沙門氏菌檢驗及分析

譚慧林　余琪　吳忠紅　牛貴洋

摘? 要：沙門氏菌的檢驗工作比較復雜，對檢驗員的要求比較高，通過參加能力驗證可以提高檢驗能力，發現檢驗中的關鍵點控制。文章通過沙門氏菌檢驗能力驗證，分析沙門氏菌檢驗過程中存在的問題，并分析原因，提高本檢驗室檢驗能力。

關鍵詞：沙門氏菌;檢驗;分析

中圖分類號：R155.5? ? ? ? 文獻標志碼：A? ? ? ? ?文章編號：2095-2945（2020）07-0079-02

Abstract： The inspection work of salmonella is more complex， and the requirements for inspectors are relatively high. By participating in the ability verification， we can improve the inspection ability and find the control of the key points in the inspection. Through the verification of the testing ability of salmonella， this paper analyzes the problems existing in the testing process of salmonella， and analyzes the reasons， so as to improve the testing ability of this laboratory.

Keywords： salmonella; examination; analysis

沙門氏菌屬是腸桿菌科中的一個重要菌屬，對人、動物或兩者引起多種類型的疾病， 與人類健康和畜牧業及國際貿易的發展關系密切。沙門氏菌病是我國和世界各地的常見病和多發病。目前全球已知的沙門氏菌屬，有的專對人類致病，有的只對動物致病，也有對人和動物都致病的。并且能夠在短時間內大量繁殖。傷寒、急性腸胃炎、菌血癥和敗血癥等疾病皆是由沙門氏菌感染所引起的。嚴重致死病例多見于老人、幼童及免疫系統有缺陷的易感人群[1]。在世界各地的食物中毒中，沙門氏菌的食物中毒位居第二[2]。沙門氏菌屬菌型繁多，抗原復雜，目前從世界各地檢出的沙門氏菌菌型近兩千個（包括亞利桑那菌在內），食品安全國家標準《食品安全國家標準 食品中致病菌限量》規定[3]，食品微生物沙門氏菌的限量指標采用采樣方案n=5，c=0，m=0/25，M=-，即檢驗的5個樣品沙門氏菌不得檢出。在其他食品檢驗標準中沙門氏菌均不得檢出。在沙門氏菌的檢驗工作中，生化鑒定存在一定的難度，在生化鑒定過程中需要操作者有較好的工作經驗。提高微生物檢驗員的檢驗技能，提升實驗室能力，參加能力驗證是比較有效的手段，是識別實驗室存在的問題并啟動改進措施，提高實驗室的檢驗能力等[4]。食品中沙門氏菌的檢驗參照國標《食品安全國家標準食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》[5]。

1 材料與方法

1.1 材料

待測樣品為白色粉末，西林瓶包裝，由中國檢科院提供。

1.2 培養基及試劑

營養瓊脂培養基（NA）、緩沖蛋白胨水（BPW）、四硫酸鈉煌綠（TTB）增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（SC） 增菌液、亞硫酸鉍（BS）瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽鹽 （XLD）瓊脂、三糖鐵（TSI）瓊脂培養基及沙門氏菌屬生化試劑鑒定盒，均購自北京陸橋技術有限責任公司。

1.3 儀器設備

滅菌鍋（施都凱公司，MJ78A）、生化培養箱（美墨爾特，IPP260），生物安全柜（海爾，HR50-IIA2）。

2 方法

2.1 增菌

能力驗證作業指導書稀釋樣品到無菌BPW中進行前增菌，放置（36±1）℃培養6-18h。為觀察沙門氏菌在BPW中的生長情況，樣品雜菌生長對檢驗結果的影響。本次實驗設置BPW培養6小時、8小時、10小時、12小時、18小時，這5個是階段培養物接種進行選擇性培養。即吸取1mlBPW培養物到轉種10ml的TTB中（42±1）℃培養24h，同時吸取1mlBPW培養物到10mlSC中（36±1）℃培養24h。

2.2 分離

將上述BPW不同生長時段轉接的選擇性增菌液劃線分離于XLD、BS平板。BS 平板（36±1）℃培養48h，HE平板（36±1）℃培養24h。

2.3 鑒定

將在XLD、BS上的可以菌落進行生化鑒定和血清學實驗。

3 結果與分析

（1）沙門氏菌增菌實驗不同培養時間接種到TTB、SC中的生長情況見表1。

從表1可以看出在BPW中培養6h后轉接到SC中，SC培養24h略顯渾濁，隨著在BPW中前增菌的時間增長，轉接到SC中也渾濁明顯。而在BPW前增菌6h、8h、10h、12h、16h轉接到TTB中培養24h，TTB中均為澄清。

（2）轉接TTB、SC培養24h后劃線HE、BS平板，結果如表2，表3。

（3）挑取典型菌落劃線到營養瓊脂上后，接種到三糖鐵斜面上，在斜面上的現象是斜面產堿底層產酸，產H2S，產氣。制備菌懸液接種到沙門氏菌生化鑒定盒進行生化分析。結果如表4。

革蘭氏染色：從營養瓊脂上挑取一株菌，進行革蘭氏染色，通過染色后鏡檢為紅色，無芽孢。說明我們檢驗的目標菌為革蘭氏陰性菌。

（4）血清分析

在潔凈的玻片上滴加一滴生理鹽水，將待試培養物混合于生理鹽水滴內，使成為均一性的混濁懸液，將玻片輕輕搖動30s～60s，在黑色背景下觀察反應，出現凝結，需同時做生理鹽水空白對照。

4 討論

通過生化分析和血清學分析判斷為沙門氏菌屬。

（1）在進行沙門氏菌的檢驗中BPW的前增菌，我們選擇了培養6h、8h、10h、12h、18h，我們發現BPW培養時間長短對本次實驗影響不大。但是BPW提供豐富的營養使目標菌復蘇，所以BPW的培養時間不能太短，不然目標菌沒有復蘇好;也不能時間太長，不然雜菌也會相應增多，增加目標菌的鑒別難度。我們在試驗中可以選擇培養18h，避免漏檢。

（2）在生化分析從營養瓊脂純培養制備菌懸液，麥氏濃度控制在0.5左右，麥氏濃度太低或太高都會造成判斷的失誤。

（3）前增菌后必須轉接到TTB、SC中，TTB澄清的也必須同時接種BS和HE（或XLD、沙門氏菌顯色培養基）。

（4）不同培養基選擇性強弱不同，一種培養基不可能適合所有的沙門氏菌，所以要同時使用兩種以上的培養基，必須用一個 BS，同時再用一個 XLD或 HE或顯色培養基，形成互補，提高檢出率，以防漏檢。BS平板的選擇性比較強，最好現用現配，培養時間延長至40-48h，甚至更久。

（5）由于選擇性培養基含有抑菌劑，所以生長出的菌苔生化特性不是很好，會影響山梨醇、甘露醇接種前后顏色變化的判斷，極易出現似黃非黃，似綠非綠這樣模棱兩可的結果。所以應盡量選擇營養瓊脂平板上的新鮮菌苔，如為營養瓊脂斜面，則選用斜面中段的菌苔，進行生化試驗及血清學試驗。

參考文獻：

[1]王學碩，崔生輝，邢書霞，等.餐飲食品中沙門氏菌的危害分析、污染調查與防控[J].中國藥事，2013，27（9）：974-979.

[2]楊正時，房海.人及動物病原細菌學[M].石家莊：河北科學技術出版社，2003：497-502.

[3]GB29921-2013食品安全國家標準食品中致病菌限量[S].

[4]舒鵑娟，張偉沖，袁峰，等.食品微生物的檢測能力驗證[J].上海預防醫學，2014，26（3）：154-157.

[5]GB4789.4-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗[S].