赤峰地區蒙古族冠心病患者CYP2C19基因多態性分布研究*

陳曉梅，李樹敏，韓旭晨，霍昱吉，李 靜，陳士萍△

赤峰學院附屬醫院：1.檢驗科；2.心內科，內蒙古赤峰 024005

冠心病是最常見的心血管疾病，其發病機制為冠狀動脈發生粥樣硬化引起血管狹窄、痙攣或阻塞，導致心肌缺血、缺氧、壞死[1]。經皮冠狀動脈介入術(PCI)是冠心病的首選治療方法，能快速、有效地改善心肌血供[2]。PCI治療后需進行抗凝治療以預防血栓形成，氯吡格雷是臨床上廣泛使用的抗凝藥物，但其發揮藥物作用需要P450酶的輔助。CYP2C19基因屬于細胞色素P450酶第二亞家族[3]，其不同的基因表型可對氯吡格雷的代謝產生影響，掌握CYP2C19基因多態性的分布情況對冠心病患者抗凝藥物的選擇具有重要意義。部分學者認為CYP2C19基因的多態性應在藥物使用期間進行檢測，以避免不良心血管事件的發生[4-6]。本文通過分析赤峰地區蒙古族冠心病患者CYP2C19基因多態性的分布情況，以期為臨床個體化用藥提供依據，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年3-12月于本院確診為冠心病并行PCI治療的患者558例為研究對象，其中蒙古族患者299例為研究組，漢族患者259例為對照組。研究組中男165例，女134例；年齡35.3～79.4歲，中位年齡54.2歲；所有蒙古族患者間無血緣關系。對照組中男146例，女113例；年齡39.7～68.2歲，中位年齡48.3歲。納入標準：符合冠心病診斷標準；同意加入本研究并簽署知情同意書。排除標準：合并其他嚴重心臟疾病者，如嚴重心力衰竭、心律失常等；合并嚴重呼吸、消化系統疾病或惡性腫瘤者；有精神障礙者。兩組患者性別、年齡等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，有可比性。本研究經本院倫理委員會批準。

1.2儀器與試劑 血液標本基因組DNA提取試劑盒(凱普生物公司)；CYP2C19基因檢測試劑盒(武漢海吉力生物科技公司)；基因擴增儀ABI7500(ABI公司)。

1.3檢測方法

1.3.1DNA提取 取200 μL抗凝全血標本，加入20 μL蛋白酶K，加入溶液L震蕩，56 ℃混勻，溫浴15～20 min，期間顛倒混勻；加入200 μL無水乙醇，充分混勻后將液體轉入帶有硅膠柱的2 mL離心管中，10 000 r/min離心1 min，倒掉收集管中的廢液；將離心柱放入收集管中，在硅膠柱中加入500 μL溶液W1(使用前檢查是否加入無水乙醇)，10 000 r/min離心1 min；將離心柱再放入收集管中，在硅膠柱中加入500 μL溶液W2，10 000 r/min離心1 min；將離心柱再次放入收集管中，12 000 r/min離心3 min，倒掉收集管中的廢液；將吸附柱放入新的1.5 mL離心管中,開蓋靜置1～2 min后，向吸附柱中加入100 μL的TE洗脫液，靜置2～5 min，12 000 r/min離心2 min；棄柱得DNA；將所得DNA分裝入1～6號管，依次加入6聯PCR反應條(*1G、*1A、*2G、*2A、*3G、*3A)。每個單管中的DNA最佳上樣量為10 μL，每次實驗均加入陰性及陽性對照。

1.3.2ABI7500循環反應條件 95 ℃ 5 min,1個循環；95 ℃ 0.05 s ，58 ℃ 30 s,10個循環；95 ℃ 0.05 s， 58 ℃ 30 s,35個循環；收集信號 72 ℃ 30 s；選擇FAM熒光。

1.3.3DNA質量檢測 將提取好的DNA標本用紫外線分光光度計檢測DNA的水平和質量。DNA的水平要求≥10 ng/μL，DNA的質量A260/280在1.8～2.0。將符合要求的DNA用TE稀釋到0.1～20 ng/μL，要求最終加入6聯PCR反應條中每個單管中的DNA總量為1～200 ng，最佳上樣量為20～50 ng。

1.3.4CYP2C19基因多態性結果判定 選擇1、2管根據野生型和突變型FAM信號Ct值判斷標本CYP2C19*1的基因多態性；選擇3、4管根據野生型和突變型FAM信號Ct值判斷標本CYP2C19*2的基因多態性；選擇5、6管根據野生型和突變型FAM信號Ct值判斷標本CYP2C19*3的基因多態性，見表1。Ct值的確定使用自動設置基線，手動設置閾值線，同時選擇陽性對照反應孔，可根據實際情況調節至FAM擴增曲線升起的拐點處，得到Ct值。陽性對照分析，1～6號管陽性對照FAM信號的Ct值一般小于25，波動范圍在15～25。

表1 CYP2C19基因多態性結果判定

1.4觀察指標 比較兩組患者CYP2C19基因型分布情況；比較兩組患者CYP2C19基因代謝型分布情況，其中代謝能力快的基因型為CYP2C19*1/*1，代謝能力慢的基因型為CYP2C19*2/*2、*2/*3、*3/*3，代謝能力居中的基因型為CYP2C19*1/*2、*1/*3。

1.5統計學處理 采用SPSS19.0軟件進行數據分析。計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1兩組CYP2C19基因型分布情況比較 研究組CYP2C19*1/*1、*1/*2、*2/*3型所占比例均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組CYP2C19*1/*3、*2/*2、*3/*3型所占比例比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。研究組與對照組中均以CYP2C19*1/*2型所占比例最高。見表2。

表2 兩組CYP2C19基因型分布情況比較[n(%)]

2.2兩組CYP2C19基因代謝型分布情況比較 研究組中間代謝型和慢代謝型基因所占比例低于對照組，快代謝型基因所占比例高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

3 討 論

CYP2C19基因與氯吡格雷、S-甲莫芬、奧美拉唑、伏立康唑、地西泮等藥物的代謝相關[7]。CYP2C19基因變異可導致個體酶活性的差異，使群體中出現超快代謝者、快代謝者、中間代謝者和慢代謝者4種表型，其中超快代謝者攜帶CYP2C19*1/*17和CYP2C19*17/*17基因，快代謝者攜帶CYP2C19*1/*1基因，中間代謝者攜帶CYP2C19*1/*2、*1/*3基因，慢代謝者攜帶CYP2C19*2/*2、*2/*3、*3/*3基因[5]。不同基因表型人群對藥物的代謝能力不同，引起同一藥物在不同人群中的藥效差別。其中中間代謝者與慢代謝者需適當增加藥物的使用劑量才能達到與超快代謝者或快代謝者相同的治療效果[6-8]。

本研究中，漢族冠心病患者CYP2C19基因型分布情況：CYP2C19*1/*2型占比最高，為39.8%，CYP2C19*1/*1型為34.4%，CYP2C19*1/*3型為11.2%，CYP2C19*2/*2型為13.1%，CYP2C19*2/*3型、*3/*3型所占比例最低，僅為0.8%。與國內一些學者所研究的黑龍江、重慶等地區漢族人群CYP2C19基因分布情況基本相似[7,9]，說明我國不同地區漢族人群存在基因多態性分布相對一致的現象。

CYP2C19基因多態性具有顯著的種族差異。CYP2C19*2基因在非裔美國人和中國人中的發生率分別為17.0%、30.0%，CYP2C19*3基因的發生率分別為0.4%、5.0%；高加索人和中國人中慢代謝型基因的發生率分別為3.0%、15.0%～17.0%[10]。本研究對漢族與蒙古族冠心病患者CYP2C19的基因型分布進行比較發現，蒙古族患者CYP2C19*1/*1、*1/*2、*2/*3型所占比例均高于漢族患者(P<0.05)。兩民族CYP2C19基因代謝型分布情況比較，結果顯示，兩民族患者均以中間代謝型所占比例最高，其次為快代謝型，慢代謝型所占比例最低；且蒙古族患者快代謝型基因所占比例高于漢族患者(P<0.05)，慢代謝型和中間代謝型基因所占比例低于漢族患者(P<0.05)。考慮兩民族之間CYP2C19基因型差異可能與遺傳、生活方式等多種因素相關[10]。此外，臨床上對中間代謝型或慢代謝型冠心病患者進行抗凝治療時，可通過適當增加氯吡格雷的劑量或選用第3代血小板抑制劑來達到預期治療效果[2]。

雖然CYP2C19基因型的檢測可以針對性地指導個體用藥，但目前基因檢測費用較高，臨床上并不能對所有需使用氯吡格雷等受CYP2C19基因型影響的藥物的患者進行基因檢測來指導藥物的使用劑量，所以探索更為簡便、費用低廉的檢測方法仍是目前亟待解決的問題。

綜上所述，赤峰地區蒙古族冠心病患者CYP2C19基因存在不同的基因型和代謝型，且與漢族冠心病患者間存在差異，掌握CYP2C19基因的多態性分布對冠心病患者抗凝藥物的選擇具有重要意義。