多排螺旋CT灌注成像聯合sIL-2R、Cyfra21-1、ADAM-9 mRNA對肺孤立性結節的診斷價值探討

徐 濤，余曉瑋

(1.湖北醫藥學院附屬襄陽市第一人民醫院放射科，湖北 襄陽441000；2.湖北省襄陽市中醫醫院放射科，湖北 襄陽 441000)

肺癌的病死率居全球第一，若早期確定病變的發生部位有助于預后。肺孤立性肺結節(solitary pulmonary nodules，SPN)是早期周圍型肺癌或者轉移瘤的表現形式。如果可以早期并且準確地對SPN的良惡性作出正確判斷，對于選擇合理的治療方案，對疾病的預后有較大的臨床意義[1]。許多專家學者采用多層螺旋CT中的血容量(blood volume，BV)、血流量(blood flow，BF)、強化峰值(peak enhancement，PE)、表面通透性(permeability surface，PS)、平均通過時間(mean transit time，MTT)，對于正增強積分(positive enhancement integral，PEI)及達峰時間(time to peak，TTP)準確鑒別出SPN的良惡性；惡性病變患者的的參數如BV、PEI均高于良性的病變，BV、PEI與患者的血管新生因子呈正相關[2]。腫瘤標志物是腫瘤組織或細胞產生的活性物質，在腫瘤患者中表達較高。認為免疫學的表現以結節病的病變部位主要是Thl細胞的激活和增殖為主。在Thl分泌的細胞因子中，血清中可溶性的IL-2受體(soluble interleukin-2 receptor，slL-2R)發揮著重要作用[3]。Cyfra21-1作為細胞的角蛋白19(cytokeratin 19 fragment antigen，CYK-19)可溶性片段，Cyfra21-1目前主要用于檢測肺癌，尤其是非小細胞肺癌，CYK-1在正常細胞的表面會表達[4]。肺結節病患者人解整合素樣金屬蛋白酶9 mRNA(human a disintegrin and metalloprotease 9，ADAM9 mRNA)的陽性率顯著低于正常者，肺癌患者的陽性表達率顯著高于正常者[5]。本研究旨在探討多排螺旋CT灌注成像聯合sIL-2R、Cyfra21-1、ADAM-9mRNA對SPN的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年4月—2018年4月湖北醫藥學院附屬襄陽市第一人民醫院共經病理、臨床表現共證實惡性結節46例，其中腺癌29例，小細胞肺癌12例，轉移瘤4例，鱗癌1例；其中男性24例，女性22例，年齡26～79歲，平均(59.1±11.6)歲。有吸煙史32例；結節大小為1.3～4.8 cm，平均(2.8±0.4) cm；良性結節34例，肉芽腫6例，發生血腫7例，發生炎性病變15例，其他情況6例。男性17例，女性17例；年齡26～78歲，平均(59.08±11.92)歲；有吸煙史24例，結節大小為1.3～4.8 cm，平均(2.7±0.4) cm；良性的結節類型包括：選擇30例健康者，男性16例，女性14例，年齡26～78歲，平均(59.86±11.17)歲，有吸煙史17例。

本研究經過醫院倫理委員會批準，所有受試者自愿簽署了知情同意書。

1.2納入標準 ①心肺、腎功能正常，對碘造影劑無過敏；②所有受試者均經過影像學檢查、病理活檢進行確診，符合診斷標準；③耐受的屏氣在30 s及以上；④未接受過藥物治療、化療和放療。

1.3排除標準 ①具有肝腎等功能障礙患者；②意識不清，無法交流患者。③失訪并且無病理結果回報；④灌注后失敗。

1.4多排螺旋CT灌注成像

1.4.1掃描方法 采用GE64排螺旋CT掃描，管電壓為120 kV，管電流為150 mA;進行胸部平掃，明確結節的位置，然后選定灌注范圍，要求涵蓋整個結節;對比劑選擇造影劑為碘海醇(300 mg/mL)，右前臂埋入套管針，用注射器注入對比劑，用量50 mL;5 s后，患者最大屏氣末掃描，先掃描30 s，停5 s，后掃描20 s 共掃描50 s。

1.4.2圖像后處理 采用GE AW4.4工作站進行圖像處理，先設定CT值de范圍，輸入動脈以肺內的結節同層面中的大血管，肺結節最大截面上選取ROI，應避開病灶的空洞、鈣化，避開周圍的鄰近血管，計算出相應的PEI、TTP數值。

1.5血清sIL-2R 抽取空腹外周血2～3 mL，靜置15 min后，于離心機內，以2 000 r/min，離心15 min后，收集血清，于-80 ℃冰箱儲存。采用雙抗體酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測定外周血血清中的sIL-2R；清晨空腹抽取3 mL外周靜脈血于乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA)的抗凝管中，離心后分離，血清保存于-20 ℃冰箱中，檢測血清中Cyfra21-1，采用全自動電化學發光免疫分析儀(羅氏cobase 411)，根據羅氏的試劑盒說明，Cyfra21-1的臨界值為3.3 μg/L，≥臨界值判斷為陽性，<臨界值判斷為陰性。

1.6肺泡灌洗液ADAM-9 mRNA測定 分別對3組研究進行支氣管肺泡灌注，采集各研究對象支氣管肺泡灌洗液，并通過無菌紗布過濾，濾液置于50 mL試管，采用低溫離心機，低速離心10 min后，收集細胞沉淀，加入0.01 mol/L磷酸緩沖液沖洗，再次采用低溫低速離心10 min，留存細胞的沉淀物，通過Trizol的試劑盒進行處理，并于-80 ℃保存待用。采集患者清晨空腹5 mL外周血，離心時間為15 min(轉速為3 000 r/min)后，血清在-80 ℃保存待用。 通過熒光定量PCR儀檢測ADAM-9 mRNA表達水平，ADAM-9mRNA的表達水平顯著高于正常值，判定結果為陽性。

1.7統計學方法 應用SPSS 19.0軟件處理數據。計量資料多組間比較采用F檢驗和SNK-q檢驗。計數資料采用χ2檢驗。采用受試者工作特征(receiver operatingcharacteristic， ROC)曲線評價單、平行或系列聯合檢測對胃癌的診斷價值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.13組CT指標比較 惡性組患者的BV、TTP、PEI及PS均顯著高于健康組(P<0.01)，良性組患者的BV、TTP、PEI及PS均高于健康組(P<0.05)，惡性組患者的BV、PEI、PS均高于良性組(P<0.05)，而TTP與良性組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

*P值<0.05與健康組比較 #P值<0.05與良性組比較(SNK-q檢驗)

2.23組sIL-2R、Cyfra21-1、ADAM-9 mRNA水平比較 惡性組患者的sIL-2R、Cyfra21-1、ADAM-9 mRNA均高于健康組和良性組(P<0.05)，良性組患者的sIL-2R、Cyfra21-1均高于健康組(P<0.05)，ADAM-9 mRNA顯著低于健康組(P<0.01)。見表2。

2.3四種方法單獨檢測、平行聯合檢測和系列聯合檢的診斷效能 并聯檢測：四種方法種有一個結果為陽性則為陽性；串聯檢測：四種方法種均為陽性則為陽性。 ROC 曲線分析結果顯示系列聯合檢的診斷效能高于平行聯合檢測，高于單獨檢測，見表3。

組別例數sIL-2R(U/L)Cyfra21-1(μg/L)ADAM-9 mRNA健康組300.65±0.130.72±0.720.032±0.002良性組340.75±0.22*2.52±0.13*0.019±0.003*惡性組460.98±0.52*#4.92±0.32*#0.067±0.022*#F值9.8127.8107.612P值0.0090.0140.016

*P值<0.05與健康組比較 #P值<0.05與良性組比較(SNK-q檢驗)

2.4單獨檢測和聯合檢測的ROC分析 單獨檢測和聯合檢測的ROC分析見表4，與單獨檢測相比，聯合檢測ROC曲線下面積較大。

表4 單項檢測、聯合檢測的ROC分析

3 討 論

SPN胸部X線片中的檢出率為0.10%～0.20%。絕大部分SPN為良性病變，由于SPN形態學多樣，SPN的鑒別診斷是影像學診斷的難點，以往多從影像形態學上進行診斷，開胸手術或者采用肺活檢病理檢查可確診SPN，但創傷大。在SPN診斷中，CT灌注掃描技術應用豐富，原理是中心容積定律和采用核醫學的放射性示蹤劑的稀釋原理，可提高診斷SPN的準確性，目前研究多集中在BF、TTP、BV、PS、MTT等灌注參數值的意義[6-8]。

本研究采用GE64排螺旋CT進行掃描可以準確的算出灌注數據為BV、PS、PEI及TTP，是目前公認的掃描方法，結果表明，惡性組BV、TTP、PEI及PS均顯著高于健康組(P<0.01)，良性組BV、TTP、PEI及PS均高于健康組(P<0.05)，惡性組BV、PEI、PS均高于良性組(P<0.05)，而TTP與良性組比較差異無統計學意義(P>0.05)。肺CT灌注PEI定義在灌注時間計算面積，惡性程度高，腫瘤壞死較多，因此PEI的數值較高。TTP是在靶組織可以達到最大強化峰需要的時間，血管結構及血管構成影響TTP的主要原因。因良性SPN以炎癥為主，理論上其微血管的密度、血管結構及通透性不同于惡性結節，TTP應該差異，本研究惡性組和良性組TTP差異并無統計學意義，可能沒有計算患者的心輸出量[9]。

IL-2促進T細胞增殖、活化，是免疫應答中關鍵性的細胞因子。IL-2受體游離于血清中的sIL-2R。sIL-2R是由mIL-2R脫落入體液，競爭性的與mIL-2R結合IL-2，抑制T淋巴細胞增殖活化，降低免疫功能[9]。Cyfra21-1作為CYK-19可溶性片段，CYK-1在正常細胞的表面會表達。CYFRA21-1主要用于檢測肺癌，文獻報道SPN惡性患者血清Cyfra21-1的水平顯著高于良性患者[10-13]。ADAM是一種跨膜糖蛋白，可以調節細胞外的基質及細胞與細胞間的作用，并且能夠保持細胞的正常生理形態及功能，在常見的惡性腫瘤細胞中，ADAM-9的表達量呈升高趨勢，使細胞間黏附下降，發揮細胞遷移及外基質重塑調節作用有研究發現，在正常肺組織肺泡間隔及肺泡腔內ADAM-9能夠大量表達，且肺癌患者體內ADAM-9mRNA的表達量顯著高于正常人群[13-16]。

本研究表明，惡性組患者的sIL-2R、Cyfra21-1均高于健康組和良性組(P<0.05)，ADAM-9 mRNA顯著高于健康組和良性組(P<0.01)，良性組sIL-2R、Cyfra21-1均高于健康組(P<0.05)，ADAM-9 mRNA顯著低于健康組(P<0.01)。與國外文獻報道一致，肺癌患者的血清中ADAM-9蛋白表達水平，同樣顯著高于正常人群，表明ADAM-9的異常高水平表達同肺癌發生密切相關。系列聯合檢的診斷效能高于平行聯合檢測和單獨檢測(P<0.01)。與單獨檢測相比，聯合檢測ROC曲線下面積較大。聯合檢測的敏感度、特異度均較高，通過檢測多層螺旋CT灌注成像參數的變化，可以了解患者SPN血供特點。

綜上所述，多排螺旋CT灌注成像聯合sIL-2R、Cyfra21-1、ADAM-9 mRNA對SPN的診斷具有重要的臨床價值，可顯著提高診斷的敏感度及特異度，可以應用于臨床。