結腸癌患者血清miR-192和miR-23a水平的變化及其臨床意義

富榮威，張英輝

（1沈陽二四五醫院 檢驗科，遼寧 沈陽110042；2北部戰區總醫院 檢驗科，遼寧 沈陽110016）

結腸癌屬于胃腸道常見腫瘤，其發生及發展屬于多步驟及多基因過程，由于結腸癌處于腹腔內，影像學檢查及內鏡檢查難度較大，影響早期診斷［1］。微小RNA （miR）屬于非蛋白質編碼小分子RNA，其中miR-192屬于抑癌基因，miR-23a屬于促癌基因，在腫瘤的發生及發展中均起到重要作用［2-3］。基于此，本研究旨在探討結腸癌患者血清miR-192及miR-23a水平的變化情況及其臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院2016年3月至2019年2月期間收治的64例結腸癌患者作為結腸癌組，選取同期我院收治的42例腫瘤性息肉患者作為良性息肉組，并選取同期我院30例健康體檢者作為對照組。結腸癌組：男28例，女36例；年齡32～73歲，平均 （52.63±4.28）歲。良性息肉組：男18例，女24例；年齡31～72歲，平均 （52.49±4.22）歲。對照組：男13例，女17例；年齡32～70歲，平均 （52.14±4.19）歲。三組的一般資料比較無統計學差異 （P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢驗方法入院時所有入選者均空腹抽取肘靜脈血，結腸癌組術后2周再次抽取肘靜脈血，將標本裝入試管中，于室溫下靜置1 h，3 000 r／min離心5 min，取血清，置于-70℃冰箱內保存待測。采用PCR技術測定血清miR-192及miR-23a，取5 mL血液置于真空管內，2 000 r／min離心10 min，取1 mL血清，加入1 mL TRIzo1，充分混勻，4℃下1 200 r／min離心10 min，取上清液，加入0.2 mL氯仿，靜置約3 min，再次離心15 min，取上清液，加入0.5 mL異丙醇，于-70℃冰箱內靜置過夜。第2 d，溶解后，4℃下1 200 r／min離心10 min，去除上清液，采用DEPC水配置的75%乙醇洗清，稍微晾干，加入20 μL經DEPC處理的雙蒸水，溶解。采用紫外線分度計測定中 RNA量及 A260、A280值。于各組 RNA抽提物中取 1 μg RNA進行反轉錄，獲取cDNA；樣品混合均勻后進行離心，置于37℃下孵育60 min。將逆轉錄產物置于保存于-20℃下，采用primer express 3.0軟件，結合目標基因的miRNA序列及引物設計原則設計，合成qPCR檢測引物及探針。目標基因探針及內參基因探針均為5'端，標記采用FAM報告熒光，3'端標記采用TAMRA淬滅熒光。取中RNA 2 μg加入內參U6和目的小分子RNA miR-192及miR-23a逆轉錄引物，置于70℃下反應約10 min，再給予冰育約2 min，加入其他試劑。反應程序：置于42℃及70℃下反應，時間為60 min與10 min，立即取出cDNA產物，置于冰上冷卻、備用；模板選取逆轉錄產物，擴增時采用實時定量PCR儀，置于95℃下反應，反應3 min與15 s，以促進起始模板及PCR循環模板變性；再置于60℃下反應45 s，達到退火效果，循環35次。采用相對定量法計算miRNA相對量表達，以2-△△CT法分析基因相對表達量。

1.3 統計學方法采用SPSS 25.0統計學軟件處理數據，計量資料以±s表示，采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析檢驗；相關性采用Pearson法檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組的血清miR-192及miR-23a水平比較miR-192水平：結腸癌組＜良性息肉組＜對照組；miR-23a水平：結腸癌組＞良性息肉組＞對照組，組間比較差異有統計學意義 （P＜0.05）。 見表 1。

表1 三組的血清miR-192及miR-23a水平比較 （±s）

表1 三組的血清miR-192及miR-23a水平比較 （±s）

組別 n miR-192 miR-23a結腸癌組 64 0.76±0.34 3.47±1.12良性息肉組 42 1.43±0.61 1.30±0.59對照組 30 3.14±1.02 0.96±0.25 F 126.361 115.209 P 0.000 0.000

2.2 結腸癌組手術前后miR-192及miR-23a水平比較與術前相比，結腸癌組術后miR-192水平較高，miR-23a水平較低，差異有統計學意義 （P＜0.05）。見表2。

表2 結腸癌組手術前后miR-192及miR-23a水平比較 （±s）

表2 結腸癌組手術前后miR-192及miR-23a水平比較 （±s）

時間 n miR-192 miR-23a術后 64 2.43±0.89 1.09±0.48術前 64 0.76±0.34 3.47±1.12 t 14.023 15.626 P 0.000 0.000

2.3 結腸癌組血清miR-192與miR-23a相關性相關性分析結果顯示，結腸癌組血清miR-192與miR-23a水平呈負相關（r＝ -0.997，P＝ 0.000）。

3 討論

miR-192基因位于人體11號染色體，多表達于肝臟、結腸、腎臟等組織中，其在結腸癌、肺癌、肝癌等疾病中表達水平較低，被稱為腫瘤抑制性miRNA［4］。miR-192的差異性表達可用于惡性腫瘤的早期診斷，且在其轉移、分期、預后判定中具有重要意義，其可有效抑制二氫葉酸還原酶的作用，進而控制細胞周期；機體還可通過上調miR-192基因表達，使細胞周期發生阻滯［5］。本研究結果顯示，miR-192表達水平：結腸癌組＜良性息肉組＜對照組，結腸癌組術后miR-192表達水平高于術前，表明機體下調miR-192表達水平與結腸癌的發生及發展密切相關，結腸癌原發病去除后，使機體微環境有效改善，機體miR-192的表達水平也隨之升高。

miR-23a屬于miR-23的亞型，參與了細胞發育的各個階段，且在腫瘤的發生及發展中發揮重要作用，屬致癌基因，在結腸癌、肺癌等惡性腫瘤中呈高表達，在腫瘤細胞轉移中起促進作用［6］。miR-23a通過靶向性抑制作用，使抑制因子1蛋白發生轉移，進而使細胞增殖、轉移及侵襲進程不斷加快；此外，miR-23a表達上調還可反映浸潤深度、結腸癌分期情況、腸道黏膜惡性轉化情況等，在結腸癌轉移、浸潤等方面也發揮重要作用［3-4］。本研究結果顯示結腸癌組miR-23a表達水平＞良性息肉組＞對照組，結腸癌組術后miR-23a表達水平低于術前，表明miR-23a表達增加與結腸癌的發生及發展密切相關，結腸癌原發病去除后，機體微環境有效改善，機體miR-192表達水平也隨之降低；同時相關性分析結果顯示，結腸癌組血清miR-192與miR-23a水平呈負相關，表明兩者存在內在聯系。

綜上所述，血清miR-192及miR-23a水平變化在結腸癌的發生及發展中發揮重要作用，兩項指標有望作為結腸癌診斷的重要腫瘤標記物。