山銀花鑒定及質量評價研究進展

李曼鈿 敖冬梅 陳君

[摘要] 山銀花作為常用中藥，亦是藥食同源產品，在市場流通中不僅有《中國藥典》規定的法定來源，更有民間藥用品種及混淆品慘雜其中。為了規范山銀花品質，建立穩定可控質量評判方法，本文試從山銀花近幾年來在定性鑒別和定量分析研究方面對其的質量控制的研究現狀進行總結，為山銀花質量控制和評價方法的完善和優化提供基礎。

[關鍵詞] 山銀花;基原植物;質量控制;定量分析

[中圖分類號] R284? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2020）03（b）-0029-04

[Abstract] As a common traditional Chinese medicine， Lonicerae Flos is also a homologous product of medicine and food. In the market circulation， it not only has the legal source stipulated in the Chinese pharmacopoeia， but also has folk medicinal varieties and mixed products. In order to standardize the quality of Lonicerae Flos and establish a stable and controllable quality evaluation method， this paper tries to summarize the research status of quality control of Lonicerae Flos from the aspects of qualitative identification and quantitative analysis in recent years， so as to provide a basis for the improvement and optimization of quality control and evaluation methods of Lonicerae Flos.

[Key words] Lonicerae Flos; Basal plant; Quality control; Quantitative analysis

山銀花（Lonicerae Flos）來源于忍冬科植物灰氈毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.、紅腺忍冬L. hypoglauca Miq.、華南忍冬L. confusa DC.或黃褐毛忍冬L. fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng的干燥花蕾或帶初開的花，其具有清熱解毒、疏散風熱的功效，主要用于治療癰腫療瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病發熱等癥[1]，是銀翹解毒丸（片）、犀羚解毒丸（片）、銀花口服液、維C銀翹片等多種中成藥的主要原料。近年來，山銀花還廣泛應用于食品、飲料、保健品、化妝品和獸藥等方面。我國的忍冬屬植物有98種，各省均有廣泛分布，以西南部種類較多，可供藥用的達47種[2]，山銀花藥材來源于其中4種植物。除藥典收載的來源，市場上還流通著其他忍冬屬植物作為地方或民間藥用品種，然不同基原植物的山銀花藥材及其混淆品的成分及功效均有所差異，且生長環境、采收季節、加工方式等多方面因素均不同程度影響山銀花的化學成分，因此有必要對其進行鑒別。當前，對山銀花的鑒別和質量評價方法包括藥典規定的性狀、顯微、薄層鑒別和含量測定等項目，多集中于《中國藥典》[1]規定檢測的活性成分綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷和川續斷皂苷乙;常結合高效液相色譜法、氣相色譜法、紫外-可見分光光度法、高效毛細管電泳法、液-質聯用技術等方法對山銀花的質量進行控制[3]。但中藥成分復雜，主要以多成分協同發揮療效，用一種或幾種成分含量的高低來評價中藥質量存在一定的局限性，因此有必要對山銀花建立全面有效的質量評價方法，保證安全用藥。本文對相關文獻進行了綜述，為山銀花鑒別和質量評價方法的研究提供參考。

1 山銀花的定性鑒別方法

對山銀花鑒別主要是通過將法定來源的品種與其他同屬植物及混淆品進行外觀性狀和成分特性的鑒別?！吨袊幍洹穂1]2015年版記載灰氈毛忍冬花蕾呈棒狀而稍彎曲，長3.0～4.5 cm，表面黃色或黃綠色，總花梗集結成簇;質稍硬，手捏之稍有彈性;紅腺忍冬的花蕾長2.5～4.5 cm，表面黃白至黃棕色，花柱無毛;華南忍冬的花蕾長1.6～3.5 cm，萼筒和花冠密被灰白色毛;黃褐毛忍冬的花蕾長1.0～3.4 cm，花冠表面淡黃棕色或黃棕色，密被黃色茸毛[1]。對于此類外觀描述較難將山銀花的4個來源之間進行區分，也難以將其與其他同屬品種及混淆品忍冬植物進行區分，需要借助顯微、薄層色譜、指紋圖譜等手段進一步鑒別。

1.1 顯微鑒別

山銀花顯微鑒別特征據《中國藥典》[1]記載如下：灰氈毛忍冬的腺毛較少，厚壁非腺毛較多，表面微具疣狀突起，偶見草酸鈣簇晶，花粉粒直徑54～82 μm;紅腺忍冬的腺毛極多，頭部盾形而大，厚壁非腺毛長短懸殊，表面具細密疣狀突起，有的胞腔內含草酸鈣結晶;華南忍冬的腺毛較多，厚壁非腺毛，單細胞，表面有微細疣狀突起，有的具螺紋，邊緣有波狀角質隆起;黃褐毛忍冬的腺毛有兩種類型：一種較長大，頭部呈倒圓錐形或倒卵形，另一種較短小，厚壁非腺毛平直或稍彎曲，表面疣狀突起較稀，有的具菲薄橫隔。根據顯微特征差異，王萌等[4]用數理統計方法對山東地區的忍冬、灰氈毛忍冬及嫁接植株花蕾的顯微特征差異進行了研究，區分了3種花蕾的粉末及表面顯微特征，可作為山銀花法定來源的判別依據?？祹浀萚5]用顯微鏡及數碼成像系統觀察并記錄山銀花與金銀花的微觀性狀特征，完善了山銀花4個基原植物的顯微特征，為其鑒別提供了更詳細方法。由于其他未有錄入法定標準的民間藥用品種及混淆品的顯微特征研究較少，因此，此種判別方法仍具有局限性。

1.2 薄層色譜鑒別

對山銀花的薄層色譜鑒別一般按照《中國藥典》[1]進行。因山銀花和金銀花中均含有綠原酸成分，以《中國藥典》[1]規定的綠原酸為對照不能很好地將兩者區分，而金銀花不含灰氈毛忍冬皂苷乙，馬躍新等[6]采用灰氈毛忍冬皂苷乙為對照品，三氯甲烷-甲醇-水（6∶4∶1）為展開劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，可以區分山銀花和金銀花。薄層鑒別法快速簡便，是山銀花鑒別的一種有效手段，但有關山銀花幾個種間的薄層色譜鑒別方法未見報道，仍需進一步研究。

1.3 指紋圖譜鑒別

指紋圖譜具有整體性和模糊性的特點，是一種綜合的、可量化的鑒別手段。構建指紋圖譜的方法主要有光譜法、色譜法等[7]。

1.3.1 光譜指紋圖譜鑒別? 光譜法以直觀、簡便和快速等優點，在鑒別中藥材方面得到廣泛運用。田建平等[8]用紅外指紋圖譜確定不同產區的華南忍冬特征峰，用聚類分析區別出山銀花（華南忍冬）的不同產區。馮潔等[9]用高光譜成像技術采集山銀花、金銀花光譜信息，用化學計量法處理后，建立起快速判別金銀花和山銀花的模型，可用于金銀花與山銀花的鑒別。銀勝高等[10]用紅外光譜法對廣西10個不同產地的紅腺忍冬樣品和6個不同產地的灰氈毛忍冬進行紅外光譜試驗研究，得到了廣西產紅腺忍冬和灰氈毛忍冬的特征吸收峰，可用于紅腺忍冬與灰氈毛忍冬的鑒別。禹亞杰等[11]用傅里葉紅外光譜法對14種不同產地不同品種藥用忍冬進行鑒別，結果發現該方法可在一定程度上鑒定和識別忍冬科不同品種藥用忍冬。采用光譜法鑒別山銀花，具有樣品無損，特征較為全面的特點，不失為山銀花鑒別可優先考慮的方法之一。然目前對山銀花鑒別的光譜法研究報道較少，需進一步深入研究。

1.3.2 色譜指紋圖譜鑒別? 色譜指紋圖譜鑒別中藥真偽、控制其質量是較傳統的方法，具有與光譜法同樣的整體觀特點。馮華等[12]采用高效液相色譜標定出13批山銀花和3批金銀花藥材12個共有峰，為山銀花鑒別提供了依據。林廷龍等[13]采用高效液相色譜梯度洗脫法確定了黃褐毛忍冬藥材特征圖譜中的9個共有峰，建立黃褐毛忍的特征圖譜，可用于黃褐毛忍冬鑒別。周游宇等[14]用高效液相色譜建立起10批山銀花配方顆粒高效液相色譜特征指紋圖譜，確定其8個共有峰，解析出山銀花5個共有峰成分，可用于山銀花配方顆粒的鑒別。高效液相色譜在鑒別山銀花方面研究相對較多，具有儀器精密，較為全面的特點，但其使用時仍需對樣品進行提取，樣品及試劑都有一定的損耗，是其缺點之一，可作為山銀花鑒別的補充。

1.4 分子生物學技術鑒別

DNA分子遺傳標記技術不受環境因素、個體發育階段及組織部位的影響，具有多態性強，準確率高等特點，在中藥材鑒別中得到廣泛運用。何志敏等[15]用同源克隆法從5個忍冬屬（忍冬、灰氈毛忍冬、紅腺忍冬、黃褐毛忍冬、華南忍冬）12個樣品中克隆FNSII基因，分析不同忍冬屬植物中的SNP位點，通過比較分析，獲得19個SNP位點，可用于將12個樣本鑒別為金銀花、灰氈毛忍冬、紅腺忍冬、華南忍冬及黃褐毛忍冬。胡凱等[16]以Bar-HRM聯用技術從DNA水平鑒別出金銀花與山銀花?，F代生物技術在鑒別山銀花方面有其精確獨到的一面，為山銀花鑒別提供好的方法。

2 山銀花質量評價的定量分析方法

2.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法因其靈敏度高、線性范圍廣等優點，不僅在山銀花鑒別中最為常用，且在山銀花的質量控制中也有廣泛應用。盧鳳來等[17]用高效液相色譜法檢測山銀花中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的含量，為山銀花藥材的質量控制提供了簡便可靠的方法。因高效液相色譜法和蒸發光散射檢測器同時測定綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙，可降低綠原酸等具有紫外吸收物質的檢測靈敏度，代晶等[18]采用高效液相色譜法、紫外檢測器和蒸發光散射檢測器同時測定灰氈毛忍冬中9種成分的含量，結果在考察范圍內，進樣量與各自峰面積之間線性關系良好。除了《中國藥典》[1]規定成分，山銀花還含有其他活性成分，如有機酸類（新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸及異綠原酸等）、黃酮類（木犀草苷等），因此在其質量評價時也常用這些成分作為參照。羅艷等[19]采用高效液相色譜法同時測定灰氈毛忍冬中7種有機酸的含量，發現7種有機酸在一定濃度范圍與峰面積線性關系良好，為灰氈毛忍冬質量控制提供了依據。王艷艷等[20]用高效液相色譜法測定灰氈毛忍冬中綠原酸與木犀草苷的含量，測出23個不同產地灰氈毛忍冬中綠原酸含量介于0.0368%～7.2956%，木犀草苷含量介于0.0187%～0.0962%，為其質量控制提供了依據。范紅梅等[21]采用高效液相色譜測定黃褐毛忍冬中木犀草苷的含量，發現木犀草苷在4.12～50.22 g范圍內呈良好的線性關系，可用于黃褐毛忍冬的質量控制。彭維等[22]用高效液相色譜法對紅腺忍冬的綠原酸、咖啡酸含量進行了測定，結果顯示綠原酸加樣回收率為99.6%、RSD為2.16%;咖啡酸加樣回收率為101.1%、RSD為3.26%，該方法可以對紅腺忍冬進行質量控制。山銀花質量控制采用高效液相色譜法常以一種或多種成分為對照，測定其含量，但由于中藥有效成分復雜眾多，此種方法具有一定局限性，還需進一步研究。

2.2 氣相色譜-質譜法

山銀花中含有揮發油成分，對其以揮發油進行質量評價常用氣相色譜-質譜法。黃麗華等[23]采用氣相色譜-質譜法聯用技術對花蕾期、銀花期、金花期的黃褐毛忍冬揮發油成分進行比較，從3個時期的黃褐毛忍冬揮發油中分別分離出揮發性成分，確定了不同時期的黃褐毛忍冬共44種化合物，為其質量評價提供了依據。茍占平等[24]用氣相色譜-質譜法分析紅腺忍冬干燥花蕾的揮發油成分，以計算機質譜庫檢索，分離鑒定出21個化合物。氣相色譜法在鑒別及測定含揮發油成分的中藥材中扮演重要角色，為山銀花揮發油成分鑒別及質量控制的重要方法。

2.3 光譜法

藥材的道地性是控制藥材商品質量的關鍵，申麗娟等[25]用電感耦合等離子體原子發射光譜法測定全國7個主要產地的26個山銀花樣品中的10種金屬元素的含量，研究得出山銀花不同產地金屬元素的含量分布特征，為山銀花資源質量控制提供了實驗依據。此外，光譜法在對山銀花各類成分的定量分析也有其獨到的優勢。張易等[26]采用近紅外光譜法測定山銀花中4種有機酸含量，用偏最小二乘法建立山銀花定量校正模型，建立了快速測定山銀花4種有機酸的方法。

2.4 其他方法

隨著科學技術的發展，山銀花的質量評價方法趨于多樣化。王磊等[27]用微量量熱法測定并繪制金銀花和灰氈毛忍冬作用于大腸埃希菌生長代謝過程的熱功率圖，建立生物熱動力學模型，檢測了金銀花、山銀花對大腸桿菌的抑制作用，為山銀花質量評價提供新的思路和技術平臺。殷召軍[28]以馬錢子苷、當藥苷、異綠原酸、木犀草苷、綠原酸為對照，用膠束電動毛細管電泳法測定山銀花中5種有效成分，結果山銀花5種成分在8 min內分離良好，線性范圍內r ≥ 0.9900，為山銀花及其制劑的質量控制提供了方法。近幾年來對山銀花的鑒別及質量評價方面的研究方法多樣且取得長足的發展，綜合化、全面化的質量評價是其發展的趨勢。

3 結語

綜上所述，目前對山銀花的研究日漸增加，為山銀花質量控制打下堅實的基礎，但其質量評價的方法多著眼于有效成分的含量測定，存在一定的局限性;同時還缺乏確切實用的質量等級評判和分級標準，不利于山銀花藥材商品國際化。隨著科學技術的發展，中藥質量評價的方法和技術也在進步，新的評價模式越來越傾向于全面評價，如劉昌孝院士提出的中藥質量標志物的概念，在建立中藥全程質量控制及質量溯源體系起有利作用[3]。還有學者提出的一測多評法、質量常數等級評價方法、開展中藥材全息圖譜質量評測人工智能系統構建研究的策略以及網絡藥理學的發展[3]，這些方法都為山銀花質量評價的發展提供了新的思路和方法。

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（收稿日期：2019-09-29? 本文編輯：顧家毓）