血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白在AP患者中的變化及其意義

王長起 李凱 索勝利

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）的發(fā)病率維持在（217～383）/1萬人左右[1]，在具有不良飲食習(xí)慣或者局部膽道系統(tǒng)疾病的人群中，AP的發(fā)病率進一步的上升。AP的發(fā)生能夠?qū)е禄颊叨嗥鞴俟δ芩ソ叩陌l(fā)生，增加患者的臨床預(yù)后惡化的風(fēng)險[2]。生物學(xué)因子的改變能夠?qū)е乱认賹?dǎo)管上皮細胞的損傷，增加腺體導(dǎo)管的張力，促進胰消化酶對于自身組織的損傷。在胰腺導(dǎo)管破裂的過程中，淀粉酶的釋放能夠為早期診斷AP提供重要的參考，同時上升的淀粉酶還能夠參與到AP患者局部胰腺組織損傷和炎癥反應(yīng)的擴散過程中[3]；C反應(yīng)蛋白（C reactive protein，CRP）的上升能夠誘導(dǎo)下游單核細胞或者巨噬細胞上調(diào)，促進炎癥因子IL-8對于胰腺組織的浸潤過程[4]；胱天蛋白酶募集域蛋白9（caspase recruitment domain protein 9，Card9）的上升能夠誘導(dǎo)炎癥信號通路的激活，參與到AP患者的病情進展過程中[5]。為了揭示血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白在AP患者中的變化及其意義，本次研究探討了不同指標的表達特點及其與患者病情的關(guān)系，從而為臨床上AP患者的診療提供定量化參考指標。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取南陽油田總醫(yī)院2014年6月至2016年12月確診的128例AP患者為AP組、年齡及性別相匹配的健康自愿者64例為對照組。AP組的年齡27～65歲，平均（39.9±11.5）歲，男性70例、女性58例，其中輕癥AP患者96例（Ranson評分＜3分）、重癥AP患者32例（Ranson評分≥3分），入院時AP患者的Ranson評分（1.59±0.72）分。對照組的年齡25～65歲，平均（41.4±14.0）歲，男性37例、女性27例。兩組研究對象的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標準：①AP患者的診斷及病情分級標準參考中華醫(yī)學(xué)會制定的《急性胰腺炎診治指南2014年版》標準[5]；②患者年齡范圍19～65歲；③患者入院后接受內(nèi)科治療；④入院后24 h內(nèi)完成本研究相關(guān)標本的采集，本研究獲得研究對象或其家屬的知情同意。排除標準：①胰腺癌；②伴有其他部位惡性腫瘤；③伴有免疫性疾病；④伴有感染性疾病；⑤長期酗酒、慢性肝腎功能疾病。

1.2 血尿淀粉酶、CRP檢測方法

清晨采集空腹靜脈血，1000r/min離心10min，分離采集上層血清，采集標本后檢測血尿淀粉酶、CRP。采用全自動生化分析儀（美國雅培i2000）及試劑盒，檢測試劑盒購自福建新大陸生物技術(shù)有限公司。

Ranson評分系統(tǒng)包括入院時的5項臨床指標和48h的6項指標，各項分別為1分，合計11分，評分在3分及以上時即為重癥胰腺炎（Severe acute pancreatitis，SAP）。

1.3 Card9蛋白的檢測

清晨采集空腹靜脈血5mL，加入Card9蛋白抗體，PBS液體洗滌5min。按照1∶500的比例加入羊標志的一抗5mL，4℃放置過夜，PBS緩沖液洗滌3次，每次5min，加入鼠來源的二抗（1∶1000）2 mL，室溫放置2 h，PBS液體洗滌5min。加入顯色底物，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍色，加終止液變黃。在450nm處測OD值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，計量數(shù)據(jù)表述采用（±s）表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用t檢驗；計數(shù)資料用（%）表示，采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson線性相關(guān)分析法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比較

入院后AP組患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平均顯著的高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 不同病情程度的AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比較

重癥AP組患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平均顯著的高于輕癥AP組患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.3 血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白與Ranson評分的相關(guān)性分析

128例AP患者，入院48h后Ranson評分為（2.11±0.80）分，血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平與Ranson評分均呈顯著的正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），見表3。

表1 兩組的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比較[（n，（±s）]Table1 Comparison of blood urease amylase，CRPand Card9 protein levels in two groups[（n，（±s）]

表1 兩組的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比較[（n，（±s）]Table1 Comparison of blood urease amylase，CRPand Card9 protein levels in two groups[（n，（±s）]

組別AP組對照組t值P值n 128 64血淀粉酶（U/L）834.6±149.271.2±17.8 40.7360.000尿淀粉酶（U/L）2115.8±251.8 549.5±106.247.6400.000CRP（mg/L）94.0±26.9 3.2±1.2104.3570.000Card9蛋白（相對表達強度）0.92±0.210.34±0.1120.7020.000

表2 不同病情程度的AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比較[（n，（±s）]Table2 Comparison of serum amylase，CRPand Card9 protein levels in APpatients with differentdegrees of disease[n，（±s）]

表2 不同病情程度的AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比較[（n，（±s）]Table2 Comparison of serum amylase，CRPand Card9 protein levels in APpatients with differentdegrees of disease[n，（±s）]

組別輕癥AP組重癥AP組t值P值n 96 32血淀粉酶（U/L）767.2±120.71044.2±142.8-10.7200.000尿淀粉酶（U/L）1839.5±239.62559.2±220.4-14.9980.000CRP（mg/L）81.5±21.4120.3±25.0-8.5090.000Card9蛋白（相對表達強度）0.75±0.18 1.15±0.20-10.5850.000

表3 血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白與Ranson評分的相關(guān)性分析Table3 correlation analysisbetween serum and urine amylase，CRP，Card9 protein and Ranson score

3 討論

過度飲酒、膽道系統(tǒng)疾病及遺傳易感因素等，均可以促進急性胰腺炎的發(fā)生發(fā)展，特別是在家族史的患者中，胰腺炎的發(fā)病率更高，可較普通人群上升3～4倍。胰腺炎特別是重癥胰腺炎的遠期生存指標較差，五年生存率不足35%，病死率可達15%以上[6]。通過早期進行診斷，可以提高胰腺炎的病情緩解率，降低病死率，并改善遠期臨床預(yù)后指標。臨床上主要采用影像學(xué)檢查的方式進行篩查，但影像學(xué)檢查難以在基層醫(yī)院廣泛普及，且檢查費用相對較高、檢查時間較長，臨床應(yīng)用具有一定的局限性。血清學(xué)指標檢測具有方便、經(jīng)濟、短期內(nèi)可反復(fù)測量的優(yōu)點，在消化系統(tǒng)疾病的篩查中發(fā)揮了重要的作用。

CRP作為炎癥反應(yīng)蛋白家族成員，其能夠在促進氧化應(yīng)激損傷或者加劇細胞膜的不穩(wěn)定性等方面發(fā)揮了重要作用，CRP蛋白還能夠通過影響細胞膜上鈣離子通道的開放，進一步加劇胰腺組織的缺血再灌注損傷[7-8]；血尿淀粉酶的改變能夠評估患者體內(nèi)胰腺導(dǎo)管破裂損傷過程中自身消化酶的釋放情況，血尿淀粉酶的上升能夠在發(fā)病早期即可出現(xiàn)顯著的改變，同時在評估病情的進展風(fēng)險方面能夠發(fā)揮一定的作用[9-10]；Card9蛋白的表達能夠誘導(dǎo)體內(nèi)的炎癥信號通路的激活，提高NF-KB的激活程度，增加MAPK信號通路激活過程中炎癥因子的合成和釋放[11-12]。基礎(chǔ)領(lǐng)域相關(guān)的研究還顯示，Card9蛋白能夠影響誘導(dǎo)巨噬細胞的激活，促進下游炎癥性細胞對于胰腺組織的浸潤。目前臨床上多數(shù)研究探討了CRP或者血尿淀粉酶在AP患者中的高表達情況，認為血尿淀粉酶或者CRP的上升與AP患者的病情密切相關(guān)，但對于Card9蛋白的分析研究較少。

本次研究分析了AP患者血清中相關(guān)生物學(xué)指標的表達，發(fā)現(xiàn)血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白均明顯的上升，高于正常對照人群血清學(xué)指標，提示了血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白均可能影響到AP的病情發(fā)生和進展過程，薈萃國內(nèi)外相關(guān)文獻，筆者認為血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白的上升主要與下列幾個方面的因素有關(guān)[13-14]：①血尿淀粉酶的上升主要考慮與胰腺導(dǎo)管的破壞導(dǎo)致的自身消化酶的釋放有關(guān)；②CRP的上升主要由于自身組織損傷過程中誘導(dǎo)的炎癥因子的富集過程有關(guān)，消化酶對于自身胰腺組織的破壞和分解作用，能夠誘導(dǎo)單核細胞的激活，提高CRP的合成和釋放的速度；③Card9蛋白是重要的炎癥信號通路因子，其對于MAPK信號通路的激活，能夠誘導(dǎo)鈣離子負載效應(yīng)，增加胰腺上皮細胞膜完整性的破壞，并能夠誘導(dǎo)線粒體的損傷。王海等[12]研究者發(fā)現(xiàn)在AP中，CRP的上升幅度可超過28%，特別是在合并有自身基礎(chǔ)性疾病的AP患者，CRP的上升更為明顯，遠期的多器官功能衰竭或者病死率均可進一步的上升。在不同病情的AP患者中，病情較重的AP患者中，血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白均可進一步的上升，提示了不同指標與AP患者的病情密切相關(guān)，這主要由于在腹膜損傷、胰腺組織破壞和繼發(fā)性的炎癥瀑布反應(yīng)過程中，機體應(yīng)激狀態(tài)下的腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)可顯著的激活，巨噬細胞或者間質(zhì)細胞釋放CRP、Card9蛋白的速度可顯著的上升。但部分學(xué)者并未發(fā)現(xiàn)Card9蛋白的表達與AP患者的病情程度具有線性的關(guān)系，這可能與Card9蛋白的檢測時機或者AP病情的評估標準的不一有關(guān)。AP的病情嚴重成分評分（Ranson評分）是評估患者預(yù)后的重要體系，相關(guān)關(guān)系分析可見，血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平與Ranson評分均呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，提示了血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白與AP的病情具有一定的相關(guān)性。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了Card9蛋白的表達與AP患者的臨床病理特征的關(guān)系。綜上所述，AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平升高顯著，并且與病情的嚴重程度具有一定的相關(guān)性。