熒光免疫微流定量檢測急性心肌梗死三聯的性能及診斷效果評價

陳桂芳，楚華星，邢 喆，吳 蕾

北京大學首鋼醫院檢驗科,北京 100144

近年來，由于人們生活方式的改變和人口老齡化問題的影響，急性心肌梗死(AMI)的發病率逐年升高。有研究發現，早期診斷和治療能顯著降低AMI病死率，改善患者預后[1]。心肌標志物為人體內在心肌損傷時能夠出現特異性變化的指標[2-3]，理想的心肌標志物要求具有高靈敏度和高特異度。AMI三聯(以下稱心梗三聯)包括肌紅蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌鈣蛋白I(cTnI)，是目前臨床常用的輔助AMI診斷的心肌損傷標志物。不同的檢測方法所檢測的心肌標志物水平可能存在差異，對其診斷AMI的靈敏度和特異度產生影響。深圳微點生物公司研發的esLabs hyper i300全自動干式熒光免疫分析儀是一款主動式微流控芯片檢測儀，該儀器具有操作簡便、通量高和速度快等優點[4]。本研究評價了熒光免疫微流定量檢測心梗三聯的性能及診斷效果，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年11月至2019年5月本院急診科收治的53例疑似AMI患者為研究對象，其中經冠狀動脈造影確診為AMI的患者33例為AMI組，其中男24例、女9例，平均年齡(66.7±16.8)歲；診斷為冠心病等其他疾病的患者20例為非AMI組，其中男15例、女5例，平均年齡(69.4±18.5)歲。選取同期健康體檢者30例為對照組，其中男22例、女8例，平均年齡(67.4±16.4)歲。納入標準：臨床資料完整者。排除標準：合并腫瘤者；合并骨骼及腎臟疾病者。3組研究對象年齡、性別比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑 深圳微點生物公司生產的esLabs hyper i300全自動干式熒光免疫分析儀和微流控定量試劑盒(免疫熒光法)。

1.3方法

1.3.1診斷性能分析 以冠狀動脈造影結果為診斷標準，評價熒光免疫微流定量檢測結果的陽性率；并采用ROC曲線(以Myo>100 ng/mL、CK-MB>5.0 ng/mL、cTnI>0.5 ng/mL為切點)分析心梗三聯對AMI的診斷性能。各指標的參考值：Myo<100 ng/mL、CK-MB<5.0 ng/mL、cTnI<0.5 ng/mL；陽性判斷標準：參考值上限以下為陰性，超出參考值上限為陽性。

1.4統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件進行數據分析。偏態分布的計量資料以M(P25，P75)表示，組間比較采用秩和檢驗；計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用ROC曲線分析心梗三聯對AMI的診斷性能。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.13組Myo、CK-MB和cTnI水平比較 3組Myo、CK-MB和cTnI水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；其中AMI組與非AMI組Myo、CK-MB、cTnI水平高于對照組(P<0.05)；AMI組CK-MB和cTnI水平高于非AMI組(P<0.05)。見表1。

表1 3組Myo、CK-MB、cTnI水平比較[M(P25，P75)，ng/mL]

注：與對照組比較，*P<0.05；與非AMI組，#P<0.05。

2.2熒光免疫微流定量檢測Myo、CK-MB和cTnI的陽性率比較 53例疑似AMI患者中，熒光免疫微流定量檢測Myo、cTnI的陽性率分別為 56.6%(30/53)、60.4%(32/53)，與冠狀動脈造影診斷AMI的陽性率[62.3%(33/53)]比較，差異無統計學意義(P>0.05)；而熒光免疫微流定量檢測CK-MB的陽性率為41.5%(22/53)，與冠狀動脈造影的診斷陽性率(62.3%)比較，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.3Myo、CK-MB、cTnI單獨及聯合檢測診斷AMI的性能分析 ROC曲線分析結果顯示，cTnI診斷AMI的AUC值最大(0.901)，與Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯、并聯比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；cTnI診斷AMI的靈敏度(87.9%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯(P<0.05)，特異度(85.0%)高于Myo、CK-MB、Myo+CK-MB+cTnI并聯(P<0.05)。Myo+CK-MB+cTnI并聯診斷AMI的靈敏度(97.0%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯(P<0.05)，但特異度僅為35.0%。Myo+CK-MB+cTnI串聯診斷AMI的特異度(100.0%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI并聯(P<0.05)，但靈敏度僅為39.4%。見圖1、表2。

2.4批內精密度驗證 熒光免疫微流定量檢測Myo、CK-MB、cTnI的批內精密度均不超過10%，符合判斷標準。見表3。

表2 Myo、CK-MB、cTnI單獨和聯合診斷AMI的性能分析

注：與Myo比較，*P<0.05；與CK-MB比較，#P<0.05；與cTnI比較，△P<0.05；與Myo+CK-MB+cTnI串聯比較，▲P<0.05。

表3 Myo、CK-MB和cTnI 批內精密度驗證結果

圖1 Myo、CK-MB、cTnI單獨及聯合檢測診斷AMI的ROC曲線

2.5批間精密度驗證 熒光免疫微流定量檢測Myo、CK-MB、cTnI的批間精密度均不超過10%，符合判斷標準。見表4。

表4 Myo、CK-MB和cTnI 批間精密度驗證結果

3 討 論

AMI是心肌持續缺血引發心肌細胞壞死的一種急性冠脈綜合征。AMI診斷的金標準為冠狀動脈造影。近年來，隨著敏感性更強的心肌標志物的出現，心肌標志物對AMI等急性冠脈綜合征的診斷價值成為研究的熱點。CK-MB是肌酸激酶的同工酶，心肌內含量較多，骨骼肌中也少量存在，所以在急性骨骼肌損傷時其可出現一過性升高。有研究發現，AMI時CK-MB的釋放量與梗死面積、程度、部位有關，所以即使其診斷AMI時的靈敏度和特異度不及cTnI,但可用于梗死程度和再發梗死的評估[6]。cTnI是橫紋肌的一種調節蛋白，是骨骼肌和心肌的結構蛋白，心肌缺血導致心肌損傷時，外周血cTnI水平迅速升高，且升高持續時間可達2周，有較長的診斷窗口期[7]。此外，cTnI對心肌損傷的診斷具有高靈敏度和特異度的特點，2007年美國臨床生化學會推薦cTnI為心肌梗死診斷的首選標志物[6]。Myo存在于肌肉中，尤其在心肌中含量豐富，其通常在AMI發作后1.5 h即可升高，是AMI時出現最早的血清標志物，其靈敏度高，但特異度較低，骨骼肌損傷、創傷、腎功能衰竭等疾病都可引起Myo水平的升高[8]。有研究證實，Myo、CK-MB和cTnI三者聯合檢測更有利于AMI的診斷[9]。

本研究采用微流控定量試劑盒，應用esLabs hyper i300全自動干式熒光免疫分析儀定量檢測cTnI、 CK-MB和Myo水平，進行精密度驗證，并用冠狀動脈造影診斷結果作為金標準，評價其檢測性能。研究結果表明，熒光免疫微流定量檢測cTnI、 CK-MB和Myo的批內、批間精密度均不超過10%，符合判定標準。熒光免疫微流定量檢測Myo、cTnI的陽性率分別為56.6%、60.4%，與冠狀動脈造影的診斷陽性率(62.3%)比較，差異無統計學意義(P>0.05)，表明兩種方法診斷結果一致性較好；而熒光免疫微流定量檢測CK-MB的陽性率(41.5%)明顯低于冠狀動脈造影診斷的陽性率(62.3%)(P<0.05)，表明用CK-MB診斷AMI時可能出現漏診情況，考慮與受試對象CK-MB的釋放量和發病時間可能影響CK-MB的檢測準確性有關。

本研究中，AMI組與非AMI組Myo、CK-MB、cTnI水平均高于對照組(P<0.05)；AMI組CK-MB、cTnI水平高于非AMI組(P<0.05)。表明Myo、CK-MB和cTnI水平與心肌損傷相關，并且CK-MB和cTnI水平與心肌損傷的嚴重程度有關,對AMI患者的診斷和疾病評估方面有重要的價值。以冠狀動脈造影的診斷為標準，制作ROC曲線，結果顯示，cTnI的AUC值最大，與Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯、并聯比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；cTnI診斷AMI的靈敏度高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯(P<0.05)，特異度高于Myo、CK-MB、Myo+CK-MB+cTnI并聯(P<0.05)，表明cTnI診斷AMI的特異度、靈敏度高，診斷性能好，為心肌損傷的首選標志物，與文獻[10]報道一致。而CK-MB、Myo對心肌梗死也具有一定的診斷價值，但本研究Myo、CK-MB和cTnI診斷AMI的靈敏度、特異度等與部分文獻的結果存在一定差別，可能與研究對象中有部分早期AMI患者Myo、CK-MB和cTnI還未升高有關。Myo+CK-MB+cTnI并聯診斷AMI的靈敏度為97.0%，但特異度僅為35.0%；而Myo+CK-MB+cTnI串聯診斷AMI的特異度最高(100.0%)，但靈敏度僅為39.4%。所以臨床可根據實際需求選擇聯合檢測的方式，以提高診斷的準確性，減少漏診和誤診。

綜上所述，cTnI診斷AMI的特異度、靈敏度高，心梗三聯并聯診斷AMI靈敏度高，串聯診斷AMI的特異度高，可根據臨床需求有選擇性地進行檢測，以提高診斷的準確性。熒光免疫微流定量檢測心梗三聯的性能良好，診斷效果佳，能基本滿足AMI的輔助診斷應用，適用于臨床實驗室。