革蘭陰性桿菌產(chǎn)超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)的檢出率及其與細菌耐藥性的關系

范 蓉， 武智聰， 梁翠娟， 李玉雪， 張華俐

(河北省石家莊市第一醫(yī)院檢驗科， 河北 石家莊 050011)

現(xiàn)如今，細菌耐藥性成為當下臨床治療中的熱點問題，也是臨床關注的難點。在整個革蘭陰性桿菌群體之中，最主要的是產(chǎn)超廣譜β-內酰胺酶菌株，其所造成的耐藥效果尤為明顯，因此對該菌株的檢測以及耐藥性進行分析會給臨床治療帶來有效的參考價值[1]。超廣譜β-內酰胺酶是由于β-內酰胺酶(BLA)出現(xiàn)基因突變而形成的，經(jīng)相關分析和報道表明此類酶屬于絲氨酸蛋白酶的衍生物[2]。1983年SHV-2基因型ESBL第一次被獲得，自此之后，其種類和數(shù)量在全球范圍內出現(xiàn)猛增[3]。本院為探討革蘭陰性桿菌產(chǎn)超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)的發(fā)生率及其與細菌耐藥性的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1菌株來源:2015年9月至2016年9月我院臨床痰標本、中段尿液、血液等分離的革蘭陰性桿菌732株，其中痰液224株，中段尿液244株，血液140株，胸腹水76株，分泌物48株。排除來自同一患者同一解剖部位標本的重復分離株。分離菌株采用甘油肉湯菌株保存液于-80℃冰箱保存。

1.2質控菌株:在研究過程中，為了保證結果科學有效，增強實驗結果的對比性和準確性，質控菌株均購自國家衛(wèi)計委臨檢中心，選擇大腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853作為藥敏試驗質控菌株，選擇大腸埃希菌ATCC25922作為不產(chǎn)ESBLs的陰性質控菌株，選擇肺炎克雷伯菌ATCC700603作為產(chǎn)ESBLs陽性質控菌株。

1.3儀器與試劑:所需的菌株分離培養(yǎng)基及藥敏M-H瓊脂平板均選自溫州康泰公司，選用Oxoid公司的藥敏紙片，使用法國生物梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK-2 Compact全自動鑒定與藥敏分析系統(tǒng)、AST-GN16藥敏測試卡。細菌分離培養(yǎng)按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第三版)進行。

1.4藥敏試驗:利用AST-GN16藥敏測試卡展開藥敏測試，藥敏紙片由英國Oxoid公司提供，使用法國生物梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK-2 Compact全自動細菌鑒定及藥敏分析儀進行藥敏試驗，藥敏試驗結果判斷參照美國臨床實驗室標準化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)2013版標準執(zhí)行，利用WHONET5.6對得到的藥敏結果進行統(tǒng)計分析。

1.5ESBLs檢測:通過標準紙片擴散的方式來實現(xiàn)。VITEK-2 Compact全自動細菌鑒定及藥敏分析儀提示肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs后，再使用雙紙片擴散法進行確認，在具體的測試過程中，參照CLSI標準，頭孢他啶抑菌環(huán)直徑小于等于22mm，頭孢噻肟抑菌環(huán)直徑小于等于27mm或上述兩種藥物加入克拉維酸后和不加克拉維酸抑菌環(huán)直徑差值大于5MM時，即表明有ESBLs出現(xiàn)。統(tǒng)計產(chǎn)ESBLs菌株在各科室中分布情況，對革蘭陰性桿菌產(chǎn)ESBLs的分離率進行檢測，通過革蘭陰性桿菌藥敏試驗找出可能產(chǎn)出ESBLs菌株，分析其與細菌耐藥性的關系。統(tǒng)計產(chǎn)ESBLs菌株在各科室中分布情況。

1.6統(tǒng)計學方法:使用SPSS21.0進行統(tǒng)計分析。本研究數(shù)據(jù)均為計數(shù)資料，以率(百分比)表示，統(tǒng)計方法采用行*列表χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1革蘭陰性桿菌產(chǎn)ESBLs的檢出率:732株臨床檢出率顯示，共產(chǎn)ESBLs株224株，產(chǎn)ESBLs檢出率30.60%。各菌株產(chǎn)ESBLs檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=8.162，P<0.05)。根據(jù)產(chǎn)生ESBLs菌株的多少，可由多到少排列為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、變形桿菌、產(chǎn)酸克雷伯菌，具體數(shù)據(jù)見表1。

2.2產(chǎn)ESBLs菌株在各科室中分布情況:經(jīng)過比較，產(chǎn)ESBLs菌株檢出率在各科室中差異有統(tǒng)計學意義(χ2=19.863，P<0.05)。產(chǎn)ESBLs菌株在各科室分布前幾個科室由多至少依次為重癥監(jiān)護室(占47.62%)、泌尿外科(占40.00%)、呼吸內科(占30.00%)、神經(jīng)內科(占28.57%)。見表2。

2.3革蘭陰性桿菌藥敏試驗結果:產(chǎn)ESBLs菌株對抗菌藥物耐藥率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=29.016，P<0.05)。產(chǎn)ESBLs菌株耐藥率較高的是青霉素類藥物，而對碳青霉烯類藥物呈高度敏感狀態(tài)，其中耐藥率排名前幾位的是氨芐西林(98.21%)、丁胺卡那霉素(96.43%)、頭孢唑啉(91.07%)、舒巴坦(67.86%)、環(huán)丙沙星(60.71%)。見表3。

表3 224株產(chǎn)ESBLs菌株對抗菌藥物耐藥性分析

3 討 論

醫(yī)院感染主要是由于產(chǎn)生ESBLs的菌株造成的，從本質上講，ESBLs屬于β-內酰胺酶的一種，其來源主要是大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，除此之外，其他的腸桿菌也能夠產(chǎn)生該物質，該物質能夠對第三代頭孢菌素產(chǎn)生水解效果，同時能夠被BLA抑制劑抑制[4]。ESBLs是廣譜酶的衍生物，該物質的基因存在于質粒之中，并通過其實現(xiàn)傳播，能夠對青霉素、頭孢菌素起到水解效果，由于在臨床治療過程中β-內酰胺類藥物應用泛濫，從而導致對其有耐藥效果的細菌數(shù)量不斷增長，在目前的研究領域中普遍認為ESBLs是對頭孢菌素產(chǎn)生耐藥效果的主要原因所在。根據(jù)相關的報道顯示，在我國產(chǎn)生ESBLs物質的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的分離率一直維持在15%～35%左右[5,6]。我院多個科室在研究過程中經(jīng)過分離得到了ESBLs，從而說明整個醫(yī)院正面臨著此類細菌的威脅，可能會由其導致嚴重的感染事件發(fā)生，為使全院上下高度重視，因此在實驗室針對ESBLs開展測試工作是非常有必要的，另外為了應對感染事件出現(xiàn)，已經(jīng)將ESBLs檢測定為常規(guī)項目。為了更好地指導臨床治療，應該針對我院ESBLs的分布情況和耐藥特征進行細致研究，為感染事件出現(xiàn)和耐藥性傳播做好防范措施。

研究結果表明，ESBLs對于亞胺培南、哌拉西林/他唑巴坦所表現(xiàn)出的耐藥效果比較差，但是對于氨芐西林、丁胺卡那霉素、頭孢唑啉等的耐藥效果要明顯很多，因此在對ESBLs進行臨床治療時，一定要根據(jù)藥敏試驗的結果對治療方案進行設計[7]。研究結果顯示，單產(chǎn)ESBLs菌株對于碳青霉烯類抗生素會表現(xiàn)出比較明顯的敏感性，這主要是因為質粒通常會帶有對抗生素產(chǎn)生耐藥效果的基因，根據(jù)相關的研究報道可以知道，部分ESBLs對頭孢他啶表現(xiàn)出敏感特征，主要是因為CTX-M-G1型占據(jù)主要地位[8]。

本文研究結果顯示，通過臨床分離出來的732株菌株，經(jīng)過一系列的研究和實驗之后得到，全部存在ESBLs產(chǎn)出，各菌株產(chǎn)ESBLs檢出率差異有統(tǒng)計學意義，其中大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌的產(chǎn)出量比較高。產(chǎn)ESBLs菌株檢出率在各科室中差異有統(tǒng)計學意義，重癥監(jiān)護室、泌尿外科產(chǎn)ESBLs菌株比例較高，故應對這兩個科室加以重視。產(chǎn)ESBLs菌株對抗菌藥物耐藥率差異有統(tǒng)計學意義，經(jīng)過藥敏試驗得出，產(chǎn)ESBLs菌株耐藥率較高的是青霉素類藥物，而對碳青霉烯類藥物呈高度敏感狀態(tài)，對其余的抗生素會表現(xiàn)出多重耐藥性，所以說，在臨床中對ESBLs陽性菌導致的感染時，最好使用亞胺培南或加酶抑制劑類復合抗生素。。

綜上所述，為避免抗生素濫用問題出現(xiàn)，要進行合理選擇，從而有效降低耐藥菌株的出現(xiàn)，進而避免其傳播而導致的不良事件發(fā)生。