全自動磁微粒發光免疫分析法檢測梅毒抗體結果分析

薛建華

（江蘇省常州市武進中醫醫院，江蘇 常州 213161）

梅毒是由梅毒螺旋體（，）感染導致的一種性傳播疾病，主要通過性接觸或血液傳播。全世界每年新增病例達到1200萬例，嚴重威脅人類健康。梅毒血清學試驗是診斷梅毒的重要依據，梅毒的篩查是各醫療機構的重要要工作，但梅毒的血清學實驗假陽性和假陰性一直困擾著臨床工作者，因此采用更為高效的梅毒抗體檢驗技術對于梅毒的正確診斷，以減少漏診和誤診非常重要。本文應用全自動磁微粒發光免疫分析法檢測梅毒抗體，分析梅毒抗體陽性者的不同科室來源、年齡、性別；梅毒抗體結果不同定量區間的假陰性假陽性；檢測灰區的設定。探討此方法作為臨床篩查梅毒常規方法的應用價值。

1 材料與方法

1.1 樣本基數 我院檢驗科2018年1月-2019年5月之間全部梅毒抗體檢測標本，共10985份標本，LIS系統導出資料，并按性別和不同年齡組分組（年齡組分為：＜30歲、30-60歲和＞60歲三組）；按科室來源分組（婦產科、內科、骨科、皮膚科等等）；梅毒抗體檢測結果按照S/CO值＜0.4、0.4≤S/CO值＜0.7、0.7≤S/CO值＜1、1≤S/CO值＜4、……、≥10.0分組分析。本研究內容方法報倫理委員會同意，保密患者信息。

1.2 含促凝劑真空管采集患者空腹外周靜脈血3 mL，2 h內3000 r/min 離心10 min分離血清，并保證不溶血，于當天檢測，重復送檢標本僅計第1次檢測結果。梅毒抗體（TP-Ab）檢測采用美國雅培公司i2000型全自動磁微粒發光免疫分析儀，試劑盒原裝，TP-Ab檢測按照嚴格操作規程進行，每次檢測按要求設空白對照、陰性對照和陽性對照，以及定值室內質控品作質量控制保證，TP-Ab的S/CO值≥1.00為梅毒抗體陽性。梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）試劑為日本富士瑞必歐株式會社產品，嚴格按說明書操作和判定結果。快速反應素試驗（RPR） 由上海科華公司提供。本研究期間TP-Ab檢測結果S/CO值在0.4-18.0之間的當天全部做TPPA檢測。以TPPA檢測結果作為金標準，考察TP-Ab結果的假陽性和假陰性情況。

1.3 TP-Ab假陽性為：TP-Ab陽性而TPPA結果陰性。TP-Ab陽性與TPPA陽性符合率為TPPA陽性/TP-Ab。

表1 TP-Ab檢測結果分布及假陽性假陰性情況

表2 TP-Ab檢測結果S/CO值分段與TPPA一致性分析

1.4 統計學處理 采用SPSS 18.0統計軟件包。計數資料以率（%）表示，組間率的比較采用χ檢驗，＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 TP-Ab檢測結果分布及假陽性假陰性情況 見表1。

2.1.1 TP-Ab陽性率 男女相比，χ=5.2155，=0.0224；60歲以上與30-60歲相比，χ=5.4695，=0.0194。

2.1.2 TP-Ab假陽性率 男女相比，χ=0.1088，=0.7145；60歲以上與30-60歲相比，χ=4.5370，=0.0332。

2.2 TP-Ab檢測結果S/CO值分段與TPPA一致性分析 見表2。

2.2.1 在0.7≤S/CO＜10的區間內，TP-Ab檢測結果S/CO值與TPPA總符合率為95.1%。

2.2.2 試劑生產廠家提供的灰區范圍為0.7-4.0之間，本實驗顯示在此范圍95.1%。

3 討論

對于梅毒的診斷，臨床癥狀、病史、黏膜或皮損樣本的顯微診斷和血清學檢測結果是主要方法。而血清梅毒抗體的檢測是主要的實驗室診斷工具，尤其大量存在的潛伏性感染梅毒患者的篩檢。梅毒螺旋體感染人體后產生梅毒特異性抗體IgM和IgG，分別在感染后2周和4周產生，IgG可終生存在。非特異性梅毒螺旋體抗體較特異性抗體晚，在感染后5-7周產生，并隨疾病治愈轉陰。特異性梅毒抗體的檢測方法主要有金標法、酶聯免疫法（ELISA）和梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）等，而TPPA是公認的梅毒確認實驗。隨著化學發光技術的進步，各種全自動化學發光法被大量應用，其自動化程度高，檢測通量大，方法靈敏高效，被各醫院作為常規篩檢梅毒廣泛應用。本文應用全自動磁微粒發光免疫分析法對本院就診患者進行梅毒篩查，并對TP-Ab檢測結果S/CO值在0.4-18.0之間的當天全部做TPPA復檢，并對比分析性別、年齡、就診患者分布對TP-Ab假陽性結果的影響，以及不同S/CO值定量區間與TPPA結果的符合率、試驗的灰區設定是否合理等因素進行分析，探討該方法作為臨床篩查梅毒常規方法的價值。

本方法收集10985例臨床血清樣本，TP-Ab陽性共檢出133例，其中男55例，女78例，女性陽性率顯著高于男性（＜0.05），與其他作者等報道不同，而假陽性率則沒有統計學意義。60歲以上患者陽性率和假陽性率均顯著高于30-60歲患者，有統計學意義。這與很多同類統計結果相一致。老年患者特別是60歲以上人群陽性率較高的原因是可能是老年人隨年齡增加常伴有各類疾病，體內會產生一些類脂質抗體和（或）抗梅毒抗體的交叉抗原，從而與檢測試劑發生交叉反應出現假陽性，李彥等提出在非高危人群的老年人中TPPA陽性也不能作為感染梅毒的絕對依據，應該結合病史和臨床癥狀進行綜合分析。另外，老年患者主動檢測率則相對較低，在這些影響因素的作用下，一些感染人群暴露時間延遲至老年，可能也有關。老年梅毒感染率偏高的原因是多方面的。從科室分布結果顯示，全院大多數臨床科室均有檢出，分布并不均衡，本院檢出率前五位科室分別是皮膚科、神經內科、婦產科、腫瘤科和普外科，且婦產、腫瘤、神經內科假陽性率也較高。皮膚科承擔性傳播疾病的診治，自不需多言。腫瘤科假陽性率高，可能與其免疫力較低，導致其易感性增加有關，也可能與其體內非特異性抗體、類脂質抗體和自身抗體等特殊成分增多，使檢測出現假陽性，應予以鑒別診斷。神經內科，多腦梗、冠心病、高血壓之類老年慢性病，除了老年人前述的原因，也可能與這些疾病會產生的特殊成分在反應過程中存在一定的吸附作用，產生假的顯色反應而出現假陽性。本文檢出率較高的還有婦產科，尤其假陽性率相對最高，生理狀況的改變，如妊娠可導致假陽性。因此，當上述患者出現TP-Ab，陽性結果時，首先應視為可疑情況，除補充TPPA試驗，還需結合臨床特征進行鑒別診斷，以免誤診為梅毒，給妊娠者帶來不必要的痛苦。

本實驗以TPPA為確認試驗，將全自動磁微粒發光免疫分析儀檢驗的梅毒特異性抗體結果與之比較。按照S/CO值分段分析，TP-Ab的S/CO值＜0.7的標本，TPPA 試驗結果也全部陰性，全部符合；0.7≤S/CO＜1的標本1068份，其中TPPA陽性者3例，即有3例TP-Ab假陰性，陰性結果符合率99.72%；在 1≤S/CO＜4區段50例中，TPPA陽性6例，TP-Ab的陽性符合率12.0%；4≤S/CO＜7區段陽性符合率20.0%；7≤S/CO＜10符合率75%，S/CO≥10.0區段符合率100%。在0.7≤S/CO＜10的區間內，TP-Ab檢測結果S/CO值與TPPA總符合率為95.1%。試劑生產廠家提供的灰區范圍為0.7-4.0之間，本實驗顯示在此范圍95.1%，因此試劑廠家提供的灰區基本滿足臨床需要，在此區間內，存在假陰性和假陽性的可能性，這些假陽性與惡性腫瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病、妊娠等有關，因為這些疾病患者體內含有某些治療性抗體、類脂嗜異性抗體、類風濕因子、甲胎蛋白等，這些物質會與試劑中的抗原成分非特異結合，從而發生假陽性。

因此，當全自動磁微粒發光免疫分析儀檢驗梅毒螺旋體特異性抗體出現陽性結果時， 要綜合考慮患者的年齡、病史以及臨床表現，并參考具體S/CO值的范圍，再用TPPA 復檢，如果兩者均為陽性者才發出陽性報告，這樣可大大減少假陽性的發生。另外，很有必要驗證試劑廠家提供的灰區范圍是否當地適用。

總之，隨著梅毒抗體檢測方法的持續進步，大范圍地對梅毒篩查變得簡便易行，且準確度靈敏度也大大提高，對梅毒的防控起到積極作用。通過對梅毒篩檢陽性和假陽性的生理病理原因、技術方法局限性的分析也使我們在臨床上更有效避免漏診誤診，以免增加不必要的精神和經濟負擔。