2014~2018年某三甲醫院產生物膜銅綠假單胞菌耐藥性及患者臨床特征分析

王君君 張瑩

摘要：目的? 分析某三級甲等醫院分離的產生物膜銅綠假單胞菌耐藥性及患者的臨床特征。方法? 收集2014～2018年某三甲醫院臨床分離的產生物膜銅綠假單胞菌，進行菌種鑒定、抗菌藥物敏感性試驗并對藥物的耐藥率進行分析;收集患者的臨床資料，并對感染患者臨床特征進行分析。結果? 2014～2018年臨床分離的423株產生物膜銅綠假單胞菌均來自下呼吸道標本，來源以呼吸內科為主，年齡>60歲、合并有支氣管擴張等肺部基礎疾病的患者易引起產生物膜銅綠假單胞菌的感染;2015～2018年產生物膜銅綠假單胞菌對亞胺培南、美羅培南的耐藥率逐年下降。結論? 產生物膜銅綠假單胞菌對碳青霉烯類抗生素及氨基糖苷類抗生素耐藥率較低，低于非產生物膜的銅綠假單胞菌，臨床微生物學實驗室應選用可靠的藥敏方法和合適的培養時間，為臨床醫生提供準確的藥敏結果。

關鍵詞：產生物膜銅綠假單胞菌;耐藥性;臨床特征

中圖分類號：R378.99+1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.02.037

文章編號：1006-1959（2020）02-0129-03

Abstract：Objective To analyze the drug resistance of Pseudomonas aeruginosa produced in a tertiary hospital and its clinical characteristics. Methods? The clinically isolated Pseudomonas aeruginosa produced in a top three hospital from 2014 to 2018 was collected for strain identification， antibacterial sensitivity test， and analysis of drug resistance rate. Collect clinical data of patients and analyze the clinical characteristics of infected patients.Results? The 423 strains of Pseudomonas aeruginosa that were clinically isolated from 2014 to 2018 were derived from lower respiratory tract specimens. The source was mainly from respiratory medicine. Patients>60 years of age who had lung diseases such as bronchiectasis were prone to cause Infection of biofilm Pseudomonas aeruginosa; the drug-resistance rate of biofilm Pseudomonas aeruginosa to imipenem， and meropenem decreased from 2015 to 2018. Conclusion? The biofilm-resistant Pseudomonas aeruginosa has a low resistance rate to carbapenem antibiotics and aminoglycoside antibiotics， which is lower than that of non-biofilm-producing Pseudomonas aeruginosa. Clinical microbiology laboratories should choose reliable drugs Sensitization methods and appropriate incubation times provide clinicians with accurate drug sensitivity results.

Key words：Pseudomonas aeruginosa producing drug resistance;Drug resistance;Clinical characteristics

銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa）是ESKAPE病原菌之一[1]，由于多重耐藥甚至泛耐藥菌株的出現給臨床治療帶來了極大的挑戰，產生物膜的銅綠假單胞菌對抗菌藥物和宿主免疫反應的敏感性低于不產生物膜的銅綠假單胞菌，有研究顯示產生物膜的銅綠假單胞菌表現出比不產生物膜的銅綠假單胞菌高出100～1000倍的最低抑菌濃度（MICs），給臨床治療帶來極大的挑戰。本研究對2014～2018年本院臨床分離的產生物膜銅綠假單胞菌的臨床特征及抗菌藥物的耐藥率進行分析，以期為指導臨床抗菌藥物的合理應用提供依據。

1材料和方法

1.1菌株來源? 所有菌株均分離自2014～2018年我院送檢的下呼吸道標本，剔除同一患者相同部位重復分離株，其中2014年痰（sputum，SP）標本51例，支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）0例;2015年痰標本78例，支氣管肺泡灌洗液0例;2016年痰標本82例，支氣管肺泡灌洗液2例;2017年痰標本98例，支氣管肺泡灌洗液9例;2018年痰標本91例，支氣管肺泡灌洗液12例。

1.2主要儀器與試劑? VITEK2 compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統、細菌鑒定卡、M-H瓊脂培養基均為法國生物梅里埃公司生產，藥敏紙片為英國Oxoid公司產品。

1.3質控菌株? 銅綠假單胞菌ATCC27853來源于衛生部臨床檢驗中心。

1.4方法

1.4.1標本處理? 所有標本處理按《全國臨床檢驗操作規程》第四版[2]進行，標本劃線分離法接種血平板、中國藍平板及含萬古霉素的巧克力培養基，置于5%CO2，35℃培養18～24 h，觀察細菌生長情況，細菌生長緩慢時，延長培養時間。

1.4.2細菌鑒定與藥物敏感性試驗? 疑似菌株進行氧化酶試驗，氧化酶陽性的細菌使用VITEK2 compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統及配套的GN鑒定卡進行鑒定。藥敏試驗均采用K-B紙片擴散法，0.5麥氏菌液涂布于MH平板，35±2℃培養48 h，游標卡尺量取抑菌圈直徑。抗菌藥物包括：哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢他啶、頭孢吡肟、氨曲南、亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素、環丙沙星、左氧氟沙星。抗菌藥物敏感性依據美國臨床實驗室標準化協會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）2018版的標準[3]進行判定。

1.4.3臨床資料收集? 通過醫院HIS系統收集患者的臨床資料，分析產生物膜銅綠假單胞菌感染患者臨床特征。

1.5統計學方法? 藥物敏感性采用 WHONET 5.6軟件進行統計分析，計數資料采用（n）或（%）表示。

2結果

2.1標本類型? 2014～2018年臨床分離的產生物膜銅綠假單胞菌的標本均以痰（SP）標本為主，支氣管肺泡灌洗液（BALF）標本比例呈逐年上升趨勢，見表1。

2.2科室分布? 2014～2018年共分離出產生物膜銅綠假單胞菌423株，共22個科室分離出產生物膜銅綠假單胞菌，其中前3位為呼吸內科65.01%（275/423），結核病專科14.18%（60/423），中醫科6.86%（29/423），見表2。

2.3性別及年齡分布

2.3.1性別分布? 2014～2018年分離出的產生物膜銅綠假單胞菌患者中，男性192例，占總患者人數的45.40%，女性231例，占總患者人數的54.60%，患者在性別分布上沒有明顯差異。

2.3.2年齡分布? 2014～2018年分離出的產生物膜銅綠假單胞菌的患者在年齡分布上以>60歲的老年人為主，占總患者人數的67.69%（287/424），其次是30～60歲，占31.60%（134/424），0～30歲最低，占0.71%（3/424）。

2.4疾病類型? 2014～2018年分離出的產生物膜銅綠假單胞菌的患者現病史以呼吸系統疾病為主，主要為支氣管擴張、慢性阻塞性肺疾病、阻塞性肺氣腫，常見呼吸系統疾病類型及各類型所占的構成比例見表3。

2.5抗菌藥物的耐藥性變遷? 2014～2018年產生物膜銅綠假單胞菌對頭孢吡肟的耐藥率逐年下降，2015 ～2018年產生物膜銅綠假單胞菌對亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素的耐藥率逐年下降;2018年數據顯示，產生物膜銅綠假單胞菌對頭孢吡肟、亞胺培南、美羅培南的耐藥率均低于10.00%， 2014～2018年分離出的產生物膜銅綠假單胞菌的抗菌藥物耐藥率見表4。

3討論

產生物膜銅綠假單胞菌由于O-乙酰化古洛糖醛酸和甘露糖醛酸組成的黏液型胞外多糖產生過量，常導致銅綠假單胞菌體外培養產生黏液型菌落而體內以生物膜的形式生長，由于體內生物膜的存在可干擾正常宿主的吞噬防御，常導致細菌難以被徹底清除，從而引起感染的復發或慢性細菌性感染，常與患者肺功能的快速下降和預后不良有關[4]。本研究通過對2014～2018年分離出的產生物膜銅綠假單胞菌的臨床資料進行分析，發現423株產生物膜銅綠假單胞菌均來自下呼吸道標本，標本來源以呼吸內科為主，并且發現年齡>60歲，合并有支氣管擴張、慢性阻塞性肺疾病、阻塞性肺氣腫等肺部基礎疾病的患者易引起產生物膜銅綠假單胞菌的感染，分析原因可能與囊性纖維化患者易引起產生物膜銅綠假單胞菌感染相似，呼吸道中纖毛液體量減少而導致了對吸入微生物的清除延遲[4]，導致細菌之間、細菌與宿主之間發生黏附，細菌釋放大量的胞外多糖，進而形成生物膜。研究顯示[5]，銅綠假單胞菌通過群體感應來調節毒力和生物膜形成，國內外研究顯示[6，7]大環內酯類抗生素阿奇霉素可通過抑制群體感應系統有效抑制生物膜的形成。

2018年CHINET數據（http：//www.chinets.com/Chinet）顯示，23431株銅綠假單胞菌對抗菌藥物的耐藥率小于10%的藥物僅為多粘菌素B和阿米卡星，對碳青霉烯類抗菌藥物亞胺培南、美羅培南的耐藥率分別達到了30.7%和25.8%，本研究中2018年產生物膜銅綠假單胞菌（103株）的抗菌藥物的耐藥率低于CHINET數據中銅綠假單胞菌抗菌藥物的耐藥率，對碳青霉烯類抗菌藥物亞胺培南、美羅培南的耐藥率分別為8.90%和1.90%，可能與這些菌株免受抗生素的選擇性壓力有關[4]。

綜上所述，對于年齡>60歲，合并有支氣管擴張、慢性阻塞性肺疾病、阻塞性肺氣腫等肺部基礎疾病反復發生肺部感染的患者，臨床醫生應警惕產生物膜銅綠假單胞菌感染的可能，應及時送檢合格下呼吸道標本進行細菌培養。臨床微生物實驗室分離到產生物膜銅綠假單胞菌時，因與不產生物膜銅綠假單胞菌的耐藥率存在明顯差異，實驗室應選用紙片擴散法或Etest法作為常規敏感性試驗方法，由于這些菌株在24 h內生長不良，將孵育時間延長至48 h后讀取藥敏結果，為臨床醫生提供準確的藥敏結果，同時應在檢驗報告單上備注或及時與臨床醫生溝通，以便臨床醫生結合藥敏結果和生物膜特性，選擇合理的聯合用藥方案。

參考文獻：

[1]Mulani MS，Kamble EE，Kumkar SN，et al.Emerging strategies to combat ESKAPE pathogens in the era of antimicrobial resistance：a review[J].Frontiers in Microbiology，2019，10（4）：1-24.

[2]尚紅，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第4版.北京：人民衛生出版社，2015：568-571.

[3]Clinical And Laboratory Standards for antimicrobial susceptibility testing[M].Wayne：CLSI.2018：M100S.

[4]James H.Jorgensen，Michael A.Pfaller.臨床微生物學手冊[M].王輝，馬筱玲，錢淵，等，譯.第11版.北京：中華醫學電子音像出版社，2017：982-996.

[5]Christiaen SEA，Matthijs N，Zhang XH，et al.Bacteria that inhibit quorum sensing decrease biofilm formation and virulence in Pseudomonas aeruginosa PAO1[J].FEMS Immunology&Medical Microbiology，2014，70（3）：271-279.

[6]牛瑜，姜天翼，龐力.阿奇霉素和克拉霉素對銅綠假單胞菌生物膜形成的作用[J].臨床檢驗雜志，2018， 36（4）：53-57.

[7]Francesco I，Livia L，Paolo V.Antivirulence activity of azithromycin in Pseudomonas aeruginosa[J].Frontiers in Microbiology，2014，5（4）：1-7.

[8]高雅婷，李曉霞，段金菊.銅綠假單胞菌的群體感應系統及其抑制劑研究進展[J].中國抗生素雜志，2018，43（11）：1338-1343.

收稿日期：2019-10-15;修回日期：2019-10-25

編輯/肖婷婷