植物甾醇酯對非酒精性脂肪肝大鼠部分血清代謝物的影響

歐陽鵬凌，管 玘，曲 丹，丁信文，楊 麗，宋立華,3,*

（1.上海交通大學農業與生物學院，上海 200240；2.上海市第七人民醫院營養科，上海 200137；3.上海交通大學陸伯勛食品安全研究中心，上海 200240）

非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是由除酒精和其他對肝臟有明確損害因素導致的脂肪在肝細胞中過度沉積為主要特征的臨床病理表現[1]，包括從簡單的脂肪變性發展到脂肪性肝炎、肝纖維化及肝硬化的整個疾病譜[2]。調查顯示，NAFLD的全球患病率為25.24%[3]，在我國的發病率為20.09%[4]。NAFLD的發生與2型糖尿病、動脈粥樣硬化、慢性腎病等密切相關，是代謝綜合征在肝臟中的體現[5]。研究發現，NAFLD患者患病4 年間2型糖尿病的發病率約為9.9%[6]，而2型糖尿病患者伴有NAFLD的概率接近60%[7]。NAFLD也是冠狀動脈粥樣硬化的一個危險標志[8]，Wong等[9]的研究顯示，84.6%的NAFLD患者體內冠狀血管狹窄至少超過50%，而冠狀動脈狹窄程度是冠狀動脈粥樣硬化嚴重程度的最直接體現。另有研究結果表明NAFLD患者在5 年內慢性腎病的累積發病率為3.1%，在10 年內的累計發病率為12.2%[10]。可見NAFLD與多種疾病互相關聯，已成為21世紀世界范圍內的一個重要公共健康問題。

肝臟是人體最大的代謝器官，參與的代謝通路十分復雜，一旦肝臟出現病變，難以通過檢測單一代謝物的水平來反映代謝改變的全貌，而代謝組學能夠反映經歷一系列變化之后機體在代謝產物上的整體性變化，運用此方法研究肝臟疾病的演變具有技術優勢[9]。血清中含有1 000多種內源性小分子代謝物，是代謝組學中非常重要的體液樣本。Barr[11]利用超高效液相色譜-質譜（ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry，UPLC-MS）對NAFLD小鼠的血液進行代謝組學分析，發現NAFLD模型組小鼠血清中有機酸、鞘磷脂、卵磷脂、游離脂肪酸以及膽酸含量上升。蘇趙威[12]對NAFLD大鼠血清進行代謝組學研究，結果表明大鼠血清中糖類、氨基酸類和脂肪酸類代謝物較正常組有明顯差異，提示NAFLD狀態下機體能量代謝及脂類代謝出現紊亂。袁洋[13]的研究也發現NAFLD狀態下血清類脂含量降低，而乳酸含量顯著升高，進一步證明NAFLD狀態下機體代謝出現紊亂。上述研究結果提示，通過檢測分析血清中小分子代謝物，可在一定程度上揭示NAFLD在代謝途徑方面的致病機制及預防靶點。

目前，誘導大鼠出現NAFLD的主要方法是進行高脂飲食的飼喂。該方法可誘導大鼠肥胖，使其產生胰島素抵抗等癥狀，能較好地體現人體內出現NAFLD時的機制[14]。因此，從飲食調節和膳食干預的角度出發，可從源頭上對NAFLD進行預防。植物甾醇（phytosterols，PS）是玉米、大豆等油料作物中的主要活性物質，其酯類形式植物甾醇酯（phytosterol esters，PSE）較PS具有更好的溶解性和吸收率[15]。前期研究發現PSE可顯著減輕NAFLD大鼠肝臟的脂肪變性程度[16-17]，并且其可通過調節PPAR-α、PPAR-γ等脂代謝相關基因發揮預防NAFLD的作用[16]，但具體機制不明。為進一步探究PSE干預對NAFLD預防作用的代謝分子機制，本實驗在前期研究基礎上利用UPLC聯用四極桿串聯飛行時間質譜（UPLC-quadrupole-tandem time-of-flight mass spectrometry，UPLC-Q-TOF-MS）技術檢測NAFLD大鼠血清中小分子代謝物的變化，從代謝組學的角度進一步闡明PSE發揮NAFLD預防作用的機制。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

清潔級SD大鼠，6 周齡，雄性，體質量（170f10）g，購自上海斯萊克實驗動物有限公司，生產許可證號：SCXK（滬）2012-0002。大鼠飼料購自福貝世亨生物醫藥（上海）有限公司。基礎飼料組成：粗蛋白≥20%（質量分數，下同）、水分≤10%、灰分≤8%、粗纖維≤5%、粗脂肪≥4%、鈣1%～1.8%、賴氨酸1.32%、蛋氨酸+胱氨酸0.78%、磷0.6%～1.2%；高脂飼料配方：基礎飼料52.65%、豬油21%、酪蛋白10%、蔗糖10%、麥芽糊精2.7%、預混料1.9%、膽固醇1.25%、膽鹽0.5%。

PSE混合標準品（純度≥91%，包括β-谷甾醇（42.0%～55.0%）、菜油甾醇（20.0%～29.0%）、豆甾醇（12.0%～23.0%）） 巴斯夫中國有限公司；乙腈、甲醇（分析純） 國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

Acquity UPLC I-Class系統（配備二元泵、真空脫氣機、自動進樣器和柱溫箱）、VION IMS Q-TOF-MS儀美國Waters公司。

1.3 方法

1.3.1 灌胃用PSE強化牛奶的制備

于65 ℃水浴鍋中將PSE液化，將其與牛奶混合并通過高壓均質乳化（20 MPa），分別制成0.05、0.10 g/mL PSE強化牛奶。

1.3.2 實驗動物分組與樣本收集

大鼠適應性喂養一周后隨機分為以下4 組：正常對照組（NC，n＝4）、高脂模型組（HF，n＝9）、低劑量PSE組（PSE-L，n＝9）和高劑量PSE組（PSE-H，n＝9）。NC組大鼠飼喂基礎飼料，其余各組飼喂高脂飼料。NC和HF組灌胃給予普通純牛奶（1 mL/100 gmbgd），PSE-L和PSE-H組分別灌胃給予與NC組同體積的低（0.05 g/100 gmbgd）、高劑量（0.10 g/100 gmbgd）PSE強化牛奶（相當于成人3 g/d和6 g/d的攝入量），連續灌胃12 周。大鼠飼養環境：相對濕度為45%～65%，室溫為（25f1）℃，12 h明暗輪換采光，可自由進食及飲水。實驗期間每天記錄各組大鼠攝食量，每周稱量記錄各組大鼠體質量。實驗結束時，腹腔注射40 mg/kg質量分數2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，用普通采血管于腹主動脈取血，血液室溫凝結后離心取血清。

1.3.3 血清樣品前處理條件優化

取50 μL血清，分別加150 μL和200 μL前處理試劑甲醇-乙腈（1∶1（V/V，下同）），振蕩混合均勻，靜置2 h后于12 000 r/min離心20 min，取上清液于試劑瓶中待測。

1.3.4 UPLC-Q-TOF-MS分析

色譜條件：色譜柱為Acquity UPLC BEH C18（100 mmh2.1 mm，1.7 μm），進樣量為1 μL，柱溫為45 ℃，流速為0.4 mL/min。流動相A為體積分數0.1%甲酸溶液，流動相B為體積分數0.1%甲酸-乙腈溶液；梯度洗脫程序為5%～20% B，1 min；20%～40% B，1.5 min；40%～100% B，6.5 min；100% B，3 min；100%～5% B，0.5 min；5% B，2 min。

質譜條件：在正、負電噴霧電離模式下運行。全信息串聯質譜掃描模式：低能量（4 eV）和高能量（20～45 eV）兩種全信息串聯質譜模式在運行期間交替采集信息。碰撞誘導解離氣體：氬氣（99.999%），去溶劑化和錐形氣體：氮氣（＞99.5%）。掃描范圍為50～1 000 amu；一次掃描用時0.2 s；毛細管電壓分別為2 kV（正離子模式）、1 kV（負離子模式）；源偏置電壓60 V；錐形電壓40 V；去溶劑化氣體溫度450 ℃；源溫度115 ℃；錐形氣體流量50 L/h；去溶劑化氣體流量900 L/h。通過參比探針將乙腈-水-甲酸（體積比50∶49.9∶0.1）中的250 ng/mL亮氨酸腦啡肽標準校正溶液（5 μL/ min）連續輸注，從而進行鎖定質量校正，每30 s掃描一次。

1.4 數據統計與分析

UNIFI 1.8.1軟件用于血清代謝組學數據采集，在Progenesis QI v2.3軟件中導入原始數據并進行峰采集、比對和歸一化，從而得到保留時間和質荷比（m/z）等。將篩選編輯后的數據組織為二維矩陣，在SIMCA-P軟件中進行主成分分析（principal component analysis，PCA）和偏最小二乘法判別分析（partial least squares discrimination analysis，PLS-DA），根據模型得到的變量權重值（VIP＞1）、最小變異系數（min CV＜30%）以及Student-t檢驗的P值（P＜0.05）來尋找差異代謝物。在HMDB（the Human Metabolome Database）（http://www.hmdb.ca/）、LIPID MAPS（http://www.lipidmaps.org/tools/）數據庫以及UNIFI軟件中，將精確質量和高能質譜中的碎片做進一步比對，從而鑒定化合物。運用EZinfor V3.0.3軟件對得到的歸一化峰強度做進一步統計分析。通過Metabo Analyst（http://www.metaboanalyst.ca/faces/upload/PathUploadView.xhtml）等在線數據庫檢索差異性代謝物及其所參與的代謝通路。利用GraphPad Prism 6軟件作圖，數據采用SPSS Statistics 20軟件作單因素方差分析，并用多重比較法兩兩比較，P＜0.05表示兩組差異顯著。

2 結果與分析

2.1 血清小分子代謝物檢測不同前處理方法比較

本實驗中150、200 μL甲醇-乙腈（1∶1）處理的血清在正、負離子模式下得到的基峰離子流圖差別不明顯，圖1為200 μL甲醇-乙腈（1∶1）處理血清后得到的基峰離子流圖。為了使樣品濃度較小時不易污染離子源，從而增加儀器的耐受性，并使蛋白質沉淀完全，在50 μL血清中加入200 μL甲醇-乙腈（1∶1）進行前處理。

圖 1 在UPLC-Q-TOF-MS正、負離子模式下的基峰離子流圖譜Fig. 1 Base peak ion current pattern in positive and negative modes of UPLC-Q-TOF-MS

2.2 PSE干預對NAFLD大鼠血清中小分子代謝物的影響

2.2.1 多維統計分析結果

利用SIMCA-P軟件對各組大鼠血清小分子代謝物進行無監督的數據分析（PCA）后，可得到模型概括X矩陣解釋率（R2X），當R2X＞0.4時說明該模型可靠。本實驗樣品在正離子模式下R2X＝0.78，負離子模式下R2X＝0.74，因此所建立的模型可以很好地解釋各組間差異。為了對正交信號進行校正并運用排列試驗和交叉驗證對模型的可靠性進行驗證，以更好地區分各組間的差異，對數據進行標準化處理，采用有監督的多維統計分析（PLS-DA）法對樣品做進一步分析，可得到R2Y和Q2兩個數據，其中R2Y可反映模型的穩定性，其越接近于1說明模型的穩定性越好；Q2反映的是模型的預測性，當Q2＞0.5時表明模型可靠。在正離子模式下R2Y＝0.65、Q2＝0.56，負離子模式下R2Y＝0.80、Q2＝0.50。由圖2中的PLS-DA得分圖可看出，PSE-H組與模型組區分較明顯，而PSE-L組與模型組差異較小。

圖 2 各組大鼠血清小分子代謝物PCA和PLS-DA得分圖Fig. 2 PCA and PLS-DA score plots for serum samples of rats from different groups

2.2.2 差異代謝物的確認

利用TOF-MS可以通過低、高能量掃描得到低能量通道和高能量通道的質譜圖。低能量掃描中的一級質譜圖能提供精確相對分子質量、分子離子峰以及加合峰的信息，可結合Mass FragmentTM軟件進一步確定化合物的可能分子式。通過高能量掃描產生的碎片離子信息可以明確碎片的元素組成，推斷可能的化合物結構，并結合已建立的MOL文件數據庫對化合物進行初步的定性。圖3A、B分別為本研究得到的化合物在低、高能量掃描下的圖譜，可以看出其準分子離子峰為m/z482.324 5[M+H]+；溶血卵磷脂（15∶0）的精確相對分子質量為481.316 84。該物質在高能量通道中的部分碎片離子如圖4所示，通過與UNIFI軟件中數據庫給出的結構進行比對從而推斷其為溶血卵磷脂（15∶0）。以此方式對正、負離子模式下得到的差異代謝物進行篩選比對。表1為篩選后得到VIP值大于1的27 種差異代謝物的質荷比和保留時間，以及其在HMDB、LIPID MAPS中的編號。從表1中可以看出，與HF組相比，上述差異代謝物的離子強度在NC組與低、高劑量PSE組（尤其是PSE-H組）中的變化趨勢基本一致（除溶血卵磷脂（18∶2(9Z,12Z)）外），說明在高脂飲食條件下，PSE干預可糾正NAFLD病理狀態下發生的代謝紊亂。

圖 3 正離子模式下溶血卵磷脂（15∶0）的低（A）、高（B）能量譜圖Fig. 3 Low- (A) and high- (B) energy spectra of Lyso PC (15∶0) in positive ion mode

圖 4 溶血卵磷脂（15∶0）高能量譜圖中部分碎片離子Fig. 4 Selected fragment ions Lyso PC (15∶0) in high energy spectra

圖5為通過單因素方差分析得到的27 種差異代謝物在各組大鼠血清中離子強度的比較結果。與NC組相比，HF組27 種差異代謝物的離子強度均有顯著性差異（P＜0.05）。與HF組相比，PSE-H組甘油二酯（15∶0/18∶3(6Z,9Z,12Z)/0∶0、14∶0/22∶2(13Z,16Z)/0∶0）、溶血卵磷脂（18∶2(9Z,12Z)、15∶0、16∶1(9Z)、20∶3(5Z,8Z,11Z)、20∶3(8Z,11Z,14Z)、18∶1(9Z)）、磷脂酰膽堿（16∶0/P-18∶0、17∶1(10Z)/0∶0)、20∶3(8Z,11Z,14Z)/18∶0、18∶1(11Z)/20∶1(11Z)、O-18∶0/0∶0）、磷脂酸（22∶4(7Z,10Z,13Z,16Z)/0∶0）、磷脂酰乙醇胺（16∶0/0∶0、20∶3(8Z,11Z,14Z)/0∶0）、磷脂酰肌醇（20∶0/22∶2(13Z,16Z)）的離子強度降低，鞘磷脂（d18∶1/24∶0、d16∶1/25∶0）、鞘糖脂（d18∶1/18∶1(9Z)）、神經酰胺（d18∶2/20∶0）的離子強度升高；PSE-L組甘油二酯（16∶0/20∶3(8Z,11Z,14Z)/0∶0）、二十一烷二酸和磷脂酰乙醇胺（18∶4(6Z,9Z,12Z,15Z)/18∶0）離子強度下降，甘油二酯（18∶1(11Z)/18∶1(11Z)/0∶0）、磷脂酰膽堿（16∶0/20∶3(5Z,8Z,11Z)）、磷脂酰乙醇胺（18∶3(6Z,9Z,12Z)/22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)）離子強度顯著下降。

表 1 PSE干預對NAFLD大鼠血清中差異代謝物的影響Table 1 Effect of PSE intervention on differential metabolites in the serum of NAFLD rats

圖 5 各組大鼠血清中主要差異代謝物的離子強度比較Fig. 5 Comparison of ionic strengths of major different metabolites in serum of rats in each group

2.2.3 代謝通路分析

將表1中差異代謝物輸入Metabo Analyst（http://www.metaboanalyst.ca/faces/upload/PathUploadView.xhtml）數據庫中進行代謝通路的檢索及分析評估，構建的代謝通路如圖6所示。圖6包含了甘油磷脂代謝、醚脂質代謝以及糖基磷脂酰肌醇-錨生物合成這3 種代謝通路，其影響值分別為0.275、0.214 29和0.043 9。選擇影響值大于0.10的代謝通路作為潛在的靶向途徑，得到由磷脂酰膽堿（16∶0/P-18∶0、18∶1(11Z)/20∶1(11Z)、20∶3(8Z,11Z,14Z)/18∶0、16∶0/20∶3(5Z,8Z,11Z)）、磷脂酰乙醇胺（18∶3(6Z,9Z,12Z)/22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)、18∶4(6Z,9Z,12Z,15Z)/18∶0）以及溶血卵磷脂（15∶0、16∶1(9Z)、18∶1(9Z)、18∶2(9Z,12Z)、20∶3(5Z,8Z,11Z)、20∶3(8Z,11Z,14Z)）參與的甘油磷脂代謝通路（圖7）和磷脂酰膽堿（O-18∶0/0∶0）參與的醚脂質代謝通路（圖8）。表2為這14 種VIP＞1的差異代謝物在HMDB、PubChem和KEGG數據庫中的編號。由代謝通路的分析可以看出，NAFLD病理狀態下PSE干預主要調節甘油磷脂以及醚脂質的代謝紊亂。

圖 6 通過Metabo Analyst數據庫構建的通路分析概要圖Fig. 6 Pathway analysis profile obtained by Metabo Analyst

圖 7 通過Metabo Analyst數據庫得到的甘油磷脂代謝通路Fig. 7 Glycerophospholipid metabolism pathway obtained by Metabo Analyst

圖 8 通過Metabo Analyst數據庫得到的醚脂質代謝通路Fig. 8 Ether lipid metabolism pathway obtained by Metabo Analyst

表 2 參與代謝通路的差異代謝物Table 2 Differential metabolites involved in metabolic pathways

3 討 論

目前，代謝組學技術已經被廣泛用于營養學、毒理學、藥物開發等方面的研究，揭示營養、毒性物質及藥物等因素對人體或動物體代謝的分子機制。本研究利用甲醇-乙腈（1∶1）混合試劑處理血清樣本，檢測PSE對NAFLD大鼠血清中小分子代謝物的影響，篩選出甘油二酯（14∶0/22∶2(13Z,16Z)/0∶0、15∶0/18∶3(6Z,9Z,12Z)/0∶0、16∶0/20∶3(8Z,11Z,14Z)/0∶0、18∶1(11Z)/18∶1(11Z)/0∶0）、神經酰胺（d18∶2/20∶0）、鞘糖脂（d18∶1/18∶1(9Z)）、二十一烷二酸、溶血卵磷脂（15∶0、16∶1(9Z)、20∶3(5Z,8Z,11Z)、20∶3(8Z,11Z,14Z)、18∶1(9Z)、18∶2(9Z,12Z)）、磷脂酸（22∶4(7Z,10Z,13Z,16Z)/0∶0）、磷脂酰膽堿（16∶0/20∶3(5Z,8Z,11Z)、16∶0/P-18∶0、18∶1(11Z)/20∶1(11Z)、17∶1(10Z)/0∶0、20∶3(8Z,11Z,14Z)/18∶0、O-18∶0/0∶0）、磷脂酰乙醇胺（16∶0/0∶0、18∶3(6Z,9Z,12Z)/22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)、20∶3(8Z,11Z,14Z)/0∶0、18∶4(6Z,9Z,12Z,15Z)/18∶0）、磷脂酰肌醇（20∶0/22∶2(13Z,16Z)）、鞘磷脂（d16∶1/25∶0、d18∶1/24∶0）共27 種差異代謝物。代謝途徑檢索結果表明，部分磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺以及溶血卵磷脂參與了甘油磷脂代謝通路，磷脂酰膽堿（O-18∶0/0∶0）參與了醚脂質代謝通路。結合代謝通路中部分差異代謝物在NAFLD發生發展中的生理作用，可初步闡述PSE調節NAFLD大鼠脂代謝紊亂的作用途徑。

在27 種差異代謝物中，HF組血清中甘油二酯離子強度較NC組顯著升高，提示甘油磷脂代謝出現紊亂，這與Wang Ya等[18]的研究結果相同；而PSE組中（尤其是PSE-L組）部分甘油二酯離子強度顯著低于HF組。研究表明，甘油二酯與NAFLD的發生發展關系密切[19]。甘油二酯含量的增加會激活蛋白激酶C，而蛋白激酶C可抑制胰島素受體酪氨酸激酶的自身磷酸化，從而加劇胰島素抵抗[20]，而胰島素抵抗是NAFLD的致病因素之一[21]。另外，甘油二酯含量的提高會導致肝臟脂肪變性，增加活性氧的產生，加劇氧化應激及脂質過氧化反應，進一步促進NAFLD的發生發展[20]。

HF組中鞘磷脂、神經酰胺、鞘糖脂的離子強度也顯著低于NC組，而PSE-H組中這些差異代謝物的離子強度顯著高于HF組，提示較高劑量PSE干預可以有效糾正NAFLD病理狀態所引起的鞘脂類代謝異常。

鞘磷脂由鞘氨醇、磷酸膽堿和脂酸構成，在鞘磷脂酶的作用下可以生成神經酰胺[22]，是體內含量第二的磷脂。文獻[23]表明血清中的鞘磷脂（d18∶1/24∶0）含量可以間接反映肝損傷程度，與炎癥等級呈負相關。神經酰胺是鞘脂類的一種重要化合物，作為第二信使存在于細胞膜和細胞質之間，是與胰島素抵抗、氧化應激以及炎癥等相關的重要細胞信號因子[24]，能夠調節細胞增殖、凋亡、分化等過程。神經酰胺可通過抑制由炎癥因子比如炎癥因子所導致的超氧化物含量升高，進一步對炎癥反應進行調節[25]。鞘糖脂是由神經酰胺經過葡糖基轉移酶的糖基化作用合成[26]，是所有動物細胞中的重要生物小分子，通過糖基轉移酶和糖苷水解酶等調控機制維持生物體內的鞘脂類動態平衡[27]，參與信號傳導、細胞生長、分化以及凋亡等生命活動[28]。

此外，本研究還發現HF組中溶血卵磷脂和磷脂酰膽堿的離子強度顯著高于NC組，與Barr[11]的研究結果相同；而PSE干預可降低溶血卵磷脂和磷脂酰膽堿的含量，使其趨于正常。磷脂酰膽堿含量增加時可被分解，代謝后可生成甘油三酯，導致肝臟脂質堆積和變性[29]；磷脂酰膽堿合成異常加劇還會引起血液中低密度脂蛋白的分泌增多，造成脂代謝異常[30]。

由圖7可看出，溶血卵磷脂、磷脂酰膽堿以及磷脂酰乙醇胺參與了甘油磷脂代謝通路，圖8顯示磷脂酰膽堿（O-18∶0/0∶0）參與了醚脂質代謝通路。甘油磷脂是細胞膜的重要組成成分，甘油磷脂代謝通路紊亂會導致炎癥、內皮功能障礙、細胞膜破壞等情況的發生[31]。溶血卵磷脂是血液中的重要信號傳導分子，參與細胞遷移、增殖、血管的生成以及炎癥效應等[32]。溶血卵磷脂與G蛋白偶聯受體結合后可發揮誘導T淋巴細胞和單核細胞的趨化、刺激巨噬細胞活化等作用，從而促進炎癥的發生[33]；并可在組織間轉運甘油磷脂組分，如脂肪酸、磷脂酰甘油和膽堿。以上研究結果提示PSE可通過糾正甘油磷脂和醚脂質代謝通路，減輕NAFLD大鼠肝臟脂質積累引發的炎癥反應。

磷脂酸由磷脂酶D催化水解卵磷脂生成[34]。磷脂酸可通過磷脂酸磷酸水解酶轉化為甘油二酯，進一步參與細胞內信號傳導的調節和脂質代謝[35]。在NAFLD病理狀態下細胞膜的通透性會增加[36]，促進炎癥反應，可能會導致磷脂酶D進入血液的量增多且活性增強[37]，最終引起磷脂酸含量升高。本研究結果顯示，HF組的磷脂酸離子強度較NC組顯著上升，而高劑量PSE干預則可顯著降低磷脂酸的離子強度，進一步證明PSE能夠有效緩解肝臟脂質積累引發的炎癥反應。

4 結 論

本實驗通過UPLC-Q-TOF-MS技術檢測PSE干預后NAFLD大鼠血清中小分子代謝物的變化，篩選出27 種差異代謝物，包括甘油二酯、神經酰胺、鞘糖脂、溶血卵磷脂、磷脂酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂以及脂肪酸，涉及的代謝通路為甘油磷脂代謝和醚脂質代謝通路。研究結果表明，PSE干預可降低血清中甘油二酯、溶血卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰肌醇、二十一烷二酸的離子強度，升高鞘磷脂、神經酰胺、鞘糖脂的離子強度，說明PSE可以通過對甘油磷脂以及醚脂質代謝通路進行調節以糾正脂類代謝紊亂，減輕高脂飲食造成的脂質積累，影響NAFLD的發生發展。