不同加工方法對骨碎補質量影響研究

楊 潤，王 亮，謝 宇，羅 君，薛鑫宇，張麗艷*

(1.貴州中醫藥大學，貴州 貴陽 550025；2.貴州廣濟堂藥業有限公司，貴州 貴陽 550014；3.貴州中醫藥大學第一附屬醫院，貴州 貴陽 550001)

骨碎補為水龍骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根莖，味苦性溫，歸肝、腎經，具有內服療傷止痛、補腎強骨，外用消風祛斑的功效[1]，化學成分為黃酮類、苯丙素類、木脂素、三萜類等，其主要活性成分為黃酮類中柚皮苷[2-4]。由于骨碎補生品藥材表面密被鱗片和絨毛，這不利于煎煮或粉碎以及有效成分溶出，目前臨床上常采用砂燙法炮制骨碎補后入藥。對于骨碎補砂燙炮制后的含量有無影響，近年來，大量研究學者對骨碎補藥材炮制前后進行了有效成分溶出以及含量對比研究，證實了骨碎補炮制后可提高其總黃酮中柚皮苷的含量[5-9]。由于骨碎補在存放過程中會產生一定的雜質，這可能會影響其有效成分的溶出和含量的變化。為進一步探究骨碎補生品與炮制品中雜質對有效成分溶出和含量的影響，本研究通過測量不同產地骨碎補未去毛生品、去毛生品、未去毛炮制品、去毛炮制品的水分、總灰分、醇溶性浸出物、柚皮苷的含量，并對其進行對比分析研究，從而保證骨碎補質量的提升，為臨床選擇性用藥提供參考依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

蒸發皿、具塞錐形瓶、坩堝、干燥器、SX-4-10型箱式電阻爐控制箱(天津市泰斯特儀器有限公司)；ABZ04-S型電子天平(上海梅特勒有限公司)；DK-98-I型數顯恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；電熱恒溫鼓風干燥箱(上海賀德實驗設備有限公司)；粉碎機(武義海納電器有限公司)；電熱爐(方科儀器有限公司)等。

1.2 試藥

柚皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，含量：93.4%，批號：110722-200309)；骨碎補藥材自采于貴州省惠水縣、長順縣、平壩縣、納雍縣、三都縣、荔波縣、獨山縣、凱里市、望謨縣、冊亨縣，經貴州中醫藥大學魏升華教授鑒定，骨碎補為水龍骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根莖。

2 方法與結果

2.1 水分及總灰分測定

取各產地骨碎補生品及炮制品，對其進行去除磷毛、絨毛處理，并將其分為去毛、未去毛生品和去毛、未去毛炮制品各四組，各組取粉末2.0 g(過二號篩)，精密稱定，按2015版《中國藥典》四部通則0832水分測定法項下烘干法和通則2302進行測定。每個產地平行測定2份，結果見表1、表2、表3、表4。對比分析結果見圖1、圖2。

表1 不同產地未去毛生品水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 (n=2，%)

表2 不同產地去毛生品水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 (n=2，%)

表3 不同產地未去毛炮制品水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 (n=2，%)

表4 不同產地去毛炮制品水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 (n=2，%)

圖1 各組水分測量結果對比分析

圖2 各組總灰分測量結果對比分析

2.2 浸出物測定

按照“2.1”項下進行處理分組，各組取骨碎補粉末2.0 g(過二號篩)，精密稱定，按2015版《中國藥典》四部通則2201醇溶性浸出物測定法中熱浸法(稀乙醇作為溶劑)進行測定。每組平行測定2份，結果見表1、表2、表3、表4。對比分析見圖3。

圖3 各組醇溶性浸出物測量結果對比分析

2.3 柚皮苷含量測定

按照“2.1”項下進行分組處理骨碎補，參照2015年版《中國藥典》一部項下“骨碎補”中柚皮苷的含量測定方法，采用高效液相色譜法測定藥材中柚皮苷含量。

2.3.1 色譜條件和系統適應性條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-醋酸-水(35∶4 ∶65)為流動相，檢測波長為283 nm，進樣量為10 μL，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL·min-1。理論板數按柚皮苷峰計算應不低于3 000。空白溶劑、對照品和供試品溶液的HPLC色譜見圖4(選取貴州貴陽產地)，測量結果見表5，對比分析見圖5。

圖4 空白溶劑(A)、對照品溶液(B)及未去毛生品供試品溶液(C)、去毛生品供試品溶液(D)、未去毛炮制品供試品溶液(E)、去毛炮制品供試品溶液(F)HPLC(1為柚皮苷)

2.3.2 對照品溶液制備 取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷60 μg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 每組精密稱取各產地藥材粉末0.25 g，置于錐形瓶中，加甲醇30 mL，加熱回流3 h，放冷，濾過，濾液置50 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

表5 各組橙皮苷測量結果 (%)

圖5 各組柚皮苷含量測量結果對比分析

3 討論

不同加工方法處理后，骨碎補的水分、總灰分、醇溶性浸出物、柚皮苷的測定結果均符合藥典標準規定[1]。

由于骨碎補生品上密被的鱗片和附著的絨毛吸水性較強，未去毛生品水分均高于去毛生品；與此同時骨碎補砂燙撞去毛后，飲片處于膨脹狀態，外層無保護作用，比較容易吸潮，這才使得未去毛炮制品的水分均低于去毛炮制品。此外，未去毛樣品的總灰分含量均高于去毛樣品，這可能是由于骨碎補表面密被的鱗片和絨毛易吸附沙粒、泥土等雜質所導致的。

在醇溶性浸出物測量時，對乙醇的濃度進行了考察。考察了95%、80%、70%和60%乙醇作為提取溶劑來測浸出物的含量，結果以70%乙醇作為提取溶劑時，醇溶性浸出物的含量最高，因此選70%乙醇作為提取溶劑。此外四組藥材醇溶性浸出物測量結果顯示，各組去毛藥材均高于未去毛藥材。

在供試品溶液制備中考察了甲醇的濃度，考察了70%、60%甲醇和稀甲醇進行回流提取，以出峰量為指標，結果以70%甲醇提取時，出峰量最多，故選70%甲醇為提取溶劑。同時四組藥材的柚皮苷含量測定結果表明，各組未去毛藥材均低于去毛藥材。

綜上所述，可確定骨碎補表面密被的鱗片和絨毛易吸附雜質。在臨床用藥時，應選擇砂燙撞去毛的骨碎補入藥。