120例胚胎停育患者絨毛組織染色體核型分析

趙智芳

（山西醫科大學晉祠學院，山西 太原 030025）

胚胎停育主要是因為母體自帶影響妊娠的不利因素，或者受精卵存在影響妊娠的不利因素導致胚胎在發育期間生長不佳，在停止發育后仍不能順利排除。臨床檢查通常表現為胎心搏動無或者有但隨之消失、妊娠孕囊不正常。胚胎停育多發生在患者妊娠早期，患者臨床表現包含早孕反應消失、疼痛、腰酸等。近年來，胚胎停育現象不斷增多，影響婦女身心健康，不利家庭和諧、社會穩定。臨床生物學表明，染色體非正常狀態是導致胚胎停育的重要因素，有報道表示50～60%胚胎停育的根本原因均為染色體非正常狀態。基于此，本文選取2018年08月～2019年08月某醫院婦產科收治的120例孕產婦為樣本進行核型分析[1]。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選取2018年08月～2019年08月某醫院婦產科收治的 120例孕產婦為樣本，全部樣本經由病理診斷，確定為胚胎停育，包含自然受孕流產85例，輔助生殖受孕流產35例。年齡29～38歲，平均（35.62±4.27）歲。

納入標準：①存在停經史；②B超檢查子宮宮腔內存在空孕囊、可見胚芽或者可見胚胎樣組織，同時無胎心搏動或者檢測到胎心搏動但隨之消失；③人絨毛膜促性腺激素(hCG)血尿樣本檢測為陽性。④同意參與本研究。

排除標準：①妊娠合并糖尿病；②妊娠合并高血壓；③參與本研究同期參與其他研究。

1.2 設備與試劑

Leica Microsystems GSL120顯微鏡（德國）；50 ml/25 cm2培養瓶（美國Corning）；5mLCHANGMEDIUMDR培養基（美國）；HE RAcell二氧化碳培養箱（德國）羊水細胞完全培養基（以色列BiologicalIndustries）；0.25%的胰蛋白酶-EDTA消化液（上海慧穎生物科技有限公司）等。

1.3 方法

清宮術實施同時采集部分絨毛組織，放置到無菌器皿中，由護士送往實驗室。在超凈工作臺中使用生理鹽水沖洗采集的絨毛組織血塊。選取形態良好的絨毛支，用無菌剪將其剪為糊狀，存儲在2瓶中，分別接種到5 mL CHANGMEDIUMDR培養基內培養7 d，控制溫度始終為37℃，采用倒置顯微鏡研究細胞生長情況，如若存在大量絨毛細胞呈纖維狀態生長，則予以更換生長液，在生長旺盛時收納細胞，以G顯帶制片，進行核型分析[2]。

細胞收納過程中，將秋水仙素作用時間控制在120 min， 濃度以0.2 μg/mL為宜；將水浴時間控制在50 min，水浴溫度控制在37℃；固定液固定次數以3次為宜。

G顯帶制片過程中，每個樣本設置三分，置于75℃條件下180 min，胰蛋白酶-EDTA消化液消化時間不宜過長，以秒為單位，清洗晾干后進行染色。

染色體核型分析過程中，利用顯微鏡掃描，完成細胞核型、中期分裂相等記錄工作，通常情況下，計數20個，核型分析3～5個。

1.4 統計學處理

采用S P S S 2 1.0 研究，分析胚胎停育非正常狀態染色體占比，計數資料用x2檢驗，差異有統計學意義 （P＜0.05）。

2 結 果

2.1 絨毛組織染色體培養結果

供采集120例絨毛組織，其中3例受到污染，1例由于絨毛組織損壞而廢除，宣布培養失敗，其余116例培養成功，成功率為96.67%（116/120），檢測得到核型非正常66例，檢出率為56.90%（66/116）。66例異常核型中存在常染色體三體34例，涉及2-6，9-10，13-18，20-22號染色體，其中，16號共計12例，占比最大為35.29%（12/34）。其余如下：常染色體：①單體2例；②雙重三體3例。性染色體：①單體12例；②多倍體：15例。

2.2 自然與輔助受孕染色體非正常情況

基于在116例成功培養的樣本，包括自然受孕流產83例， 染色體非正常47例，占比56.63（47/83）；輔助生殖受孕流產33，染色體非正常19例，占比57.58%（19/33）。2組染色體情況對比，差異沒有統計學意義（x2=0.00，P＞0.05）。

3 討 論

胚胎停育是臨床常見疾病，與胎兒染色體異常存在密切關聯性。有研究顯示染色體異常導致胚胎停育的概率在50%以上。因此，如何提高染色體異異常檢出率，降低染色體異常檢測成本，促進染色體異常檢測技術在基層醫院的推廣應用，已經成為相關人員關注與研究的重點問題。在本次研究中，共計培養成功116例，發現非正常核型占比為56.90%，涉及單體、三體等，具體情況為三體34例，涉及2-6，9-10，13-18，20-22號染色體，16號12例（35.29%），占比最大。常染色體中存在單體2例與雙重三體3例；性染色體中存在單體12例與多倍體15例。得到本結果的原因多為三體死亡高發期在胚胎期，縱使不死亡也多會導致嬰兒出現畸形、智力障礙等并發癥[3]。通常情況下，相對于性染色體異常對胚胎發育的影響而言，常染色異常的影響更大。由于16號染色體內含基因更多，因此該染色體對胚胎的影響相對于其他染色體而言，影響更大。16號染色體如若出現問題會導致胚胎快速死亡，致死率極高。所以，在胚胎停育絨毛染色體核型分析可加強16號染色體。在本研究116例成功培養的樣本中，存在自然受孕流產83例，染色體非正常47例，占比56.63（47/83）；輔助生殖受孕流產33，染色體非正常19例，占比57.58%（19/33）。2組染色體情況對比，差異無統計學意義（P＞0.05）。該結果與尹婷、鄭安舜等學者研究結果一致[4]。表明受孕方式并非是染色體異常導致胚胎停育的危險因素，對于易位攜帶者，可嘗試通過輔助生殖技術提高正常孩子孕育成功率，降低遺傳物質異常對胚胎停育的不利影響。

綜合來看，自然流產發生率提高，胚胎染色體屬于主要因素，但并非導致流產的唯一因素，隨著臨床研究能力的提升，實驗室對此將會展開深入探究，鑒于自然流產高發生率，建議不孕不育醫學研究者探究出現胚胎停育的自然妊娠夫婦染色體情況，為遺傳學研究提供支持。