三種封片膠封片的效果比較

代 鵬，肖 磊，周 晟

在病理醫(yī)師閱片過程中，經(jīng)常會聞到濃重刺鼻的二甲苯氣味，這些刺鼻的氣味不僅影響病理醫(yī)師的日常閱片，也給制片的技術(shù)人員身體帶來不同程度的傷害，因此，在常規(guī)病理切片制作中，如何在保證切片質(zhì)量的前提下盡可能的減少接觸二甲苯成了病理科工作人員共同關(guān)注的問題。近期華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院病理科在封片膠的選用方面進行了甄別，取得良好的效果，在保證不影響顯微鏡閱片質(zhì)量的基礎(chǔ)上，通過干燥封片，最大程度的減少接觸二甲苯，采用新型環(huán)保封片膠封片效果最好。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機選擇2018年5～6月華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院病理科存檔的不同部位不同性質(zhì)的組織標本蠟塊200例；傳統(tǒng)中性樹膠(60%二甲苯溶液)；新型環(huán)保封片膠；環(huán)保快干膠。

1.2 方法 將隨機選擇的標本蠟塊連續(xù)切片3張，制作石蠟切片，將其分為A、B、C組，再放入72 ℃烤箱內(nèi)烤30 min，然后放入全自動染色機中行常規(guī)HE染色，染色結(jié)束后置于通風(fēng)處至切片表面乙醇完全揮發(fā)，最后由同一名技術(shù)員手工封片，其中A組切片采用傳統(tǒng)中性樹膠(以二甲苯作為溶劑，折光率為1.43)封固，B組切片采用新型環(huán)保封片膠封固(以烷烴類化合物作為溶劑，折光率為1.52)，C組切片采用中性快干膠(以硬脂酸和汽油作為溶劑，折光率為1.49)封固。封片時滴加少許封片膠在組織上方，將玻片稍傾斜，用手將蓋玻片順著載玻片斜面輕輕放。由兩位技術(shù)人員和兩位病理醫(yī)師從肉眼及顯微鏡下對3組切片進行盲觀察，即不告知觀察者3組切片封片膠的區(qū)別，由觀察者評價3組切片的優(yōu)劣，并做好記錄。

1.3 切片評價標準 (1)肉眼觀察切片封片膠均勻、無明顯氣泡；(2)保持組織染色后原有的透明狀態(tài)，有利于鏡下觀察；(3)鏡下觀察有保存組織細胞核及胞質(zhì)的染色形態(tài)；(4)封片膠完全滲入到染色的組織，隔絕其與外界空氣的接觸。

表1 3組封片膠的成片比較[n(%)]

2 結(jié)果

通過3組之間平行對比觀察和盲觀察發(fā)現(xiàn)，A、B兩組切片差異無顯著性，樹膠分布均勻，透明度好，鏡下觀察細胞均可呈現(xiàn)清晰的結(jié)構(gòu)，紅、藍分明，對比清晰(圖1，2)，C組切片透明度良好，但樹膠過于濃稠，不易散開，不能充分滲入到細胞核，導(dǎo)致鏡下見細胞核呈黑色，影響診斷(圖3)。同時在A組、C組切片中均能聞到刺鼻的二甲苯氣味，B組切片無刺鼻氣味，僅聞及輕微的檸檬香味，3組切片均有不同程度的溢膠和氣泡問題(表1)。

①②③圖1 A組HE染色切片:中性樹膠封固,細胞結(jié)構(gòu)清晰,染色分明,但樹膠分布不均勻,可出現(xiàn)巨大氣泡,透明度不佳圖2 B組HE染色切片:新型環(huán)保封片膠封固,細胞結(jié)構(gòu)清晰,染色紅、藍分明,封片膠分布均勻,無氣泡,透明度好圖3 C組HE染色切片:中性快干膠封固,細胞結(jié)構(gòu)清晰,透明度尚可,但易出現(xiàn)大量小氣泡

3 討論

目前市場上出售的各種中性樹脂膠均含有二甲苯，為有害物質(zhì)，對環(huán)境有污染，對人的呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及生殖系統(tǒng)均有很強的毒性作用，是一種致癌物質(zhì)[1]，長期接觸不僅對接觸者的記憶能力、反應(yīng)速度均有不同程度的影響，同時也會引起頭痛、脫發(fā)、失眠等癥狀，甚至造成機體免疫力下降。已有研究[2]發(fā)現(xiàn)將中性樹膠與二甲苯比例控制在5 ∶1時可在最低限度使用二甲苯達到最佳封片濃度，然而在對市面上的三種類型的封片膠進行對比試驗時發(fā)現(xiàn)以二甲苯和汽油作為溶劑的封片膠在使用過程中，二甲苯和汽油均會有一定的揮發(fā)，其濃度難以保持在最佳狀態(tài)，導(dǎo)致封片膠濃稠，不易散開，分布不均勻，樹膠難以滲入到細胞核，致使細胞核呈黑色，再者也易產(chǎn)生大量的空泡腔隙，難以驅(qū)除，造成類似色素樣顆粒的細小黑點，影響鏡下觀察，用力擠壓則會產(chǎn)生膠外溢現(xiàn)象。同時，國家規(guī)定醫(yī)院病理科的切片需要長期保存達15年，有的還需要反復(fù)觀察甚至?xí)\，故要求所用封片膠是近于中性、無色或微有顏色的，其折光率與所用載玻片、蓋玻片、透明劑等的折光率幾乎相等。由于折光率與透明度呈正比，與未著色的組織識別力呈反比，若封片膠的折光率高于組織，則透明度較佳，但識別力較差；反之，若折光率低于組織，則透明不良，但未染色部位的識別較為清楚，那么染色的切片則需以折光率在1.51～1.54之間的封片膠封固，透明度最佳，否則鏡下圖像會失真。

當然，隨著病理技術(shù)的發(fā)展，人們對于環(huán)保、健康的意識也逐漸提高，目前出現(xiàn)了“全自動染色膠片封片機”的新型技術(shù)，它將染色與封片一體化，節(jié)省了人工，減輕了工作強度，且封片快，制作的切片整潔美觀，更重要的是它在封閉環(huán)境下進行，大大減弱了對病理技術(shù)人員健康的損害[3]，但其成本高，消耗快，基層醫(yī)院難以推廣。因此采用不含二甲苯物質(zhì)，對封片診斷無影響，對病理技術(shù)人員及病理醫(yī)師的健康無傷害，且折光率為1.52的新型環(huán)保封片膠，無疑是目前最好的選擇。同時，我們也期待未來會有更好的健康封片膠以及封片技術(shù)應(yīng)用到病理科日常工作中。