樂清地區老年H型高血壓腦卒中患者MTHFRC677T基因突變及防治

趙樂萍 楊理會 陳肖 邵傳鋒 陳力宇 徐洛丹

(溫州醫科大學附屬樂清醫院 樂清市人民醫院藥學部，浙江 樂清 325600)

我國流行病學研究表明，心血管疾病尤其是腦卒中已經成為危害公眾健康的重要因素之一，分析其危險因素并進行早期預防已迫在眉睫〔1〕。腦卒中發病后病情危重、預后較差、致死率高。近年研究表明，高血壓合并高同型半胱氨酸血癥，即H型高血壓患者，腦卒中的發生風險增加10倍以上〔2〕。血漿中同型半胱氨酸水平每增加5 μmol/L，腦卒中發生風險增加59%〔3〕。而在中國高血壓人群中，75%為H型高血壓〔4,5〕。因此，H型高血壓已經成為中國腦卒中的主要危險因素之一，如何預防和治療H型高血壓具有重要的臨床意義。血漿同型半胱氨酸水平的升高主要是葉酸代謝障礙造成的，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是葉酸在體內代謝過程中的關鍵酶，由于MTHFRC677T 基因突變造成酶活性降低是葉酸代謝障礙的主要原因之一〔6〕。本研究旨在探討樂清地區老年高血壓腦卒中患者MTHFRC677T基因突變情況及防治。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇溫州醫科大學附屬樂清醫院于2015年1月至2017年1月收治的老年H型高血壓腦卒中患者100例作為觀察組。納入標準：①符合《各類腦血管疾病診斷要點》〔7〕中關于腦卒中診斷標準，符合《中國高血壓防治指南2010》〔8〕中關于H型高血壓診斷標準；②患者年齡≥65歲且≤80歲；③獲得知情同意書。排除標準：①伴認知功能障礙，記憶力下降、視空間障礙等認知功能減退；②精神疾病者；③合并心肺、肝腎嚴重異常者。納入的100例患者中，男59例，女41例；年齡65～78〔平均(71.38±5.46)〕歲；高血壓病程3～15〔平均(8.98±1.76)〕年。另選擇州醫科大學附屬樂清醫院于2015年1月至2017年1月健康體檢者100例，男58例，女42例；年齡65～75〔平均(70.83±5.25)〕歲。兩組性別和年齡一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1MTHFRC677T基因檢測 均于入院第2天清晨空腹抽取外周靜脈血2 ml，經溶膜液/蛋白酶K消化，提取基因組DNA，保存于-20℃下。聚合酶鏈反應(PCR)體系50 μl，包括10×PCR緩沖液5 μl，濃度為25 mmol/L的氯化鎂溶液3 μl，濃度為2 mmol/L dNTP混合液5 μl，1.25U AmpliTaq DNA聚合酶，濃度為0.5 μmol/L的引物及100 μg的基因組DNA。MTHFRC677T基因引物序列：上游：5′-CAG TCC CTG TGG TCT CTT CAT-3′，下游：5′-CTC ACC TGG ATG GGA AAG AT-3′。PCR循環條件：95℃預變性10 min，94℃變性30 s，60℃復性30 s，72℃延伸30 s，反應37個循環，再以72℃延伸10 min。以2%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增引物，放置于4℃下保存待測。PCR產物經純化后作為測序模板，按照Genbank數據庫提供的全序列，采用引物設計軟件對各位點所需PCR引物以及相應的內切酶進行設計。

1.2.2干預措施 老年H型高血壓腦卒中患者100例隨機分為常規治療組和個體化治療組，各50例，其中常規治療組給予常規治療，個體化治療組給予常規治療+葉酸補充0.8 mg/d。兩組連續干預3個月。

1.3觀察指標 ①觀察兩組MTHFRC677T等位基因分布；②觀察兩組MTHFRC677T基因型分布情況；③觀察兩組干預后隨訪6個月腦卒中復發情況；④不同方法干預后MTHFRC677T等位基因分布；⑤不同方法個體化干預后MTHFRC677T基因型分布。

1.4統計學方法 采用SPSS22.0統計軟件進行χ2檢驗。

2 結 果

2.1兩組MTHFRC677T等位基因分布比較 觀察組MTHFRC677T等位基因T分布率明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組MTHFRC677T等位基因分布比較〔n(%),n=100〕

2.2兩組MTHFRC677T基因型分布情況比較 觀察組MTHFRC677T基因型TT分布率明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3不同方法干預后腦卒中復發情況比較 觀察組干預后腦卒中復發率(4.00%)明顯低于對照組(10.00%)，差異有統計學意義(χ2=6.061，P<0.05)。

表2 兩組MTHFRC677T基因型分布情況比較〔n(%),n=100〕

2.4不同方法干預前后MTHFRC677T等位基因分布比較 兩組干預前C和T基因分布比較差異無統計學意義(P>0.05)；兩組干預后C基因分布較干預前無明顯變化(P>0.05)；常規治療組干預后T基因分布較治療前無明顯變化(P>0.05)；個體化治療組干預后C基因分布較干預前增加，而T基因分布較干預前降低(P<0.05)；個體化治療組干預后C基因分布高于常規治療組，而T基因分布低于常規治療組(P<0.05)。見表3。

表3 不同方法干預后MTHFRC677T等位基因分布比較〔n(%)，n=50〕

與干預前比較：1)P<0.05，下表同

2.5不同方法干預前后MTHFRC677T基因型分布比較 兩組干預前CC、CT和TT基因型分布比較差異無統計學意義(P>0.05)；兩組干預后CC和CT基因型分布較干預前無明顯變化(P>0.05)；常規治療組干預后TT基因型分布較干預前無明顯變化；個體化治療組干預后TT基因型分布較干預前顯著降低(P<0.05)；兩組干預后CC和CT基因型分布比較差異無統計學意義(P>0.05)；個體化治療組干預后TT基因型分布低于常規治療組(P<0.05)。見表4。

表4 不同方法干預前后MTHFRC677T基因型分布比較〔n(%),n=50〕

3 討 論

流行病學資料顯示我國腦卒中年發病率約為250/10萬，已經躍居全球首位〔9〕。腦卒中具有發病率高、致殘率高、復發率高以及病死率高的“四高”特點，發病后如果未能及時治療，將會造成中樞神經系統不可逆的損傷，對個人、對家庭乃至社會帶來極大的負擔〔10～13〕。因此，對于腦卒中的預防具有重要的臨床意義及社會價值。高血壓、高血糖、高脂血癥、吸煙和肥胖等是公認的腦血管危險因素。近年越來越多的研究顯示，高同型半胱氨酸血癥合并高血壓將極大增加腦卒中的發病風險〔14，15〕。血漿同型半胱氨酸氨酸不僅能夠破壞血管內皮、促使平滑肌增生，還能夠使血液處于高凝狀態，容易導致血栓的發生〔16，17〕。

MTHFRC677T基因存在3種基因型，CC型(野生型)、CT型(突變雜合子型)、TT型(突變純合子)，它可以使5，10-亞甲基四氫葉酸還原為5-甲基四氫葉酸，從而作為甲基的間接供體參與體內嘌呤嘧啶的合成及DNA、RNA、蛋白質的甲基化，同時與維持體內正常的同型半胱氨酸水平發生密切相關〔18，19〕。MTHFR基因突變導致葉酸利用能力不足，使葉酸缺乏，引起高同型半胱氨酸血癥、血液異常凝固導致腦卒中、冠心病、靜脈血栓等。研究已證實，MTHFRC677T不僅與高同型半胱氨酸血癥相關，其與腦卒中的發生也存在密切關系〔20〕。本研究表明，MTHFRC677T等位基因T可能為老年H型高血壓腦卒中易感基因。

常規服用降壓藥對于H型高血壓患者的腦卒中預防作用十分有限。因此針對H型高血壓患者增加葉酸的補充，降低血壓的同時降低血漿同型半胱氨酸水平，能夠有效預防這類人群腦卒中的發生。由于遺傳差異，不同個體對葉酸的代謝吸收能力不盡相同。根據MTHFRC677T基因型進行個體化葉酸補充能夠最大限度地預防腦卒中的發生，降低患者的治療費用、節約醫療資源及減輕社會負擔。本研究表明，采取個體化治療可降低T基因分布，從而降低腦卒中發生。

綜上所述，樂清地區老年H型高血壓腦卒中患者MTHFRC677T基因突變中，攜帶T突變基因可能會導致H型高血壓腦卒中概率增加；葉酸干預后可降低腦卒中復發率，認為可能與降低T等位基因和TT基因型分布相關。