大鯢細菌性疾病研究進展

張晗 鄧捷 趙虎 孔飛 馬紅英 姜維 張紅星 王啟軍

摘 要：為深入了解和治療大鯢（Andrias davidianus）細菌性疾病，針對已知的大鯢細菌性疾病的致病病原菌、發病的臨床特征及診斷防治措施進行了簡單概述，并提出了相應研究展望。

關鍵詞：中國大鯢（Andrias davidianus）;細菌性疾病;防治

中國大鯢（Andrias davidianus），俗稱娃娃魚，隸屬兩棲綱（Amphibia）、有尾目（Caudata）、隱鰓鯢科（Cryptobranchidae），因其具有較高的食用和藥用價值，近年來成為陜西、湖北等省份農業產業化和特色農業重點開發動物品種[1-2]。隨著大鯢人工養殖規模的不斷擴展，細菌性疾病，例如：腹脹病、敗血病等，嚴重威脅養殖個體的健康，甚至引起養殖群體的大量死亡，造成養殖企業虧損，已成為大鯢養殖產業發展的重要制約因素。本文從致病菌的分類及主要特征、大鯢發病的臨床特征及其診斷防治措施幾個方面對大鯢細菌性疾病的現狀進行了概述，并提出了相應研究展望，以期為大鯢產業發展和相關領域研究提供基本資料和參考[3-5]。

1 致病細菌分類及主要特征

引起大鯢細菌性疾病的致病菌主要包括8個屬的13種細菌，具體分類及主要特征見表1。其中，在氣單胞菌屬（Aeromonas）中，溫和氣單胞菌（Aeromonas sobria）與嗜水氣單胞菌（A. hydrophila）的區別要點在于前者生化特性方面對七葉苷和水楊苷的分解不明顯;豚鼠氣單胞菌（A. caviae）與同屬上述兩種菌最重要的區別在于生化特性方面的發酵葡萄糖產酸不產氣。假單胞菌屬（Pseudomonas）的惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）和熒光假單胞菌（P. fluorescens）多個特征較為相似，區別要點為前者不液化明膠、不產生卵磷脂酶，陳舊培養物上有腥臭味。柱狀黃桿菌（Flavobacterium columnaris）之前歸屬于屈撓桿菌屬（Flexibacter），名柱狀屈撓桿菌（Flexibacter columnaris）。除此之外，屈撓桿菌屬部分細菌會引起大鯢患爛嘴病或爛尾病，布魯氏桿菌屬（Brucella）某些細菌會使大鯢患腹脹病[6]。

2 細菌性疾病分類

2.1 腹脹病

又稱腹水病，是大鯢規模化養殖中的主要疾病之一。患病鯢食欲不振，行動呆滯，偶見嗆水狀。全身較柔軟，頭部、腹部腫脹，嚴重時腹部上翻，眼球突出。解剖可見腹腔有呈淡黃色的積水，肝腫大，腸、肝、胃有出血點，并伴有不同程度的潰爛。體表無潰爛，疣點凸出，部分個體死亡時體表分泌大量黏液[7-8]。引起大鯢腹水病的病原菌主要有6種，包括嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌、熒光假單胞菌、布魯氏桿菌、嗜麥芽寡養單胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）、腐敗希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）[9-11]。陶凱等在患病鯢中分離得到的腐敗希瓦氏菌、熒光假單胞菌、嗜麥芽寡養單胞菌、布魯氏桿菌四株菌，其均會引起大鯢肝臟、心臟病變，其中后三者還會致使脾臟發生病變，進而導致脾臟淋巴細胞增生[11]。趙澤民在多尾患病鯢體內分離到的幾株病原菌也均使大鯢肝臟、心臟、脾臟發生不同程度病變[12]。

2.2 腐皮病

又稱皮膚潰爛病或爛肢病，患病率高，危害性大。患病鯢體表黏液脫落，出現白色小點或白色斑塊狀，嚴重者進一步腐爛至可見帶紅色肌肉，四肢最為嚴重。頭、尾、口腔處均有出血。解剖可見肝臟腫脹，腸胃充血，心臟失血，肺和肝臟均呈紫紅色。氣單胞菌屬的嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌、維氏氣單胞菌（A. veronii）、點狀氣單胞菌（A. punctata）、殺鮭氣單胞菌（A. salmonicida）均能引起大鯢患該病[8，13-15]。

2.3 赤皮病

患病鯢全身紅腫、膨脹，體表有大面積不規則紅斑，紅斑區域可見淺黃色圓形小顆粒或小顆粒破裂引起的潰爛病灶。解剖可見腹水增多，肝臟腫大，有出血點，腸糜爛。該病廣泛流行，熒光假單胞菌為其致病菌，主要通過體表創傷處入侵[16]。

2.4 敗血病

患病鯢皮膚潰爛，尤以四肢和腹側最為突出。口腔黏膜彌散性出血。解剖可見肝臟腫脹有出血點;肺臟出血，呈紫紅色;腸道出血、糜爛。敗血病的致病菌主要包括遲鈍愛德華菌（Edwardsiella tarda）、熒光假單胞菌、嗜水氣單胞菌、弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii）、柱狀黃桿菌[16-19]。余波等人工回歸感染試驗表明嗜水氣單胞菌產生β—溶血環，致死率較弗氏檸檬酸桿菌和柱狀黃桿菌更高[18]。王高學等指出熒光假單胞菌一方面可通過體表創傷感染使大鯢體表產生潰瘍性紅斑，嚴重者發展成敗血病，另一方面，其可產生內毒素損傷組織細胞，此為敗血病根源[16]。

2.5 腸炎病

患病鯢體表黏液增多，皮膚無光澤，食欲減退，偶見吐食。或狂躁激動、四周亂撞，或萎靡不振、行動遲緩。糞便不成形，嚴重者呈黏液膿血便，泄殖孔呈紅色，稍摁腹部有血水流出。解剖可見腸道充血、糜爛。該病的病原菌主要為腸型點狀氣單胞菌（Aeromonas punctata f. intestinalis），孫翰昌等在患腸炎病大鯢的腸道、肝臟和腹水中均分離出了該種致病菌[20]。

2.6 疥瘡病

該病大鯢幼體、成體均可感染，無明顯流行季節，不易流行。患病鯢體背部皮膚及肌肉組織發炎，形似膿瘡。嚴重者肌肉組織滲出體液，繼而壞死、形成潰瘍。解剖可見腸道充血發炎[21]。該病的病原菌為疥瘡型點狀氣單胞菌（Aeromonas punctata f. furunculus）[22]。

2.7 打印病

又稱紅梅斑病。患病鯢體表有豆粒狀紅斑，嚴重者紅斑處表皮腐爛，發病部位主要集中在背部、尾部，少數在軀干和四肢。解剖未見肝臟、心臟、胃、腸、肺等部位病變。該病的致病菌主要為遲鈍愛德華菌和屈撓桿菌屬（Flexibacter）部分細菌[8]。有報道稱點狀氣單胞菌點狀亞種（Aeromonas punctata sub. punctata）也是該病致病菌[23]。

2.8 爛嘴病

又稱口腔潰爛病，患病鯢主要為成鯢和幼鯢，死亡率高。癥狀表現為口腔潰爛，或唇腫大、滲血、潰爛，嚴重時露出上、下頜骨;或唇外觀正常，口腔內上腭組織形成大塊蝕斑，出血嚴重。長期不進食，體質變差，易引發感染進而死亡。該病主要由屈撓桿菌屬的細菌引起，其中，有研究指出柱狀黃桿菌多與嗜水氣單胞菌、檸檬酸桿菌及大鯢虹彩病毒（Andrias davidianus iridovirus，ADIV）混合感染[24-25]。

2.9 爛尾病

患病鯢尾部皮膚充血、發炎、糜爛，分泌白色臭味黏液，周圍皮膚呈現白色。嚴重者尾部肌肉壞死、腐爛，骨骼外露，有淡黃色或暗紅色液體滲出。該病致病菌主要為嗜水氣單胞菌、屈撓桿菌屬細菌及熒光假單胞菌[11，26]。

2.10 爛腳病

患病鯢肢體紅腫、末端有內凹病灶、腳底發炎潰爛，皮膚壞死呈灰白色，肌肉出血，嚴重者斷肢。解剖可見肝臟腫大充血，胃、腸有點狀充血。該病病原菌主要為嗜水氣單胞菌[8]。

2.11 水腫病

患病鯢頭部、眼瞼、腹部、后肢腫大，解剖可見水腫部位有淡黃色或透明液體流出，胃、大腸明顯水腫，腹腔和胸腔有積液。該病主要由致病性大腸桿菌（Escherichia coli）毒素引起體內組織水腫進而損傷中樞神經，死亡率極高[8]。

3 細菌性疾病的診斷及防治

3.1 細菌性疾病的主要診斷方法

大鯢細菌性疾病種類多，有些臨床癥狀較相似，并且容易引起繼發性感染和混合感染。所以除觀察患病鯢癥狀及病理變化之外，可采用實驗診斷以進一步確認病原細菌種類。現階段實驗診斷的方法主要包括：（1）利用微生物生理生化檢測技術，包括反復增菌、菌落分離、多種生理生化指標鑒定等，結果穩定、準確，并且可以獲得該種致病菌，供后續研究使用，缺點在于繁瑣重復、費時費力。（2）ELISA技術，該技術屬于免疫學檢測范疇，依據抗原、抗體特異性結合的原理檢測出致病菌，特異性好，靈敏度高。（3） PCR技術，即在體外進行特定DNA片段的復制，操作簡單、特異性好、靈敏度高。（4）芯片技術，具有大規模、高通量的特點，可在極短時間內用極少量的樣品獲得大量信息，通過一步檢測即可確定待檢樣品中致病細菌的種、屬、亞型、毒性、致病性及耐藥性等[27-28]。

3.2 細菌性疾病的預防措施

3.2.1 環境 大鯢生殖環境確保陰涼無風，水質干凈，水溫10～25 ℃，溶氧量3 mg/L及以上，pH 6.8～8.8[29-30]。采用微流水養殖或靜水養殖，靜水養殖需勤換水，定期監測水體各項指標;定期消毒滅菌，清除潛在病原，可采用20 mg/L的高錳酸鉀浸泡全池，確保養殖池潔凈安全。與此同時也可將大鯢用10 mg/L的高錳酸鉀浸洗15～20 min，增強大鯢自身抵抗力[7-8]。

3.2.2 餌料 餌料來源應確保安全，健康無病害，新鮮投喂，投喂前可采用5%食鹽浸泡30 min進行消毒滅菌，殘餌必須及時清除。餌料投喂要確保定時、定量、定位、定質，并根據季節、年齡、水溫、攝食狀況等因素靈活調整。另可在餌料中添加藥物以增強組織器官抗菌功能，提高機體免疫能力[31-32]。

3.2.3 日常管理 清楚苗種來源，確保苗種不攜帶病原，在捕撈、運輸、放養過程中避免苗種受傷。建立戶籍檔案和日常生產管理日志，及時掌握大鯢健康狀況。成鯢養殖階段，大鯢代謝旺盛，體重增長迅速，養殖密度相對增大，發病幾率增加，所以需合理控制養殖密度。養殖過程應遵守“三巡”（上午、下午、晚上巡池）、“三看”（看大鯢、看餌料、看糞便）、“三動手”（動手呵護大鯢、動手處理餌料、動手打掃養殖池），注重預防為主，綜合防治[33]。

3.3 細菌性疾病的治療手段

3.3.1 傳統抗生素 患病鯢若能正常進食，則將藥物注入餌料中或直接投喂藥物即可;若不能正常進食，則需采取浸浴、注射、涂抹或遍灑等方法。藥敏試驗表明，嗜水氣單胞菌對氟苯尼考、鏈霉素、環丙沙星、氟潔霉素和丁胺卡那霉素最敏感，對新霉素次之，對四環素、強力霉素、青霉素、頭孢菌素、磺胺異嚼唑、氟哌酸不敏感[34-35]。惡臭假單胞菌對舒普深、諾氟沙星、呋喃妥因等敏感[36]。熒光假單胞菌對鏈霉素、氯霉素、氟哌酸、慶大霉素高度敏感[16]。弗氏檸檬酸桿菌對頭抱呱酮、氨曲南、先鋒噻肟和頭孢三嗪等敏感，對左氧氟沙星、青霉素和美滿霉素等次之[37]。柱狀黃桿菌對頭孢噻吩、頭孢拉定高度敏感[25]。恩諾沙星、諾氟沙星對魚類赤皮病、敗血病、爛鰓病、打印病、腸炎病等病原菌均有較好的抑菌效果[38-39]。由于某些不同來源的同種細菌對抗生素的敏感程度有一定的一致性和差異性，或部分細菌經多年進化對某種抗生素的敏感程度已明顯大大降低，因此需針對性地采用相應高敏藥物對細菌性疾病加以防治，同時注意避免濫用抗生素引起的病原菌耐藥性問題，合理選藥，選藥前可進行相應藥敏試驗，以達到最佳效果[40-41]。目前，大鯢細菌性疾病的普遍治療方法總結如下。

腹脹病，該病爆發性不強，較為常見，起因主要為水質污染和食物不干凈，發病初期癥狀不明顯，如若及時發現，易治療。中后期癥狀明顯，此時可采用（1）肌肉注射硫酸慶大霉素，劑量為5 000～10 000 IU/kg，每天一次，連續3～7 d;（2）能攝食者按計量混合服用多維150 mg/kg和恩諾沙星100 mg/kg，每天一次，連續5 d;（3）若為靜水養殖，每日加換水1～2次。

腐皮病的治療可采取：（1）肌肉注射硫酸慶大霉素注射液（80 mg/支），一日一次0.3 mL，連續注射5 d，對潰瘍面大的，涂抹慶大霉素原粉;（2）用1片二氧化氯泡騰片劑加5升水藥浴5～6 min，連續藥浴5 d;（3）金霉素軟膏涂抹大鯢體表潰爛處，每天一次，連續5 d，病鯢潰爛部位逐漸恢復，白斑消失，食欲恢復，治愈率100%[15]。