超聲造影評(píng)估裸鼠胰腺癌微血管分布的實(shí)驗(yàn)研究

范 義

胰腺癌在消化道腫瘤中惡性程度最高，是全球第六大癌癥相關(guān)死亡原因，當(dāng)前對(duì)于進(jìn)展期胰腺癌仍缺乏有效的治療措施［1-3］。作為血供較為豐富的腫瘤，胰腺癌組織中的血管分布密度與其惡性生物學(xué)行為關(guān)系密切［4-5］。通過(guò)計(jì)數(shù)腫瘤組織中CD34/CD31染色陽(yáng)性細(xì)胞是目前臨床評(píng)價(jià)腫瘤微血管密度最常用的方法，該方法從微觀的角度來(lái)定量分析腫瘤組織內(nèi)微血管密度，其檢測(cè)在術(shù)后進(jìn)行，對(duì)于其在鏡下視野的選擇上具有一定的主觀性，可能會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生一定的誤差，故需要一種更加準(zhǔn)確而敏感的影像學(xué)方法來(lái)評(píng)估腫瘤血管分布和血流灌注［6-7］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立裸鼠胰腺癌原位移植瘤模型，應(yīng)用超聲造影檢測(cè)腫瘤模型胰腺癌組織的血流灌注參數(shù)，并分析其與胰腺癌血管密度的相關(guān)性，旨在探討超聲造影在無(wú)創(chuàng)性評(píng)估胰腺癌微血管血流中的應(yīng)用價(jià)值及可行性。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)材料和試劑

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：BALB/c裸鼠50只，均為雌性，3～7周齡，來(lái)源于中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)中心。

2.細(xì)胞和主要試劑：人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1［美國(guó)模式培養(yǎng)物保存中心（ATCC）］；重組人血管內(nèi)皮抑素（山東先聲麥得津生物制藥有限公司）；DMEM高葡萄糖培養(yǎng)基、胎牛血清（杭州四季青有限公司）；超聲造影劑SonoVue（意大利Bracco公司）；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和CD34抗體（美國(guó)Epitomics公司）；ABC免疫組化檢測(cè)試劑盒（北京中山生物工程有限公司）。

二、建立動(dòng)物模型

參照文獻(xiàn)［2］報(bào)道方法，將裸鼠放置在層流凈化屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)。在DMEM高葡萄糖培養(yǎng)基中重懸人胰腺癌PANC-1細(xì)胞，并將細(xì)胞懸液的密度調(diào)節(jié)至3×105/ml。……