托伐普坦片的制備及體外溶出評價*

黃 耀，余 瑜，張 濤，楊 杰

（1. 重慶醫科大學藥學院，重慶 400016； 2. 福安藥業集團重慶禮邦藥物開發有限公司，重慶 401121）

托伐普坦（TVPT）是一種口服精氨酸加壓素V2受體拮抗劑，通過阻滯血管加壓素和集合管V2受體結合，使水通道蛋白－2 不能移動到細胞膜表面，抑制尿液濃縮，不排鈉而增加自由水的排出，達到利尿效果[1]，適用于臨床明顯的高容量性和正常容量性低鈉血癥，包括伴心力衰竭、肝硬化及抗利尿激素分泌異常綜合征（SIADH）[2]。2011年，原研公司獲原國家食品藥品監督管理總局正式批準在中國生產和銷售托伐普坦，國內尚無其他公司仿制成功并上市銷售。

托伐普坦的溶解性較差，影響制劑中藥物的溶出釋放，進一步影響體內的生物利用度，故提高其體外溶出速率至關重要。固體分散技術是提高難溶性藥物溶出度的常用方法。藥物在固體分散體（SD）中可形成固體溶液、微晶或無定型分散狀態，具有很高的分散程度，可顯著提高溶解度和溶出速率[3－5]。原研專利[6－7]是將藥物和羥丙纖維素（HPC）溶解在乙醇和二氯甲烷的混合有機溶劑中，經噴霧干燥而得無定型的托伐普坦和羥丙纖維素的非晶型組合物。

SD 的制備方法有熔融法、溶劑蒸發法、溶劑－熔融法和研磨法等。本研究中將托伐普坦原料藥和HPC 溶于95%乙醇形成載藥溶液，以乳糖作為底物，采用流化床底噴工藝制備成SD[8]，最后將其與輔料經干法制粒、壓片后制備成片劑[9]，避開使用較大毒性有機溶劑二氯甲烷，并降低了工藝成本。通過粉末X 射線衍射法進行物相鑒別，測定SD 的飽和溶解度，并測定片劑的體外溶出曲線，為下一步托伐普坦口服制劑的開發奠定基礎。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

WBF－2G 型流化床實驗機（重慶英格造粒包衣技術有限公司）；XD－6 型多晶X 粉末衍射儀（北京普析通用儀器有限責任公司）；BM－59XCD 型偏光顯微鏡（上海彼愛母光學儀器制造有限公司）；708 ＋850DS 型自動溶出儀（安捷倫科技有限公司）；UV－2600 型紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

1.2 試藥

托伐普坦原料藥（福安藥業集團重慶博圣制藥有限公司，批號為L－170401V）；HPC（日本曹達株式會社，批號為NFI－2531，型號為SL）；微晶纖維素（美國DuPont 公司，批號為P117831197，型號為PH101）；微晶纖維素（美國DuPont 公司，批號為P215829048，型號為PH102）；玉米淀粉（安徽山河藥用輔料有限公司，批號為161006，型號為SH－L）；低取代羥丙纖維素（日本信越化學工業株式會社，批號為5093238，型號為LH－11）；一水乳糖（美劑樂沃斯堡牛奶房兩合公司，批號為L101513216A535，型號為100 目）；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料有限公司，批號為170301，型號為SH－YM－M）；乙醇（四川金山制藥有限公司，批號為170801，藥用級）。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

固體分散體制備：95%乙醇作為載藥溶劑，稱取適量托伐普坦原料藥（150 g）與HPC（75 g），加入載藥溶劑（3 600 g）中，于60 ～80 ℃水浴下攪拌至澄清。以乳糖為底物，采用流化床底噴工藝制備SD，進風溫度為90 ℃，噴霧壓力為0.22 MPa，送液速度為20 ～50 mL／min，風機頻率為15 ～18 Hz，物料溫度為55 ℃，噴液結束后干燥30 min。

物理混合物制備：將托伐普坦原料藥與HPC 及乳糖過60 目篩，混合均勻，得物理混合物（PM）。

托伐普坦片制備：稱取SD 或PM、微晶纖維素101、玉米淀粉、低取代羥丙纖維素、硬脂酸鎂，過60 目篩1遍；再將物料倒入料斗混合機中，轉速為12 r／min，混合5 min；采用干法制粒機將混合后物料進行干法制粒，進料頻率為8 Hz，壓片頻率為6 Hz，制粒頻率為8 Hz；將干法制粒后顆粒與微晶纖維素102、硬脂酸鎂置料斗混合機中混合3 min；采用旋轉壓片機進行壓片，每片重120 mg，硬度4 ～6 kg。

2.2 固體分散體表征

使用XD－6 型多晶X 射線粉末衍射儀記錄樣品的粉末衍射圖，設置工作參數（Cu 靶，起始角為4°，終止角為55°，步寬為0.02，波長為1.54 nm，管電壓為36 kV，管電流為20 mA），以2°／min 的掃描速率分析樣品。托伐普坦原料藥、乳糖和TVPT－SD 粉末X 射線衍射圖見圖1。可見，原料藥在2 θ 值為12°～17°處具有衍射特征峰，表明托伐普坦作為具有主要特征衍射峰的結晶材料存在于自然界中。而TVPT－SD 的衍射圖與乳糖的衍射圖基本一致，且12°～17°處的衍射特征峰消失，表明TVPT－SD 中的托伐普坦主要表現為無定形。

圖1 托伐普坦固體分散體、托伐普坦原料藥和乳糖的粉末X射線衍射圖

2.3 體外溶出試驗

波長選擇：參考原研專利中溶出度測定方法[6－7]，確定本品溶出度檢測方法為紫外－可見分光光度法，檢測波長為268 nm 和350 nm 處的差值。

標準曲線制備：取托伐普坦對照品32 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液，分別用0.05%十二烷基硫酸鈉（SDS）的0.1 mol／L 鹽酸溶液將貯備液稀釋成質量濃度為1.6，3.2，6.4，12.8，16，19.2 μg／mL 的溶液，測定各溶液的吸光度，以吸光度（A）對質量濃度（C）作標準曲線，得標準曲線回歸方程A ＝0.039 1 C－0.003 4，r ＝0.996 5（n ＝6）。結果表明，托伐普坦質量濃度在1.6 ～19.2 μg／mL 范圍內與吸光度線性關系良好。

樣品回收試驗：分別取托伐普坦對照品約8，13，16 mg，各3 份，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇50 mL 超聲使溶解；另取處方比例的空白輔料，同置上述容量瓶中，加入含0.05%SDS 的0.1 mol／L 鹽酸溶液40 mL，超聲處理20 min，稀釋定容至刻度，搖勻，用0.45 μm 濾膜濾過；取續濾液5 mL，置50 mL 容量瓶中，稀釋定容至刻度，搖勻，作為50%，80%，100%回收率供試品溶液，測定各供試品溶液的吸光度，計算回收率。結果表明，其平均回收率為99.03% ，RSD 為2.17%（n ＝9），表明方法回收率良好，不受輔料干擾。

溶 出 曲 線 測定：參 考 原 研 專 利[6－7]，采 用708 ＋850DS 型自動溶出儀，照2015年版《中國藥典（四部）》通則0931 第二法（槳法），以0.1 mol／L 鹽酸溶液（含0.05%DS）900 mL 為溶出介質，置各溶出杯內，加溫，待溶出介質溫度恒定在（37±0.5）℃時進行試驗。分別于5，10，15，20，30，45，60 min 時[10]取樣5 mL，經水系濾頭（規格為33 mm×0.45 μm）過濾后，取續濾液置UV－2600 型紫外可見分光光度計，采用雙波長測定法（于268 nm 和350 nm 波長處）測定吸光度。按外標法計算累積溶出度，并作出溶出曲線。

體外溶出測定結果：結果見圖2。可見，PM 制備的樣品60 min 累積溶出量僅為17.99%，而SD 制備的樣品60 min 累積溶出量為94.12%，溶出速率明顯提高，更接近參比制劑。進一步驗證了托伐普坦原料藥在SD 中轉化為無定形，且經過干法制粒及壓片后仍未發生晶型轉變。

2.4 飽和溶解度測定

稱取約含50 mg 托伐普坦原料藥和SD 置100 mL容量瓶中，分別加入60 mL pH 1.0 鹽酸溶液、pH 3.0 枸櫞酸緩沖溶液、pH 4.5 醋酸緩沖溶液和pH 6.8 磷酸緩沖溶液，在（37±0.5）℃水浴振蕩器中振搖24 h，用0.45 μm 水系微孔濾膜過濾，棄去初濾液2 mL，精密量取2 mL 續濾液，置5 mL 容量瓶中，加相應溶液稀釋定容至刻度；在紫外可見分光光度計上采用雙波長測定法（于268 nm 和350 nm 波長處）測定吸光度，并計算其在不同介質中的飽和溶解度。

圖2 參比制劑、固體分散體制備片和物理混合物制備片的溶出曲線

飽和溶解度：托伐普坦原料藥及TVPT－SD 在不同介質中的溶解度見圖3。可見，相對于原料藥的飽和溶解度，SD 在各個不同pH 條件下的溶解性能均得到極大提升，且增溶后的溶解度與pH 不呈依賴性，表明托伐普坦原料藥通過流化床工藝轉化為無定形后存在于SD 中。

圖3 托伐普坦原料藥和固體分散體在不同介質中的飽和溶解度

3 討論

根據表征結果，托伐普坦溶解度及溶出速率的提高可歸因為SD 技術，其使藥物晶體轉化為無定形形式后，具有較高的吉布斯能，故溶解時所需能量較少[11－12]。另外，潤濕性、多孔性及表面積的小粒徑結構均是提高藥物溶出度的重要原因[13]。

本研究中采用了溶劑蒸發法中的流化床底噴法成功制備了TVPT－SD。該方法避免了高熱過程，較適宜對熱不穩定且易揮發的藥物，但由于使用有機溶劑，增加了成本，有機溶劑也難以除盡，易引起藥物的重結晶而影響藥物的分散度[8]。

藥物晶型易受到溫度、壓力、相對濕度的影響而發生轉變，故在制劑工藝的粉碎、制粒、干燥、壓片、包衣等操作過程及貯存過程中易發生轉變，從而影響藥品溶出度及生物利用度[14]。干法制粒及壓片過程中，物料經過反向旋轉滾軸的高擠壓過程，可能會影響藥物的晶型。BOZIC 等[15]研究發現，大環內酯類抗生素在干法制粒過程中局部無定形化，且壓片過程中無定形化更嚴重。故本研究中不僅對TVPT －SD 進行溶解度測定，更在其經過干法制粒及壓片后，與參比制劑進行溶出曲線對比。

采用流化床底噴法成功制備了TVPT－SD，與原研專利比較，避免了使用較大毒性的有機溶劑二氯甲烷，降低了工藝成本。體外溶出試驗結果表明，與普通藥物相比，SD 制備的片劑可顯著提高其體外溶出度，與參比制劑接近，為下一步托伐普坦片仿制藥的開發奠定了基礎。