ARID5B基因rsl0821936多態位點與兒童急性淋巴細胞白血病易感關聯的系統評價和meta分析

陳先睿，溫 紅，黃建琪，郭碧赟，白海濤，吳謹準

(廈門大學附屬第一醫院 兒科，福建 廈門 361000)

急性淋巴細胞白血病( acute lymphoblastic leukemia,ALL)是最常見的兒童惡性腫瘤，近年來其發病率具有上升趨勢。目前ALL的遺傳研究越來越受到關注，其中位于10q21.2的ARID5B(AT-rich interactive domain,ARID)基因與兒童AML的發病密切關聯，國內外研究對其中的5個單核苷酸多態性(SNP)(rs7073837；rsl0821936；rsl0994982；rs7089424；rsl0740055)最多，但研究結論尚存在爭議[1]。Guo等[1]曾對ARID5B基因rs10821936多態位點與兒童ALL的關聯性進行系統評價，但該研究僅對等位基因位點進行匯總分析，且存在重復數據的納入和缺失。本文進一步完善檢索和納入不同種族患兒的文獻，探討ARID5B基因rsl0821936多態位點與ALL易感的關聯性。

1 資料與方法

1.1文獻檢索策略

1.1.1計算機檢索數據庫 PubMed,Cochrane Library,Springer和Elsevier Science Direct，中國知網(CNKI)、維普數據庫、萬方數據庫和中國生物醫學文獻數據庫(CBM)，并回溯納入文獻的參考文獻，檢索起止時間均為建庫至2019年03月26日。同時手工檢索納入文獻的相關參考文獻。研究應用主題詞和自由詞相結合方式進行檢索。

1.1.2中文檢索詞 ARID5B、rsl0821936、基因多態性、ALL、兒童。以中國知網為例檢索式：(ARID5BOR rsl0821936)AND基因多態性 AND 急性淋巴細胞白血病AND兒童。

1.1.3英文檢索詞 ARID5B,rsl0821936,polymorphism,acute lymphoblastic leukemia,children,pediatric。以Pubmed數據庫為例檢索式為：(ARID5B[All Fields] AND (“acute lymphoblastic leukaemia”[All Fields] OR “precursor cell lymphoblastic leukemia-lymphoma”[MeSH Terms] OR (“precursor”[All Fields] AND “cell”[All Fields] AND “lymphoblastic”[All Fields] AND “leukemia-lymphoma”[All Fields]) OR “precursor cell lymphoblastic leukemia-lymphoma”[All Fields] OR (“acute”[All Fields] AND “lymphoblastic”[All Fields] AND “leukemia”[All Fields]) OR “acute lymphoblastic leukemia”[All Fields])。

1.2文獻篩選標準

1.2.1文獻納入標準 ①已公開發表的文獻；②明確的病例對照研究方法；③研究對象為兒童，且病例組均符合ALL診斷標準。④研究的目的基因位點為ARID5B的rsl0821936多態性；⑤病例組和對照組可直接或間接提取不同基因型、等位基因頻率的數據。

1.2.1文獻排除標準 ①重復發表的研究結果，如同一人群重復研究資料僅保留最多樣本量研究。②摘要或未發表的報告研究。

1.3文獻篩選、資料提取與質量評價

1.3.1文獻篩選 由臨床醫師陳先睿和溫紅獨立完成篩選文獻、提取資料和文獻質量評價，如遇分歧時共同協商討論解決或由黃建琪分析判定。通過閱讀標題和摘要排除明顯不符合的文獻，再對初篩后的文獻獲取全文進一步閱讀排查。對納入文獻提取資料包括：①一般資料：第一作者、發表時間、國家、語種、種族、樣本來源、樣本量、研究方法；②結局測量指標：病例組和對照組的各基因型例數，納入文獻Hardy-Weinberg平衡(HWE)檢驗結果。

1.3.2文獻質量評價 參照遺傳關聯性研究報告規范行質量評價[2]以及依據文獻[3]選取的14條標準對遺傳關聯性研究進行質量評價，包括：①計算把握度：是否對回顧性或前瞻性研究進行把握度計算，以評價計算Ⅱ類錯誤的概率；②對照組特征：是否充分描述了病例組和對照組來自同一人群且具有可重復性；③病例組特征：是否用文字或表格的形式充分描述了人口學和臨床特征；④連鎖不平衡檢測：用于解釋基因多態性的選擇或(和) 結果；⑤多態性的鑒定：依據NCBI的序列準確鑒定多態性；⑥計算錯誤率：是否采用相似或其他方法對基因型進行重復檢測，以計算錯誤率；⑦HWE檢驗：是否進行了對照組的HWE檢測或具有相應數據進行HWE檢測；⑧盲法：是否對實驗人員和結果評價者實施盲法；⑨多重檢驗校正：基因位點較多時，是否調整 α 水平控制可能存在的Ⅰ類錯誤概率被擴大；⑩協變量調整：是否在協方差分析中進行調整協變量；危險因素分析：是否應用回歸模型對其他相關危險因素進行回歸分析，計算出不同危險因素的OR值及其95%CI；人群分層分析：是否依據獨立的多態性進行人群分層評估與校正；重復性：是否驗證另外的獨立樣本；功能驗證性試驗:是否僅提供功能試驗的參考研究文獻。以“是”(滿足標準)、“ 否”(不滿足標準)和“ 不清楚”(文獻未描述)進行文獻質量評價[4]。

1.4統計學分析 應用Review Manager 5.3以及Stata12.0軟件行meta分析，以風險比(odds ratio,OR)及95%可信區間(confidence intervals,CI)作為效應量。采用Q檢驗和I2統計量判斷文獻間的異質性，若無統計學上異質性(I2≤50%)，采用固定效應模型進行meta分析，否則用隨機效應模型。分別采用風險等位基因頻率、等位基因、隱性、顯性和共顯性模型分析基因多態性與兒童ALL易感的相關性。對存在統計學上異質性的文獻，必要時采用亞組或敏感性分析異質性原因。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1文獻檢索結果 初步檢索獲得75篇相關文獻，15篇文獻[5-19]符合納入和排除標準進入本文系統評價(圖1)。15篇文獻共包含19個研究數據，病例組11 542例，對照組30 205例，中國人群的研究2篇[13-14]，國外人群的研究為13篇[5-12,15-19]。

2.2文獻偏倚風險評價 圖2a、2b顯示，19個研究條目1、9、13～14符合率為0，條目2、3符合率為100.0%，條目4的符合率為68.4%，條目7的符合率為63.2%。納入的19個研究均未行計算把握度、多重檢驗校正、多態性鑒定、協變量調整、危險因素分析、重復性以及功能驗證性試驗；19個研究均未描述是否采用盲法；所有研究的病例組和對照組均來自同一人群，同時均描述了病例組人口學及臨床信息；納入研究的meta分析中文獻Healy[7]、Kennedy[8]及Trevino等[12]對照組不符合HWE平衡(P<0.05)，文獻Xu(2013)[17]和Oris等[18]未提及HWE情況且未能提供數據進行HWE檢驗。見表1。

圖1 文獻篩選流程圖

表1 納入的19個研究的基本情況

圖2a 19個研究的偏倚風險評價結果

圖2b 19個研究的偏倚風險評價

2.3Meta分析結果

2.3.1風險等位基因頻率與兒童ALL易感的關聯性 19個研究中10個研究[5-14]提供了各個基因型的完整數據，5篇文獻包含9個研究[15-19]僅提供風險等位基因頻率的OR值和95%CI，包含病例總數41 747例，其中病例組11 542例，對照組30 205例。所有研究的風險等位基因頻率meta分析結果顯示，C等位基因頻率ALL組高于對照組(OR=1.77，95%CI=1.70-1.85，P<0.01)，異質性檢驗I2=40%，各研究間無統計學異質性(圖3a)。對基因型完整數據組和不完整數據組進一步分層分析顯示，基因型完整數據組C等位基因頻率ALL組高于對照組(OR=1.67，95%CI=1.49-1.87，P<0.01)，異質性檢驗I2=59%，各研究間具有統計學異質性；C等位基因頻率ALL組高于對照組(OR=1.83，95%CI=1.73-1.93，P<0.01)，異質性檢驗I2=0%，各研究間具有較好的統計學同質性(圖3b)。

圖3a 風險等位基因頻率與兒童ALL易感關聯性的meta分析

圖3b 風險等位基因頻率與兒童ALL易感關聯性的分層meta分析

2.3.2不同基因型和兒童ALL易感的關聯性meta分析 10個研究[5-14]提供了完整的基因型數據，其中病例組3 306例，對照組21 352例，meta分析結果提示，等位基因模型(C vs T)(OR=1.67，95%CI:1.49-1.87)(圖4)、顯性模型(CC+CT vs TT)(OR=1.92，95%CI:1.75-2.12)(圖5)、隱 性 模 型(CC vs CT+TT)(OR=1.94，95%CI:1.61-2.23)(圖6)和共顯性模型(CC vs TT)(OR=2.65，95%CI:2.321-3.03)(圖7a)以及(CT vs TT)(OR=1.71，95%CI:1.54-1.89)(圖7b)中基因多態性可增加兒童ALL的發生風險，見表2。

表2 ARID5B基因rs10821936的多態性與兒童ALL易感性的meta分析和亞組分析結果

注：#N研究數;Egger(P)：P值為Egger線性回歸法檢測發表偏倚;R:隨機效應模型;F:固定模型

圖4 ARID5B基因多態位點rs10821936等位基因模型與兒童ALL易感性關聯的meta分析

圖5 ARID5B基因多態位點rs10821936顯性模型與兒童ALL易感性關聯的meta分析

圖6 ARID5B基因多態位點rs10821936隱性模型與兒童ALL易感性關聯的meta分析

圖7a ARID5B基因多態位點rs10821936共顯性模型(CC vs TT)與兒童ALL易感性關聯的meta分析

圖7b ARID5B基因多態位點rs10821936共顯性模型(CT vs TT)與兒童ALL易感性關聯的meta分析

按照種族進行亞組分析，結果發現中國人群的顯性模型(CC+TC vs TT)(OR=2.16，95%CI:0.93-5.00)與兒童ALL易感性無關，其余各基因模型與增加兒童ALL發生風險仍具有關聯，見表2。

2.4敏感性分析 通過剔除HWE不平衡的文獻Healy[7]、Kennedy[8]及Trevino[12]進行敏感性分析顯示：OR=1.77，95%CI:1.6-1.85，P<0.01，I2=47%；進一步剔除文獻Xu(2013)[17]和Oris[18]顯示：OR=1.72，95%CI:1.62-1.82，P<0.01，I2=4%，均提示前后結果差異無統計學意義。

2.5發表偏倚 對納入15篇文獻共19個研究采用漏斗圖和Egger回歸法對各基因模型行發表偏倚檢驗，Egger 回歸法結果顯示均P>0.05(表2)，提示各基因模型均無發表偏倚。

3 討 論

ARID5B基因多態性位點rsl0821936位于ARID5B基因內含子3中，大量研究發現ARID5B基因參與B祖細胞的分化和生長調控[20-21]，現有研究認為ARID5B基因多態性位點的發病機制在于其能針對ALL患者的B淋巴細胞前體亞群進行選擇性作用，使之具有超二倍性的基因結構性變異，進而導致B細胞系基因位點的功能變異最終造成ALL的個體易感性[22-23]。Emerenciano[5]和Ross等[11]研究顯示ARID5B基因多態性位點rsl0821936與兒童ALL易感風險并不具有關聯性，由于研究方法、種族樣本等差異與現有多數研究[6-10,12-18]結果存在爭議。因此，本研究進一步匯總分析國內外相關研究，研究結果更加可靠。

本文納入15篇關于ARID5B基因rsl0821936多態位點與兒童ALL易感的病例對照設計遺傳關聯性研究，14個條目文獻偏倚風險評價顯示：19個研究在研究設計、盲法、HWE檢驗以及統計檢驗方法條目的符合率均較低，提示本meta分析研究的納入文獻存在一定局限性。納入研究Healy[7]、Kennedy[8]及Trevino等[12]對照組不符合HWE(P<0.05)，且文獻Xu(2013)[17]和Oris[18]未提及HWE情況且未能提供數據進行HWE檢驗。

本研究探討ARID5B基因rsl0821936多態位點在不同基因模型下與兒童ALL易感的關聯性。納入的15篇meta分析顯示等位基因模型、顯性模型和共顯性模型中基因多態性與兒童ALL易感性相關，此結果和多數研究基本一致。通過種族進行亞組分析顯示中國人群的顯性模型與兒童 ALL 易感性不具有關聯性，綜合分析顯示納入研究和樣本數量少可能不具有代表性，該結論并不精確。本研究的敏感性分析顯示剔除HWE的不平衡或未提及該數據的研究后，合并的效應量結果基本保持一致，說明納入研究間并不具有明顯的統計學異質性。本研究按照不同基因模型進行meta分析合并效應量，進一步提高結果可信度。此外，對采用漏斗圖和Egger回歸法對各基因模型行發表偏倚檢驗顯示不同基因模型未見發表偏倚，進而增加本研究meta分析結果的可信性。

盡管本meta分析深度分析各基因模型以及不同種族的相關研究，但仍存在一定局限性。①納入基于病例對照研究，可能存在選擇性偏倚。②對亞洲人群的分層分析，尚需要進一步大樣本研究進一步證實。③亞組分析未能對不同ALL的不同B細胞性或T細胞性亞型、性別等情況進行分析，其中Trevino等[12]研究發現rsl0821936在ALL和AML組具有差異性，而進一步通過ALL不同亞型可區分出B-ALL。此外，該研究顯示B-ALL組的rsl0821936中C風險等位基因頻率比非B-ALL組和非ALL對照組都明顯增高。④ARID5B的不同SNP與兒童ALL的關聯性并非獨立單一影響因素，可能是存在不同SNP相互作用的綜合效應[7]。

結論：ARID5B基因rsl0821936多態位點與增加兒童ALL易感風險可能存在關聯，但與中國兒童ALL人群的易感相關性仍有待進一步研究。