血站酶聯免疫檢測技術與核酸檢測技術在乙肝病毒篩查中的應用比較

閆曉娟 班永剛

(1.陜西省商洛市中心血站檢驗科，陜西 商洛 726000；2.陜西省榆林市中心血站質管科，陜西 榆林 719000)

乙型病毒性肝炎主要是由乙型肝炎病毒感染所引起，最終會導致肝臟細胞壞死以及纖維化，部分病患還可出現肝硬化以及肝癌[1-2]。慢性乙肝病患、急性乙肝病患以及乙型肝炎病毒攜帶者為主要傳染源，血站對所有采集的血液進行乙肝表面抗原的酶聯免疫吸附法檢測和核酸檢測,防止受血者出現乙肝病毒感染情況[3-4]。本研究分析血站乙肝病毒采用酶聯免疫吸附法檢測以及核酸檢測效果差異，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1月至2019年1月本血站血液標本乙肝病毒篩查的獻血者22 456例。獻血者中男11 230例，女11 226例；年齡30～50歲，平均(40.22±5.16)歲。

1.2方法 獻血者均與采集的血液同源留取兩管血液標本，各5 mL,其中一管為EDTA.K2抗凝真空管,用于酶聯免疫吸附實驗；一管為分離膠抗凝真空管,用于核酸檢測。所有標本采集后檢測前均需保存在2～8 ℃的冰箱內，核酸標本需在4 h內離心，72 h內完成檢測。酶聯免疫吸附試驗檢測乙肝表面抗原，室內質控品使用康徹思坦生物標準物質。初檢使用北京萬泰試劑，使用TECAN Freedom EVO clinical全自動加樣系統進行酶免加樣，西門子BEPⅢ全自動酶免分析系統進行檢測。復檢使用廈門新創試劑，使用TECAN Freedom EVO clinical全自動加樣系統進行酶免加樣，FAME 24/20全自動酶免分析系統進行檢測。酶免試驗兩遍檢測均無反應性標本，進行核酸檢測。核酸檢測乙肝病毒，試劑與設備使用羅氏cobas s 201核酸檢測系統，采用6混樣的檢測模式。混樣有反應性標本進行拆分檢測，拆分有反應性標本判定為有反應性。室內質控品使用康徹思坦生物標準物質。所有試驗操作嚴格按照試劑盒說明書和實驗室標準。酶聯免疫檢測和核酸檢測項目均參加了國家衛健委臨檢中心室間質評，且室間質評結果均合格。

1.3觀察指標 (1)觀察酶聯免疫吸附法以及核酸檢測法陽性檢出率。(2)比較兩種檢查方式窗口期以及漏診率。

2 結 果

2.1陽性率比較 22 456例獻血者經酶聯免疫吸附法檢測后117例為乙肝表面抗原陽性，診斷陽性率0.52%；核酸檢測顯示149例診斷為HBV-DNA陽性，診斷陽性率0.66%；兩種檢測方式乙肝病毒陽性診斷率存在顯著差異(χ2=3.873，P<0.05)。

2.2窗口期以及漏診率比較 酶聯免疫吸附法檢測表面抗原窗口期是(30.89±1.06)d，核酸檢測法檢測乙肝病毒窗口期是(25.21±1.01)d，兩種檢查方式窗口期比較，差異有統計學意義(t=581.343，P<0.05)。酶聯免疫吸附法漏診率是0.07%(15/22 456)，核酸檢測法漏診率是0.02%(5/22 456)，兩種檢查方漏診率比較，差異有統計學意義(χ2=5.002，P<0.05)。

3 討 論

乙肝病毒DNA是乙肝病毒的脫氧核糖核酸，是乙肝病毒感染最直接、敏感度高以及特異性腔的指標，若檢測結果顯示乙肝病毒DNA呈陽性，則表示乙肝病毒可復制，且具有傳染性，并且乙肝病毒DNA水平越高則代表病患復制速度越快，傳染性越強[5]。酶聯免疫吸附法主要是通過將相應抗原或抗體固定在某一載體表面，并且可長期保持其蛋白免疫活性，再將某種特定酶置于抗體或抗原上，一方面可保持抗體或抗原活性，另一方面也可保留酶特定生物活性[6]。研究[7]認為對無償獻血者聯合使用酶聯免疫吸附法以及核酸檢測技術進行檢測，可提升乙肝病毒篩查效果，從而避免通過血液傳播乙肝病毒。

采用酶聯免疫吸附法進行表面抗原檢測，可發揮一定診斷效果，但酶聯免疫吸附法操作方法較復雜，反復操作性較差，并且大多數酶聯免疫吸附檢測試劑盒僅可實施定性檢測，若需實施定量檢測則成本較高，并且其窗口期較長，不利于臨床篩查[8]。核酸是病毒基因存儲部位，病毒主要通過核酸進行復制。核酸檢測是目前臨床準確性最高以及靈敏度最高的檢測方式，可通過觀察熒光信號收集檢測結果，有效避免酶聯免疫吸附法檢測局限性，從而降低漏診率。本研究結果發現，核酸檢測檢測陽性率高于酶聯免疫吸附法(χ2=3.873，P<0.05)。核酸檢測法窗口期、漏診率低于酶聯免疫吸附法(P<0.05)。核酸檢測主要是對人體病毒的核酸進行檢測，對環境以及檢測者技術水平要求較高，并且為避免出現假陽性結果，對血液樣本的保存條件以及處理措施也同樣有較高要求[9]。觀察其檢測結果可直接、有效反應被檢測者是否存在乙肝病毒感染情況，同時還可了解乙肝病毒病患血清中病毒量，為臨床治療方案的制定以及治療效果的判斷提供數據支持[10]。