降鈣素原室內(nèi)質(zhì)控品的制備與應(yīng)用

薄 帥

遼寧省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧沈陽(yáng) 110016

降鈣素原(PCT)是降鈣素的前體物質(zhì)，其作為診斷炎癥的血清標(biāo)志物具有重要的臨床價(jià)值，目前已被廣泛應(yīng)用于細(xì)菌感染特別是膿毒癥的早期診斷、病程監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)抗菌藥物使用等方面[1]。因此，做好室內(nèi)質(zhì)量控制，保障PCT檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性尤為重要。目前實(shí)驗(yàn)室使用的質(zhì)控品多為國(guó)外進(jìn)口質(zhì)控品，訂貨周期長(zhǎng)且價(jià)格昂貴，特別是干粉制劑，復(fù)融后容易產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)和較大的瓶間差，不利于實(shí)驗(yàn)室特別是基層醫(yī)院開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量控制工作。近年來(lái),已有學(xué)者利用患者血清標(biāo)本自制室內(nèi)質(zhì)控品來(lái)代替商用質(zhì)控品，并取得了滿意的效果[2-3]。本研究在此基礎(chǔ)上，利用患者血清自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品，并對(duì)其均勻性、穩(wěn)定性進(jìn)行了分析，評(píng)估了其臨床應(yīng)用價(jià)值，以期為臨床室內(nèi)質(zhì)控品的制備與應(yīng)用提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據(jù)中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)(CNAS)-GL005:2018文件要求[4]，收集本院檢驗(yàn)科日常工作中PCT檢測(cè)水平正常和較高患者的血清標(biāo)本。標(biāo)本要求無(wú)溶血、黃疸、脂血，乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒及梅毒均為陰性。

1.2儀器與試劑 Roche411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套PCT試劑，校準(zhǔn)品和高、低兩水平質(zhì)控品。

1.3方法 根據(jù)0.5 ng/L和2.0 ng/L兩個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平，將收集到的患者血清標(biāo)本中PCT檢測(cè)水平正常的標(biāo)本作為低水平室內(nèi)質(zhì)控品，將檢測(cè)水平較高的血清標(biāo)本用正常血清標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的PCT水平處于2.0 ng/L左右，作為高水平室內(nèi)質(zhì)控品。將2份血清標(biāo)本于-20 ℃冷凍后過(guò)濾，加入10%乙二醇防腐劑，然后采用5 mL玻璃瓶分裝，邊分裝邊混勻，分裝后于-20 ℃條件下保存，每天與羅氏PCT質(zhì)控品同時(shí)上機(jī)檢測(cè)，對(duì)其均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Microsoft Excel 2010對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。

2 結(jié) 果

2.1自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品均勻性評(píng)價(jià)結(jié)果 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品的瓶間不精密度分別為1.04%和0.96%，均滿足≤1/3室內(nèi)不精密度要求。見(jiàn)表1。

表1 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品均勻性評(píng)價(jià)結(jié)果

2.2自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果

2.2.1復(fù)融后穩(wěn)定性評(píng)價(jià) 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品復(fù)融后每天與羅氏質(zhì)控品同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，1個(gè)月內(nèi)結(jié)果均在控制范圍內(nèi)。見(jiàn)圖1。

圖1 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品1個(gè)月質(zhì)控效果圖

2.2.2長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)價(jià) 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品12個(gè)月的室內(nèi)不精密度分別為4.36%和3.89%，均≤1/3TEa(TEa=25%)，見(jiàn)表2。根據(jù)12個(gè)月的質(zhì)控圖和Westgard規(guī)則判斷，自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品與羅氏質(zhì)控品相關(guān)性良好，無(wú)偏離現(xiàn)象，與羅氏質(zhì)控品同步出現(xiàn)7次質(zhì)控失控現(xiàn)象，均與試劑有關(guān)，校準(zhǔn)后重新檢測(cè)均在控。見(jiàn)圖2。

表2 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果

圖2 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品12個(gè)月質(zhì)控效果圖

3 討 論

PCT含有116個(gè)氨基酸，可轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩锘钚缘慕碘}素，參與機(jī)體的鈣、磷代謝。健康人體內(nèi)PCT水平很低，當(dāng)細(xì)菌感染，特別是膿毒癥時(shí)，在脂多糖和各種炎癥介質(zhì)[如白細(xì)胞介素(IL)-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α]的作用下，血清PCT水平會(huì)在2～6 h顯著升高，在6～24 h達(dá)到峰值。PCT在炎性反應(yīng)發(fā)生時(shí)較其他炎癥因子更早升高，有助于感染的早期診斷[6]；當(dāng)治療有效時(shí)，PCT也較C反應(yīng)蛋白(CRP)等指標(biāo)更快地恢復(fù)至正常范圍內(nèi)[7]。但在病毒感染及自身免疫性疾病時(shí)，PCT水平多在正常范圍內(nèi)或僅輕度升高，有助于臨床鑒別病毒與細(xì)菌感染[8-10]。此外，PCT相較于其他炎性反應(yīng)標(biāo)志物(如CRP、TNF-α、IL-1、IL-6等)具有更高的靈敏度和特異度，在判斷病情嚴(yán)重程度、指導(dǎo)抗菌藥物使用、評(píng)價(jià)療效及預(yù)后等方面均具有較高的臨床價(jià)值。

近年來(lái)，隨著循證醫(yī)學(xué)的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制成為關(guān)注的重點(diǎn)，質(zhì)控品是開(kāi)展質(zhì)量控制工作的重要環(huán)節(jié)，理想的質(zhì)控品應(yīng)避免基質(zhì)效應(yīng)，且具有瓶間差小、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，水平應(yīng)處于醫(yī)學(xué)決定水平附近[11]。本研究根據(jù)CNAS-GL005:2018文件要求，收集本院檢驗(yàn)科日常工作中PCT檢測(cè)結(jié)果正常和較高患者的血清標(biāo)本來(lái)制備高、低兩水平PCT室內(nèi)質(zhì)控品。在對(duì)自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品進(jìn)行分裝時(shí)采用帶螺旋冒和內(nèi)塞的玻璃容器，分裝后均擰緊蓋帽，避免了損失和吸潮；盡量小量分裝，避免了開(kāi)瓶后對(duì)穩(wěn)定性的影響。分裝后間隔抽取10瓶進(jìn)行均勻性評(píng)價(jià)，自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品的瓶間不精密度分別為1.04%和0.96%，均滿足≤1/3室內(nèi)不精密度要求，提示自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品的瓶間差小，均勻性良好。

自制質(zhì)控品穩(wěn)定性評(píng)價(jià)主要包括復(fù)融后穩(wěn)定性評(píng)價(jià)和長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)價(jià)2個(gè)方面，穩(wěn)定性評(píng)價(jià)可以以不同的方式進(jìn)行，但同步穩(wěn)定性評(píng)價(jià)具有顯著性和精確性高的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[4]。本研究將自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品復(fù)融后每天與羅氏質(zhì)控品同時(shí)上機(jī)檢測(cè)，進(jìn)行同步穩(wěn)定性評(píng)價(jià)，并根據(jù)質(zhì)控圖和Westgard規(guī)則進(jìn)行判斷。復(fù)融后的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)結(jié)果均在控制范圍內(nèi)，提示自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品復(fù)融后結(jié)果穩(wěn)定。長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品12個(gè)月的不精密度分別為4.36%和3.89%，均≤1/3TEa(TEa=25%)，滿足室間質(zhì)評(píng)可接受性能指標(biāo)要求。在觀察的12個(gè)月中，自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品與羅氏質(zhì)控品相關(guān)性良好，無(wú)偏離現(xiàn)象，與羅氏質(zhì)控品同步出現(xiàn)7次失控現(xiàn)象，均與試劑有關(guān)，校準(zhǔn)后重新檢測(cè)即在控，這說(shuō)明自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品在-20 ℃條件下保存時(shí)，穩(wěn)定時(shí)間可達(dá)12個(gè)月。

綜上所述，本院自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品成本低廉，無(wú)基質(zhì)效應(yīng)，均勻性、穩(wěn)定性良好，在-20 ℃條件下保存時(shí)，穩(wěn)定時(shí)間可達(dá)12個(gè)月，可用于實(shí)驗(yàn)室PCT檢測(cè)系統(tǒng)的室內(nèi)質(zhì)量控制。