腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性探討

郭錦全　陳芳　何麗萍

[摘要] 目的 探討腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性。 方法 選取2015年1月～2017年1月我院收治的89例乳腺癌患者腫瘤組織切片和資料，在顯微鏡下對乳腺癌臨床病理特征觀察，同時分析腫瘤浸潤淋巴細胞與患者預后相關性。 結果 乳腺癌臨床病理特征與人類表皮生長因子受體2、年齡、Ki67和腫瘤大小沒有相關性，脈管癌栓侵襲、淋巴結陽性、組織學分級高與乳腺癌臨床病理特征存在相關性;乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈反比關系，腫瘤出芽數量越多，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越低，腫瘤出芽數量越少，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越高;經隨訪，高腫瘤出芽組無病生存率為90%，低腫瘤出芽組無病生存率為98%，兩組生存率存在明顯差異，患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平存在相關性。 結論 乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈負相關，乳腺癌腫瘤惡性程度與出芽水平存在相關性，與惡性程度高的臨床病理指標密切相關，可對患者預后產生影響。對腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性探討，可為患者臨床治療提供更有效理論依據和重要基礎。

[關鍵詞] 腫瘤出芽;乳腺癌;病理特征;腫瘤浸潤淋巴細胞;相關性

[中圖分類號] R737.9? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）05-0030-04

Correlation between tumor budding and clinicopathological features of breast cancer， tumor infiltrating lymphocytes and patient prognosis

GUO Jinquan1? ?CHEN Fang2? ?HE Liping3

1.Department of Breast and Thyroid Surgery， Guangzhou Panyu Central Hospital， Guangzhou? ?511400， China; 2.Department of Pathology， Guangzhou Panyu Central Hospital， Guangzhou? ?511400， China; 3.Statistics Office， Guangzhou Panyu Central Hospital， Guangzhou? ?511400，China

[Abstract] Objective To explore the correlation between tumor budding and the clinicopathological features of breast cancer， tumor infiltrating lymphocytes and patient prognosis. Methods The tumor tissue sections and data of 89 breast cancer patients treated in our hospital from January 2015 to January 2017 were selected， and the clinical and pathological characteristics of breast cancer were observed under a microscope. The correlation between tumor infiltrating lymphocytes and patient prognosis was also analyzed. Results The clinical characteristics of breast cancer were not related to human epidermal growth factor receptor 2 （HER-2）， age， Ki67 and tumor size. There was a correlation between vascular tumor thrombus invasion， lymph node position， tissue high grades and clinical characteristics of breast cancer. The level of breast cancer tumor infiltrating lymphocytes had an inverse relationship with the budding status. The more tumor buds， the lower the level of breast cancer tumor infiltrating lymphocytes. The lower the number of tumor buds， and the higher the level of cancer infiltrating lymphocytes. After follow-up， the disease-free survival rate of the high tumor budding group was 90%， and the disease-free survival rate of the low tumor budding group was 98%. There was a significant difference in survival rates between the two groups. There was a correlation between patient prognosis and breast cancer tumor budding level. Conclusion? The level of infiltrating lymphocytes of breast cancer is inversely related to the budding status. There is a correlation between the malignant degree of breast cancer tumors and the budding level， and it is closely related to the clinicopathological indicators of high malignancy， which can affect the prognosis of patients. The study of the correlation between tumor budding and the clinicopathological characteristics of breast cancer， tumor infiltrating lymphocytes and patient prognosis can provide more effective theoretical basis and important foundation for clinical treatment of patients.

[Key words] Tumor budding; Breast cancer; Pathological features; Tumor infiltrating lymphocytes; Correlation

乳腺癌是臨床上發病率非常高的惡性腫瘤，對患者身體健康產生嚴重威脅，影響了患者正常生活[15]。相關報道表明，該病發病率出現逐年上升趨勢，且發病年齡趨于年輕化。所以，需對該病發病因素進行積極探究，隨著醫學水平不斷進步和發展，分析方法越來越多。當前，可通過分子指導與臨床病例指標對治療方案的制定和對患者預后進行判斷。因為乳腺癌存在異質性，上述指標不能對患者預后進行準確判斷[2]。所以，應對新的生物學指標進行探討，旨在為患者提供更有效治療，從而改善患者預后，提高患者生活質量[3]。腫瘤出芽指在腫瘤浸潤最深處在間質內分布低于5個癌細胞或單個孤立癌細胞構成的癌巢，具有腫瘤肝細胞和上皮-間充質轉化特性，是早期腫瘤轉移階段，嚴重影響腫瘤轉移、進展和復發[4]。本研究主要圍繞腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月～2017年1月我院收治的89例乳腺癌患者腫瘤組織切片和資料。納入標準[5]：①臨床資料完善;②經過相關診斷，確診為乳腺癌患者;③符合乳腺癌臨床診斷標準患者;④認知功能正常和依從性高患者。排除標準[6]：①不愿參與本次研究或臨床數據不完善的患者;②伴有心絞痛或急性心肌梗死的患者;③凝血和肝腎功能異常患者;④妊娠期和哺乳期患者;⑤認知功能障礙和依從性低患者。本研究89例患者，年齡27～60歲，平均（43.39±8.39）歲。

1.2 方法

1.2.1 患者一般資料收集? 對患者一般資料進行收集，主要包括淋巴轉移狀況、患者年齡、分子類型、腫瘤大小和組織學分級等[7]。

1.2.2 判讀腫瘤出芽? 依據過往文獻報道，腫瘤浸潤最深的間質內低于5個癌細胞或單個孤立癌細胞卵巢組成為腫瘤出芽[8]。無出芽表示間質最深處沒有單個卵巢或癌細胞出芽。并在顯微鏡下，密集出芽視野進行選取，對腫瘤出芽狀況進行分析，單個視野最多出芽個數表示腫瘤出芽數[9]。

1.2.3 腫瘤浸潤淋巴細胞判讀及水平檢測標準? 應用福爾馬林對全部腫瘤組織進行固定，石蠟常規包埋對蠟塊進行制作，在進行連續4 μm切片后，使用蘇木素-伊紅（HE）進行染色，由病理科醫師對切片染色進行評價。在低倍顯微鏡視野下對代表性切片進行選擇，并對腫瘤浸潤淋巴細胞數目進行評估[10]。其水平以在浸潤性乳腺癌邊界處細胞占比進行分析，對遠離正常乳腺小葉、腫瘤邊界和原位癌漿細胞和淋巴細胞不進行計數。

1.3 觀察指標

分析乳腺癌腫瘤出芽狀況與TILs水平與臨床病理特征關系，包括年齡、腫瘤大小、淋巴結狀態、脈管癌栓侵襲、激素受體狀態、Ki67、人類表皮生長因子受體 2、組織學分級等。同時對腫瘤浸潤淋巴細胞與腫瘤出芽關系和患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平進行分析，對患者隨訪6個月。腫瘤出芽低高和腫瘤浸潤淋巴細胞低高評價標準：根據Hida等的方法將TILs的浸潤程度分級[11]，在顯微鏡低倍視野下選定有代表性的切片，評估TILs所占腫瘤細胞及周圍間質細胞的比例。

1.4 統計學方法

所有數據資料應用 SPSS 20.0 統計軟件進行統計學分析，計數資料以[n（%）]表示，采用Spearman相關分析腫瘤出芽情況與臨床病理特征和 TILs間的關系，組間差異采用 Log-rank 檢驗分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 分析乳腺癌腫瘤出芽狀況與TILs水平和臨床病理特征關系

乳腺癌臨床病理特征與人類表皮生長因子受體2、年齡、Ki67和腫瘤大小沒有相關性，脈管癌栓侵襲、淋巴結陽性、組織學分級高與乳腺癌臨床病理特征存在相關性，見表1。

2.2 分析腫瘤浸潤淋巴細胞與腫瘤出芽關系

乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈現反比關系，腫瘤出芽數量越多，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越低，腫瘤出芽數量越少，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越高，見表2。

2.3 分析患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平關系

隨訪2年后，低腫瘤出芽組中有3例疾病進展（其中骨轉移2例，肝轉移1例），高腫瘤出芽組中有6例疾病進展（其中骨轉移2例，肝轉移2例，肺轉移1例，腦轉移1例）。應用Kaplan-Merier生存分析發現，高腫瘤出芽組無病生存36例，生存率為90%，低腫瘤出芽組無病生存48例，無病生存率為98%，兩組生存率比較存在明顯差異，患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平存在相關性（r=0.694，P<0.05）。

3 討論

本研究對腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征及患者預后的相關性進行探討[12]。本研究結果顯示，乳腺癌腫瘤出芽越多，遠處轉移較多，淋巴結分級高，脈管癌栓浸潤較多，組織學分級高，對患者預后產生嚴重影響[13]。另外，本研究對免疫微環境中腫瘤浸潤淋巴細胞與腫瘤出芽關系探究，效果理想[14]。

腫瘤出芽是分布在腫瘤間質內小于5個腫瘤細胞組成的癌巢或單個腫瘤細胞。臨床研究證實，腫瘤出芽與膀胱癌、結直腸癌、鼻咽癌預后相關。腫瘤出芽是上皮-間充質轉化早期階段，且具有侵襲和遷移特征，在腫瘤轉移過程中具有非常重要作用。而轉移是由多種信號通路和細胞因子協同、多個環節參與及細胞內外微環境共同作用的復雜過程。曾在研究中證實，在腫瘤浸潤淋巴細胞陽性乳腺患者中，淋巴結轉移與腫瘤出芽存在相關性。本研究結果顯示，乳腺癌臨床病理特征與人類表皮生長因子受體2、年齡、Ki67和腫瘤大小沒有相關性等無關，脈管癌栓侵襲、淋巴結陽性、組織學分級高與乳腺癌臨床病理特征存在相關性。本次研究與臨床研究結果具有一致性，本研究結果進一步表明腫瘤免疫微環境與腫瘤出芽可產生相互作用，對患者預后產生嚴重影響，可依據腫瘤出芽與乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平、臨床病理特征進行有效治療[11]。腫瘤出芽具有侵襲性和遷移性，在腫瘤轉移方面具有很重要作用。因為信號通路和多種細胞因子會對轉移產生影響，所以此過程為細胞外和細胞內微環境共同作用過程[15]。

乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈反比關系，腫瘤出芽數量越多，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越低，腫瘤出芽數量越少，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越高;經隨訪，高腫瘤出芽組無病生存率為90%，低腫瘤出芽組無病生存率為98%，兩組生存率存在明顯差異，結果表明，患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平存在相關性，并且會對患者預后產生嚴重影響。近年來，在抗腫瘤治療中，免疫治療及腫瘤免疫微環境潛在作用受到越來越多關注。其中，腫瘤免疫微環境中的重要成分為間質內腫瘤浸潤淋巴細胞，為誘導腫瘤免疫應答和機體應對腫瘤細胞重要機制，TILs數量可在一定程度對機體對抗腫瘤的能力反應。相關學者表明，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽過程，會出現微環境改變，如免疫應答細胞因子產生。

綜上所述，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈負相關，乳腺癌腫瘤惡性程度與出芽水平存在相關性，與惡性程度高的臨床病理指標密切相關，可對患者預后產生影響。對腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性探討，可為患者臨床治療提供更有效理論依據和重要基礎。

[參考文獻]

[1] 曲少華，張杰，張偉，等.乳腺癌腫瘤出芽與腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的關系研究[J].中國病理生理雜志，2018，34（10）：180-184.

[2] 潘貝晶，徐程，平國強，等.PD-L1在三陰性乳腺癌中的表達及其與預后的相關性[J].中華病理學雜志，2017， 46（12）：822-826.

[3] 馬興聰，閆婉君，趙小瑤，等.Wnt/β-catenin信號活化與乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞的相關性及其臨床意義[J].西安交通大學學報（醫學版），2018，39（6）：92-96.

[4] 沈輝，盛晗，陸建菊，等.程序性死亡受體1和T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子3在乳腺癌腫瘤微環境中的表達、分布及其與臨床病理特征的關系[J].中華醫學雜志，2018，98（17）：1352-1357.

[5] Nejati R，Goldstein JB，Halperin DM，et al. Prognostic significance of tumor-infiltrating lymphocytes in patients with pancreatic ductal adenocarcinoma treated with neoadjuvant chemotherapy[J]. Pancreas，2017，46（9）：1180-1187.

[6] 陳翱翔，余岳，孟然，等.腫瘤浸潤淋巴細胞比例對乳腺癌新輔助化療療效的預測作用[J].中國腫瘤臨床，2017， 44（23）：1184-1188.

[7] 劉仙花，余英豪，齊興峰，等.雞尾酒抗體D2-40/CD34-CK對淋巴結檢出數量不足結直腸癌標本的臨床病理評價[J].臨床與實驗病理學雜志，2019，35（1）：18-22.

[8] 張玲玲，王曉琳，王小玲，等.非特殊型浸潤性與伴髓樣特征乳腺癌浸潤淋巴細胞和細胞因子表達差異對預后影響研究[J].中華腫瘤防治雜志，2018，25（9）：32-39.

[9] 王瑞剛，張月明，竇利州，等.56例早期結直腸癌內鏡非治愈切除患者預后危險因素分析[J].中華胃腸外科雜志，2017，20（8）：923-927.

[10] 楊宇石，石玉，鄭美娟，等.乳腺癌中乙酰化轉移酶P300和H3K56乙酰化蛋白表達與新輔助化療及臨床病理特征的相關性[J].臨床與實驗病理學雜志，2018，34（7）：43-47.

[11] Hida，Akira I，Sagara，et al. Prognostic and predictive impacts of tumor-infiltrating lymphocytes differ between Triple-negative and HER2-positive breast cancers treated with standard systemic therapies[J]. Breast Cancer Research & Treatment，2016，158（1）：1-9.

[12] Tanaka H，Hiramatsu S，Tamura T，et al. Abstract 4001：Infiltration of neutrophils in the tumor was associated with poor prognosis of patients with gastric cancer[J]. Cancer Research，2017，77（13）：4001.

[13] 時兆婷，樂堅，陳雅玲，等.浸潤性乳腺癌超聲征象與腋下淋巴結轉移的相關性研究[J].中華超聲影像學雜志，2017，26（5）：424-429.

[14] 魯勝男，馮彥林，李雯，等.～（18）F-FDGPET/CTSUV_（max）與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征及新輔助化療療效的相關性[J].腫瘤防治研究，2019，46（2）：46-50.

[15] 張明帥，王胄，蔣威華，等.熒光原位雜交檢測乳腺癌HER2（++）擴增狀態及其與臨床病理的相關性[J].腫瘤防治研究，2018，45（9）：42-45.

（收稿日期：2019-09-30）