天水大櫻桃葉總黃酮體外抗氧化性能研究

廖天江

【摘要】通過(guò)超聲輔助方法提取櫻桃葉總黃酮并進(jìn)行純化，考察了大櫻桃葉總黃酮的總抗氧化能力、清除超氧陰離子自由基能力、清除羥自由基能力，與抗氧化劑維生素C比較得出，大櫻桃葉黃酮具有良好的抗氧化效果，清除羥自由基的能力優(yōu)于維生素C，但清除超氧陰離子自由基和總體抗氧化能力低于維生素C。

【關(guān)鍵詞】大櫻桃葉? 黃酮? 抗氧化

本文探討了超聲輔助方法提取天水地區(qū)種植的大櫻桃葉中黃酮類(lèi)化合物的條件，并對(duì)大櫻桃葉黃酮與常見(jiàn)的抗氧化劑維生素C的抗氧化性能做比較，為大櫻桃葉黃酮在食品、保健品等領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。

一、材料與方法

（一）儀器

紫外分光光度計(jì);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器;恒溫水浴鍋;數(shù)控超聲波清洗器;酒精計(jì);電子天平;高速臺(tái)式離心機(jī);數(shù)顯恒溫水浴鍋;電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。

（二）材料與試劑

大櫻桃葉黃酮粗提物，由本研究的前期實(shí)驗(yàn)提供。蘆丁對(duì)照品、乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、雙氧水、鄰苯三酚、VC等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

（三）方法

（1）大櫻桃葉總黃酮的提取及純化。稱(chēng)取粉碎后大櫻桃葉粉末50g 于三角瓶中，加入1L70%乙醇于70 ℃下進(jìn)行提取，提取過(guò)程中進(jìn)行超聲提取，超聲功率250W，超聲時(shí)間60min，不斷震搖。提取后真空抽濾，真空凍干得到粗提物粉末。經(jīng)粗提后的大櫻桃葉黃酮用65%的乙醇溶解后，經(jīng)DM-101大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行純化，收集純化液，真空旋蒸得到大櫻桃葉總黃酮純化物。加蒸餾水稀釋至濃度為1.0mg/m L櫻桃葉黃酮溶液的樣品儲(chǔ)備液。再配制1.0mg/m L的維生素C溶液的樣品儲(chǔ)備液。

（2）總抗氧化活性的測(cè)定一磷鉬絡(luò)合物法。將樣品儲(chǔ)備液用蒸餾水稀釋得到濃度分另4為0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.25mg/mL、和0.3mg/mL的大櫻桃葉黃酮溶液、Vc溶液，作為樣品液。磷鉬試劑的終濃度為0.6mol/L濃硫酸，28 mmol/L磷酸鈉和4mmol/L鉬酸銨的溶液。在一系列10mL的比色管中加入0.4mL上述樣品液和4.0mL磷鉬試劑，迅速搖勻后置于95℃水浴中，恒溫90 min。在695nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度A。平行測(cè)定3次，取其平均值。

（3）大櫻桃葉黃酮純化物對(duì)羥自由基清除率的測(cè)定。將大櫻桃葉黃酮純化物依次按1∶5、1∶10、1∶15、1∶20 和1∶25 稀釋?zhuān)玫讲煌|(zhì)量濃度的樣品醇溶物。精確吸取3mL不同質(zhì)量濃度（0.509、0.768、0.914、1.691、3.318 mg·L-1）樣品醇溶物于試管中，依次向試管中加入2mL0.1mol·L-1FeSO4、2mL0.1mol·L-1水楊酸、2mL0.1mol·L-1H2O2，用蒸餾水定容至10mL并搖勻，在37 ℃條件下恒溫加熱30min后在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度Aa;將體系中樣品用3mL無(wú)水乙醇代替，在相同條件下測(cè)定其吸光度A0;將體系中H2O2用蒸餾水代替在相同條件下測(cè)定其吸光度Ab。

（4）大櫻桃葉黃酮純化物對(duì)超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定。取5支10mL離心管各加入pH8.2的50mmol/LTris-HC1緩沖液4.5mL，再分別加入大櫻桃葉黃酮純化物的樣品醇溶物0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，然后依次加蒸餾水0.8、0.6、0.4、0.2、0.0mL，混勻后在25℃恒溫水浴中保溫20min，取出后立即加入在25 ℃預(yù)熱過(guò)的3mmol/L鄰苯三酚溶液0.3mL啟動(dòng)反應(yīng)。5min后加10mol/L鹽酸溶液0.2mL終止反應(yīng)。同時(shí)另取5支離心管，按上述步驟依次加入Tris-HCl緩沖液、黃酮提取液和蒸餾水，然后分別加10 m mol/L鹽酸溶液0.3 m L，5 min后加10 mol/L鹽酸溶液0.2 m L終止反應(yīng)，搖勻。在325 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度。

二、結(jié)果與分析

（1）大櫻桃葉黃酮純化物總抗氧化活性分析。磷鉬絡(luò)合物法的測(cè)定原理是Mo（VI）被抗氧化物質(zhì)還原生成綠色的Mo（V）絡(luò)合物，其最大吸收波長(zhǎng)為695nm。抗氧化物質(zhì)活性越強(qiáng)，測(cè)定的吸光度值越大。通過(guò)與抗氧化劑維生素C相比，大櫻桃葉黃酮的抗氧化性總體比維生素C弱。

（2）大櫻桃葉黃酮純化物清除羥自由基能力分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大櫻桃葉黃酮純化物和VC清除羥自由基的能力與質(zhì)量濃度呈上升趨勢(shì)。在相同濃度下，大櫻桃葉黃酮純化物對(duì)羥自由基的清除效果優(yōu)于 Vc，當(dāng)大櫻桃葉黃酮純化物的濃度為35μg/mL 時(shí)，大櫻桃葉黃酮純化物對(duì)羥自由基的清除率達(dá)到87.5%。

（3）大櫻桃葉黃酮純化物清除超氧陰離子自由基能力分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大櫻桃葉黃酮純化物和VC清除羥自由基的能力與質(zhì)量濃度呈上升趨勢(shì)。如圖 1所示，在相同濃度下，大櫻桃葉黃酮純化物清除超氧陰離子自由基能力低于維生素C當(dāng)大櫻桃葉黃酮純化物的濃度為35 μg/mL 時(shí)，大櫻桃葉黃酮純化物對(duì)羥自由基的清除率達(dá)到71.2%。

三、結(jié)論

本文通過(guò)對(duì)大櫻桃葉總黃酮的總抗氧化能力、清除超氧陰離子自由基能力、清除羥自由基（·OH）能力等方面的考察表明，大櫻桃葉黃酮具有良好的抗氧化效果，清除·OH的能力優(yōu)于維生素C，但清除超氧陰離子自由基和總體抗氧化能力略低于維生素C。因此，大櫻桃葉黃酮類(lèi)化合物是一種很好的抗氧化劑，可作為天然的抗衰老保健品、食品抗氧化劑和具有輔助療效的藥物添加劑使用，在天然抗氧化劑和醫(yī)藥保健相關(guān)領(lǐng)域具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。

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