bcl-10和蛋白表達(dá)的關(guān)系及其在胃腸MALT淋巴瘤的診斷應(yīng)用價(jià)值

袁馬馳

黏膜相關(guān)淋巴組織（MALT）淋巴瘤從結(jié)外邊緣區(qū)B淋巴細(xì)胞起源，臨床及遺傳學(xué)特征獨(dú)特［1］。對(duì)MALT淋巴瘤來說，t（1；14）（p22；q32）是其特有的染色體移位［2］。相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者在1999年將bcl-10基因從該易位斷裂點(diǎn)附近克隆出來［3］。Bcl-10屬于一種凋亡調(diào)節(jié)基因，參與多種腫瘤的形成［4］。本研究探討了bcl-10和蛋白表達(dá)及其在胃腸MALT淋巴瘤的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機(jī)選取2014年8月至2018年8月本院胃腸MALT淋巴瘤患者40例，另隨機(jī)選取同期本院非腫瘤性病變淋巴結(jié)28例，將其標(biāo)本取出來，常規(guī)石蠟切片，HE染色。

1.2 免疫組化及判斷標(biāo)準(zhǔn) （1）免疫組化：運(yùn)用S-P法，應(yīng)用Zymed公司生產(chǎn)的克隆系151、bcl-10單克隆抗體，將稀釋濃度設(shè)定為1：70，并應(yīng)用福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)的S-P試劑盒。（2）判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)bcl-10的分布、染色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行觀察，首先依據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分，無色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別評(píng)定為0分、1分、2分、3分，然后依據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比評(píng)分，陰性、陽性細(xì)胞≤10%、11%～50%、51%～75%、＞75%分別評(píng)定為0分、1分、2分、3分、4分。陽性標(biāo)準(zhǔn)為染色強(qiáng)度評(píng)分×陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分≥2分，核表達(dá)陽性標(biāo)準(zhǔn)為核陽性細(xì)胞數(shù)/全體陽性細(xì)胞數(shù)×100%≥30%［5］。

1.3 原位雜交檢測(cè) 應(yīng)用武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)的bcl-10 mRNA原位雜交試劑盒，將bcl-10寡核苷酸探針（地高辛標(biāo)記）設(shè)定為本研究探針。嚴(yán)格依據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。DEPC處理所用器皿、蒸餾水。切片免去探針，將陰性對(duì)照設(shè)定為RNA酶預(yù)處理，將陽性對(duì)照設(shè)定為已知陽性扁桃體組織。用酸性酚氯仿法將RNA從石蠟組織中提取出來，將cDNA逆轉(zhuǎn)錄合成后，用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）對(duì)API2-MALT1融合基因進(jìn)行擴(kuò)增。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 40例患者臨床病理特征分析 40例患者中，男28例，女12例；年齡32～73歲，平均（56.3±9.4）歲。在Ann Arbor分期方面，23例為Ⅰ期，12例為Ⅱ期，5例為Ⅲ期；在鏡下浸潤(rùn)深度方面，14例達(dá)漿膜層，13例達(dá)肌層，7例達(dá)黏膜下層，6例達(dá)黏膜層；在累及淋巴結(jié)情況方面，17例累及，23例未累及。具體見表1。彌漫的中心細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)胃腸壁，瘤細(xì)胞具有中等偏小的體積、中等的胞質(zhì)量、略不規(guī)則的核。一些癌細(xì)胞伴一定程度的漿細(xì)胞分化。癌細(xì)胞對(duì)黏膜被覆上皮及腺上皮造成侵蝕，促進(jìn)淋巴上皮病變的形成。

表1 40例患者臨床病理特征分析［n（%）］

2.2 40例患者的免疫表型分析 40例患者中，表達(dá)bcl-10蛋白36例，占總數(shù)的90.0%，陽性細(xì)胞呈彌漫分布，其中陽性信號(hào)只在胞質(zhì)定位21例，同時(shí)表達(dá)于胞質(zhì)胞核15例。Ann Arbor分期Ⅰ期23例患者中，核陽性2例，Ⅱ期12例患者中，核陽性9例，Ⅲ期5例患者中，核陽性4例，核陽性率分別為8.7%、75.0%、80.0%，Ⅰ期患者的核陽性率顯著低于Ⅱ期、Ⅲ期患者（P＜0.05），具體見表2。28例淋巴結(jié)正常健康體檢人員中，表達(dá)bcl-10蛋白16例，占總數(shù)的57.1%，陽性信號(hào)只在胞質(zhì)定位。B細(xì)胞高表達(dá)于淋巴濾泡生發(fā)中心，中等強(qiáng)度表達(dá)于邊緣區(qū)，微弱表達(dá)于套區(qū)細(xì)胞。

表2 40 例患者的免疫表型分析［n（%）］

2.3 40例患者的原位雜交結(jié)果分析 40例患者中，表達(dá)bcl-10 mRNA 39例，占總數(shù)的97.5%，陽性信號(hào)主要分布在胞質(zhì)，少數(shù)分布在細(xì)胞核。bcl-10蛋白和mRNA表達(dá)之間的差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 40例患者的PCR擴(kuò)增結(jié)果分析 高惡轉(zhuǎn)化型患者的T（11；18）陽性率顯著高于低度惡化患者（P＜0.05）。具體見表3。

表3 40例患者的PCR擴(kuò)增結(jié)果分析［n（%）］

3 討論

Bcl-10基因最先克隆于1例MALT淋巴瘤患者標(biāo)本中［具有t（1；14）（p22；q32）易位］，易位拼接了bcl-10基因（1p22）和IgH基因（14q32），IgH增強(qiáng)子控制著bcl-10，使其表達(dá)異常。Bcl-10基因同源于Ⅱ型馬皰疹病毒E10，有一個(gè)CARD結(jié)構(gòu)域存在于其N端，結(jié)構(gòu)上類似于所謂死亡結(jié)構(gòu)域，CARD存在于多種凋亡蛋白中［6］。體外功能試驗(yàn)顯示［7］，野生型bcl-10屬于一種抑癌基因，促凋亡作用微弱，能夠?qū)Χ喾N癌基因引發(fā)的惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)行以下抑制。

相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明［8-10］，在MALT淋巴瘤發(fā)生發(fā)展過程中，bcl-10高表達(dá)可能發(fā)揮著重要作用。進(jìn)展期MALT淋巴瘤和bcl-10蛋白核表達(dá)具有密切的關(guān)系。在淋巴濾泡各區(qū)域，bcl-10蛋白具有不同的表達(dá)。本資料結(jié)果表明，40例患者中，表達(dá)bcl-10蛋白36例，占總數(shù)的90.0%，陽性細(xì)胞呈彌漫分布，其中陽性信號(hào)只在胞質(zhì)定位21例，同時(shí)表達(dá)于胞質(zhì)胞核15例。Ann Arbor分期Ⅰ期23例患者中，核陽性2例，Ⅱ期12例患者中，核陽性9例，Ⅲ期5例患者中，核陽性4例，核陽性率分別為8.7%、75.0%、80.0%，Ⅰ期患者的核陽性率顯著低于Ⅱ期、Ⅲ期患者（P＜0.05），表達(dá)bcl-10 mRNA 39例，占總數(shù)的97.5%，陽性信號(hào)主要分布在胞質(zhì)，少數(shù)分布在細(xì)胞核。bcl-10蛋白和mRNA表達(dá)之間的差異不顯著（P＞0.05）。14例淋巴結(jié)正常健康體檢人員中，表達(dá)bcl-10蛋白8例，占總數(shù)的57.1%，陽性信號(hào)只在胞質(zhì)定位。B細(xì)胞高表達(dá)于淋巴濾泡生發(fā)中心，中等強(qiáng)度表達(dá)于邊緣區(qū)，微弱表達(dá)于套區(qū)細(xì)胞。高惡轉(zhuǎn)化型患者的T（11；18）陽性率顯著高于低度惡化患者（P＜0.05），與上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

總之，在胃腸MALT淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，bcl-10高表達(dá)可能發(fā)揮重要作用，bcl-10和蛋白表達(dá)在胃腸MALT淋巴瘤的診斷應(yīng)用價(jià)值高，有效補(bǔ)充了常規(guī)病理診斷，進(jìn)而將有效依據(jù)提供給臨床治療，從而有效提升臨床療效，改善患者預(yù)后，值得推廣。