤大小>1cm、分化程度低、T3～4期、高N分期、M1期的患者中KPNA2的表達(dá)較高，見表2。

表1 正常對(duì)照組和結(jié)直腸癌組患者間KPNA2高表達(dá)比例的比較

表2 結(jié)直腸癌組中不同病理特征患者間KPNA2高表達(dá)比例的比較

2.3KPNA2高表達(dá)的影響因素的多因素分析:腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期是影響KPNA2高表達(dá)的獨(dú)立影響因素，其中，腫瘤大小、T分期、N分期、M分期與KPNA2表達(dá)呈正影響關(guān)系，分化程度與KPNA2表達(dá)呈負(fù)影響關(guān)系(P<0.05)，見表3。

表3 KPNA2高表達(dá)的影響因素的多因素分析

3 討 論

結(jié)直腸癌是我國(guó)發(fā)病率較高的消化道惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與諸多基因的異常表達(dá)存在密切的關(guān)聯(lián)[5]，而在細(xì)胞中，核-質(zhì)間物質(zhì)的運(yùn)輸、交換與基因的表達(dá)密切相關(guān)。核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是實(shí)現(xiàn)核-質(zhì)間物質(zhì)運(yùn)輸?shù)闹匾鞍祝譃檩斎氲鞍缀洼敵龅鞍祝琄PNA2屬于輸入蛋白家族中的重要成員，關(guān)于KPNA2在各類腫瘤細(xì)胞中的異常表達(dá)已有一定的研究[6,7]，而國(guó)內(nèi)關(guān)于KPNA2表達(dá)與結(jié)直腸癌的臨床病理特征的研究較少，本研究旨在通過對(duì)比分析，探究結(jié)直腸癌組織中核運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白KPNA2的表達(dá)情況，并對(duì)其與結(jié)直腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系進(jìn)行分析討論。

本研究結(jié)果顯示，在結(jié)直腸癌患者中KPNA2的表達(dá)存在異常的上調(diào)(P<0.05)，腫瘤組織中KPNA2的表達(dá)異常升高，處于高表達(dá)的狀態(tài)。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)，KPNA2的高表達(dá)和某些臨床病理特征存在相關(guān)性，KPNA2的表達(dá)在不同腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期的患者中存在顯著差異(P<0.05)，其中，腫瘤大小>1cm、分化程度低、T3～4期、高N分期、M1期的患者中KPNA2的表達(dá)明顯上調(diào)。Baek[8]等的研究中通過不同的分析手段，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者中KPNA2蛋白的表達(dá)存在明顯的異常，這和本次研究結(jié)果較為一致，同時(shí)研究認(rèn)為KPNA2表達(dá)的異常多存在于細(xì)胞核內(nèi)，影響著各類基因調(diào)控因子的表達(dá)情況，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。李倩[9]等通過沉默KPNA2的表達(dá)，以探究其對(duì)乳腺癌患者疾病發(fā)生發(fā)展的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沉默KPNA2能夠抑制結(jié)直腸癌發(fā)生乳腺轉(zhuǎn)移，其可能通過Erk信號(hào)通路來調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的增殖，同時(shí)也對(duì)順鉑治療的敏感度存在著一定的影響。本研究主要集中于對(duì)患者自身臨床病理特征進(jìn)行分析，KPNA2的異常升高和患者腫瘤大小、腫瘤發(fā)展情況有著密切的關(guān)聯(lián)，腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期是影響KPNA2表達(dá)的獨(dú)立因素，其中，腫瘤大小、T分期、N分期、M分期與KPNA2表達(dá)呈正相關(guān)，分化程度與KPNA2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。臨床中通過判斷患者KPNA2的表達(dá)情況能夠?yàn)榧膊〉姆制诤驮\斷提供一定的依據(jù)，同時(shí)在結(jié)直腸癌患者中，KPNA2的異常表達(dá)還與患者的預(yù)后存在密切的聯(lián)系[10,11]，高表達(dá)患者的預(yù)后情況較差，KPNA2蛋白除了能夠作為判斷患者腫瘤發(fā)生發(fā)展情況的指標(biāo)外，還可以作為判定患者生存率和預(yù)后情況的指標(biāo)，其與腫瘤轉(zhuǎn)移情況存在一定的聯(lián)系，浸潤(rùn)程度高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或腹膜浸潤(rùn)的患者中，KPNA2的表達(dá)會(huì)出現(xiàn)異常的升高。由于KPNA2蛋白在核-質(zhì)間物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮著重要的作用，其與免疫應(yīng)答、細(xì)胞修復(fù)、基因表達(dá)調(diào)控等癌癥發(fā)生發(fā)展中重要的環(huán)節(jié)有著密切的聯(lián)系，通過調(diào)節(jié)機(jī)體各類生物活動(dòng)來調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育，對(duì)于細(xì)胞異常生長(zhǎng)有著重要的作用。本研究主要集中在對(duì)結(jié)直腸癌患者病理特征上，在之后的研究中可進(jìn)一步深入分析KPNA2在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用途徑，為臨床治療提供更多的理論支持。

綜上所述，在結(jié)直腸癌患者組織中，KPNA2的表達(dá)出現(xiàn)了明顯上調(diào)，KPNA2的高表達(dá)與患者腫瘤大小、腫瘤分化以及分期具有密切關(guān)聯(lián)，通過比較患者組織中KPNA2的表達(dá)情況，能夠?qū)颊吲R床病理特征進(jìn)行一定的判斷分析，具有一定的臨床診斷價(jià)值。