小葉紅葉藤組培誘導研究

呂華麗，梁庚強，孫雪陽

(1.廣西八桂林木花卉種苗股份有限公司，廣西 南寧 530024； 2.廣西友之鑫農業投資有限公司，廣西 南寧 530028)

1 引言

小葉紅葉藤 (Roureamicrophylla) 牛栓藤科 (Connaraceae) 紅葉藤屬(RoureaAubl.)灌木。全屬約 46 種，中國 3 種，廣西都有分布[1]。攀援灌木，高 1～4 m，奇數羽狀復葉，其鮮紅色的嫩葉和果實具有非常好的景觀效果[2]。根和葉：活血通經、止血止痛，可用于閉經。葉：外用于跌打損傷、腫痛、外傷出血[3]。目前關于小葉紅葉藤的研究，特別是組培研究較少見報道，本文主要針對小葉紅葉藤組培誘導調試過程進行闡述。

2 材料與方法

2.1 試驗材料

從廣西友之鑫農業投資有限公司培育的小葉紅葉藤扦插苗中采集，按不同季節采集小葉紅葉藤健壯、無病蟲害萌條，選擇連續晴放3 d以上的天氣采集外植體。現場采集的外植體要用濕毛巾包扎，保持濕度帶回試驗室。

2.2 外植體消毒

采集的萌條去除羽狀復葉，剪成 3 cm 左右的長莖段，使用洗衣粉漂洗5～10 min，漂洗過程中使用玻璃棒不斷攪拌使莖段充分洗凈。漂洗完畢采用紗布封好燒杯口，置于流水下沖洗 1 h，然后用濾紙吸干水分備用。在無菌條件下，用乙醇、HgCl2消毒接種。接種 30 d 統計外植體的污染率、萌芽率和無菌活體獲得率等參數。

2.3 外植體的接種與培養

選擇幾種基本培養基，每種基本培養基接種消毒好的無菌莖段 30 段， 以肉眼觀察到分化生長的芽時定為外植體始芽萌動，培養 30 d 時進行統計,確定最佳的基本培養基。

確定最佳基本培養基后，采用正交設計方法，以 6-BA、NAA 等生長調節劑、Vc、碳源、光照強度、溫度等因素，構建不同因素組合、濃度配比的試驗方案進行試驗。定期觀察記錄芽的形態變化和生長狀況，調整試驗方案，篩選出適宜始芽誘導的因素組合。

2.4 培養條件

溫度 26 ℃，光照 12 h/d，光強 2000～2500 lx，瓊脂 3.8 g/L，pH值為5.8。

3 結果與分析

3.1 不同消毒方法對外植體污染率的影響

帶芽莖段使用75酒精以及不同濃度的0.1升汞消毒處理后，外植體污染數量與消毒時間成反比，處理時間越長污染率越低。在使用0.1升汞處理8 min 開始出現外植體死亡，并且隨著處理時間增長，外植體死亡率上升，二者成正比關系。由表 1 可知，小葉紅葉藤莖段最佳消毒處理為：75酒精30 s，0.1升汞6～8min。

表1 不同消毒方式對外植體消毒效果的影響

3.2 外植體培養

3.2.1 基本培養基篩選

選擇MS、1/2MS、改良MS(降低 NH4+/NO3-比值)和 WPM4 種基本培養基，在其中分別加入細胞分裂素 6-BA 0.5 mg/L 和生長素 NAA 0.1 mg/L 或IBA 0.2 mg/L。接種 30 d 后，統計始芽萌動情況。由表2可知，在不同植物生長調節劑下，MS、1/2MS 和改良 MS 培養基都可以誘導出無菌芽，改良 MS 培養基誘導效果最好。

表2 基本培養基對莖段誘導的影響

3.2.2 不同濃度激素組合對誘導率的影響

將消過毒的莖段接種在以改良MS 為基本培養基，附加不同濃度 6-BA、NAA、Vc 的 9 種培養基上。接種 30 d 后，統計萌動情況，試驗結果見表 3。當附加 6-BA0.8mg/L、NAA0.1mg/L、Vc5mg/L 時，誘導率最高，達 80%。由表3中極差值R 可看出，6-BA 的 R 值遠大于NAA、Vc，說明在小葉紅葉藤誘導過程中 6-BA 的影響效應高于NAA、Vc。比較各個水平的 K 值，6-BA、NAA 是 k2 最大，Vc 是 k3 最大，因此處理 5 為最佳結果。

表3 正交試驗設計及其極差分析

3.3 不同季節取材對離體培養萌發率的影響

在相同地點采集小葉紅葉藤莖段，采用相同消毒方法，接種于相同培養基上，接種 30d 后統計相關數據。通過分析表4結果發現，外植體消毒處理在不同季節相差不大，消毒效果較好，但誘導率分別為80、33.3，不同季節差異顯著。冬季采芽條誘導，相當一部分芽條處于休眠狀態，既不萌發也不枯死。因此建議，小葉紅葉藤誘導工作最好在春季進行，能夠有效提高誘導率。

表4 不同季節取材對外植體萌發率的影響

3.4 不同蔗糖含量對玻璃化的影響

玻璃化現象或水腫是植物組織培養過程中特有的一種生理失調或生理病變[4]，在小葉紅葉藤培養過程中經常出現材料呈半透明狀，組織結構發育畸形的水腫情況。出現玻璃化苗，后期很難發育，不長高不長葉，陽光直射易枯死。通過表 5 可知，降低蔗糖含量可顯著改善玻璃化現象(圖1、2)。

表5 不同蔗糖含量對玻璃化的影響

4 討論

該試驗研究了基本培養基、6-BA、NAA、Vc、蔗糖、季節等因素對小葉紅葉藤誘導的影響。結果表明，小葉紅葉藤的最佳誘導季節是春季；莖段最佳消毒處理為75%酒精30 s、0.1升汞6～8 min；最佳誘導培養基是改良MS+6-BA0.8 mg/L+NAA0.1 mg/L+Vc5 mg/L+蔗糖15 g/L。NH4+/NO3-比率很大程度影響植物器官的形成，本研究使用的四種基本培養基的NH4+/NO3-比率是改良MS

圖2 添加15g蔗糖生長情況(35 d)