涎腺腫瘤、牙源性腫瘤中WT-1的表達

吳倩文，祝 昊，曹渝珊，呂新全

頭頸部腫瘤中涎腺腫瘤及牙源性腫瘤占比較大[1]，腫瘤性肌上皮細胞在多種涎腺腫瘤中增生活躍，導致涎腺腫瘤的復雜多樣性[1-2]。牙源性腫瘤可分為3類：上皮來源、間充質/外胚層間充質來源和混合型[1,3]。涎腺腫瘤與牙源性腫瘤種類繁多，形態類似，臨床病理診斷及鑒別診斷較為困難，因此尋找特異性免疫組化指標具有重要價值。WT-1首次以抑癌基因從胎兒腎母細胞瘤中分離，是一種與細胞凋亡相關的抑制基因[4-5]。近年相關研究顯示WT-1具有癌基因的作用[6]，惡性腫瘤中缺氧誘導因子或原癌基因均可激活WT-1的轉錄，引發細胞凋亡受阻[7]。本文采用免疫組化SP法檢測WT-1在涎腺腫瘤和牙源性腫瘤中的表達，探討WT-1在兩者中的相關性及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料收集2011～2016年鄭州大學第一附屬醫院確診的涎腺腫瘤141例及牙源性腫瘤84例；所有標本均由兩名經驗豐富的病理醫師分別閱片后共同診斷，其中包括多形性腺瘤(pleomorphic adenoma, PA)28例、基底細胞腺瘤(basal cell adenoma,BCA)29例、癌在多形性腺瘤中(carcinoma ex pleomorphic adenoma, CXPA)26例、腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma, ACC)30例、腺泡細胞癌(acinic cell carcinoma, Aci CC)28例、成釉細胞瘤(ameloblastoma, AME)30例、牙源性腺樣瘤(adenomatoid odontogenic tumor, AOT)13例，牙源性角化囊腫(odontogenic keratocyst, OKC)30例，成釉細胞癌(ameloblastic carcinoma, AC)11例(表1)。

表1 涎腺腫瘤及牙源性腫瘤的臨床病理資料

PA.多形性腺瘤；BCA.基底細胞腺瘤；CXPA.癌在多形性腺瘤中；ACC.腺樣囊性癌；Aci CC.腺泡細胞癌；AME.成釉細胞瘤；OKC.牙源性角化囊腫；AOT.牙源性腺樣瘤；AC.成釉細胞癌

1.2 方法所有標本均經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，3μm 厚連續切片，行HE及免疫組化SP法染色。

1.3 結果判定以已知陽性切片作為陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。WT-1以胞質呈棕黃色顆粒為陽性細胞。鏡下觀察切片內無陽性細胞或陽性細胞數<10%為陰性(-)，陽性細胞數>10%為陽性(+)。

1.4 統計學分析采用SPSS 23.0軟件進行統計學分析，分析比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 正常涎腺組織中WT-1的表達正常涎腺組織中，導管細胞的WT-1呈彌漫胞質陽性(圖1)，少許腺泡細胞及肌上皮細胞中WT-1可呈陽性(圖2)。

2.2 涎腺腫瘤及牙源性腫瘤中WT-1表達的相關性涎腺腫瘤中WT-1呈胞質陽性；牙源性腫瘤中WT-1偶可陽性。WT-1在涎腺腫瘤PA、BCA、CXPA、ACC、Aci CC中陽性率分別為92.86%(26/28)、75.86%(22/29)、69.23%(18/26)、53.33%(16/30)、46.43%(13/28)(圖3～7)。在牙源性腫瘤AME、AOT、OKC、AC中陽性率分別為13.33%(4/30)、7.69%(1/13)、0(0/30)、0(0/11)。WT-1在上述腫瘤中的表達差異有統計學意義(P<0.001)。WT-1在涎腺腫瘤和牙源性腫瘤中的表達：涎腺腫瘤中的陽性率為67.37%(95/141)，牙源性腫瘤中的陽性率為5.95%(5/84)，WT-1在涎腺腫瘤中的陽性率明顯高于牙源性腫瘤，差異有統計學意義(P<0.001，表2)。另外，本實驗發現WT-1可在腫瘤組織的血管內皮細胞中表達(圖8)。

表2 涎腺腫瘤及牙源性腫瘤中WT-1表達的相關性

3 討論

涎腺中有上皮細胞-間充質轉化(epithelial-mesenchymal transdifferentiation,EMT)[5,8]，WT-1參與間充質-上皮細胞轉化(mesenchymal-epithelial transdifferentiation, MET)和EMT的過程，顯示上皮-肌上皮細胞分化，可能與腫瘤的發生、發展相關[9-10]。肌上皮細胞分化的多樣性是涎腺腫瘤分類及鑒別的重點，尋找相關肌上皮細胞標志物十分關鍵。文獻報道，翻譯后磷酸化的過程會導致WT-1蛋白在腫瘤細胞質與細胞核中移動，使WT-1在腫瘤中呈細胞質彌漫顆粒狀陽性[5,8-9,11]。

PA屬于良性腫瘤，具有多樣的肌上皮細胞分化。Langman等[5]提出WT-1是PA中有效的腫瘤性肌上皮細胞標志物[10-11]。另外，WT-1陽性細胞可能經歷MET與EMT的過程[5,9-11]。WT-1被認為是MET的誘導因子，可能參與涎腺腫瘤的分化及形成[8]。WT-1影響EMT的過程與其在腫瘤性肌上皮細胞中的表達并不排斥，因為經歷EMT的腫瘤細胞會失去細胞間凝聚和肌纖維的細胞質積聚，這可能是形成腫瘤性肌上皮細胞的因素之一[5,9,11]。CXPA是來自PA的惡性上皮性腫瘤，良惡性成分的比例變化大[1]，本實驗WT-1陽性病例中，癌變部分多為肌上皮癌或上皮-肌上皮癌，有大量腫瘤性肌上皮細胞。文獻報道，β-catenin基因的突變與PA的生成及癌變有密切關系[12]，活化的β-catenin基因可促使細胞進入早期EMT過程[9]，WT-1、β-catenin基因、EMT三者之間存在緊密聯系[2,9]，β-catenin基因在許多癌組織中被激活，具有致癌作用[12]。BCA中存在基底樣肌上皮細胞和少量導管細胞[1]，并具有β-catenin的免疫表達及基因突變[13]，腫瘤性肌上皮細胞的分化及β-catenin基因的異常表達可以解釋WT-1的表達。ACC是由導管上皮及肌上皮細胞構成的腫瘤，不同個體中，兩種細胞比例不同，多由形態較為一致的腫瘤性肌上皮細胞構成。β-catenin基因在部分ACC中呈弱表達[1,11]。涎腺腫瘤中，WT-1的表達與β-catenin基因的活化可能有部分重疊[9]。β-catenin在Aci CC中存在異常表達[12]，且Aci CC偶爾可見肌上皮分化[1]。β-catenin基因的活化或部分分化的肌上皮細胞可能是導致WT-1在該腫瘤中稍低表達的原因，在診斷中具有一定參考性[11]。

圖1WT-1在正常涎腺組織的導管細胞中呈細胞質陽性，SP法圖2WT-1在正常涎腺組織的少許腺泡細胞及肌上皮細胞中呈陽性，SP法圖3WT-1在PA中呈陽性，SP法圖4WT-1在BCA中呈陽性，SP法圖5WT-1在CXPA中呈陽性，該例癌變類型為肌上皮癌，SP法圖6WT-1在ACC篩狀結構的腫瘤細胞中呈陽性，SP法圖7WT-1在Aci CC中呈陽性，SP法圖8WT-1在腫瘤組織內血管內皮細胞中呈陽性，SP法

牙源性腫瘤來源于成牙器官或其殘余上皮、外胚間充質和(或)間充質成分[1,3]，不具有腫瘤性肌上皮的分化，也不參與MET與EMT過程，WT-1在牙源性腫瘤中偶有表達，可能是外界因素所致。

另外，WT-1在腫瘤血管內皮細胞中表達[6,11,14]。文獻報道[6,10,15]WT-1可以調節一組促進血管增生的基因表達，如血管內皮生長因子、血栓素A2、血管生成素等，提示WT-1可能是腫瘤血管生成的關鍵調節因素。

綜上所述，WT-1在涎腺正常組織中主要表達于導管細胞，肌上皮細胞較少表達。WT-1在涎腺腫瘤中多表達于腫瘤性肌上皮細胞，導管細胞中少見表達，在牙源性腫瘤中不表達或偶表達。WT-1有望成為鑒別涎腺腫瘤與牙源性腫瘤的免疫組化標志物。