過硫酸氫鉀復(fù)合物粉在雞舍的臨床應(yīng)用研究

李朋朋 張曉東 周德剛

摘要 為了評(píng)價(jià)過硫酸氫鉀復(fù)合物粉在雞舍內(nèi)的應(yīng)用效果，開展了過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍自然菌的消毒效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)、對(duì)雞舍飲水管線的清洗試驗(yàn)及空氣消毒試驗(yàn)。結(jié)果表明，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶400倍稀釋時(shí)，可以有效殺滅雞舍自然菌;過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶200倍稀釋時(shí)，對(duì)飲水管線具有較好的清洗作用。當(dāng)過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶100倍稀釋、消毒作用1 h，對(duì)雞舍空氣中自然菌的殺菌率達(dá)100%。

關(guān)鍵詞 過硫酸氫鉀復(fù)合物粉;細(xì)菌定量試驗(yàn);空氣消毒;飲水管線清洗

中圖分類號(hào) S821.4+6 ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2020）10-0084-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.10.023

Abstract In order to evaluate the application effect of potassium persulfate composite powder in chicken house，the disinfection effect evaluation test of potassium persulfate composite powder on natural bacteria in the chicken house，the cleaning test of water pipeline in the chicken house and the air disinfection test were carried out.The results showed that when the potassium persulfate complex powder was diluted by 1∶400 times，it could effectively kill the natural bacteria in the chicken house.When the potassium persulfate complex powder was diluted by 1∶200 times，it had a better cleaning effect on the drinking water pipeline.When the potassium persulfate complex powder was diluted by 1∶100 times and disinfected for 1 hour，the sterilization rate of natural bacteria in the air of chicken house reached 100%.

Key words Potassium persulfate complex powder;Bacterial quantitative test;Air disinfection;Water pipeline cleaning

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近年來不斷發(fā)生的動(dòng)物重大傳染性疾病使我國(guó)畜牧業(yè)遭受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境的污染會(huì)導(dǎo)致疫病在動(dòng)物間迅速傳播，甚至直接威脅人類健康[1-3]，因此人們逐漸意識(shí)到生物安全防控的意義，在此形勢(shì)下各養(yǎng)殖戶對(duì)消毒劑的使用也越來越重視。目前市面上消毒劑種類繁多，而過硫酸氫鉀復(fù)合物粉作為一種高效、安全的消毒劑，能夠有效殺滅各類病毒、細(xì)菌、芽孢、支原體、真菌、霉菌等病原微生物，在世界范圍內(nèi)被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖消毒、畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)消毒，美國(guó)農(nóng)業(yè)部（USDA）已將其作為機(jī)場(chǎng)出入境消毒的常用消毒劑之一，來控制外來病原的入侵[4]。過硫酸氫鉀復(fù)合物粉在水中經(jīng)過鏈?zhǔn)椒磻?yīng)連續(xù)產(chǎn)生次氯酸、新生態(tài)氧，氧化和氯化病原體，干擾病原體的DNA和RNA合成，使病原體的蛋白質(zhì)凝固變性，進(jìn)而干擾病原體酶系統(tǒng)的活性，影響其代謝，增加細(xì)胞膜的通透性，造成酶和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流失、病原體溶解破裂，進(jìn)而殺滅病原體[5]。但目前大多數(shù)養(yǎng)殖場(chǎng)的消毒工作做得不夠規(guī)范，盡管選用了較好的消毒劑，卻未能使消毒劑發(fā)揮應(yīng)有的作用。筆者評(píng)價(jià)了過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)臨床菌株的殺菌效果，并在雞舍進(jìn)行了過硫酸氫鉀復(fù)合物粉的現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)，以期為過硫酸氫鉀復(fù)合物粉的臨床使用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試劑。

營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（NB）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA），均購(gòu)自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司;Na2S2O3·5H2O，分析純，購(gòu)自成都市科龍化工試劑廠;無(wú)水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，均為分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.1.2 試驗(yàn)藥物。

過硫酸氫鉀復(fù)合物粉，批號(hào)為20190817，有效氯（即活性氧）不低于10%，由普萊柯生物工程股份有限公司提供。

1.1.3 主要儀器與設(shè)備。

ABS-265雙量程電子天平，METTLER TOLEDO;NU-425-400S生物安全柜，為美國(guó)Nuaire公司產(chǎn)品;電熱恒溫培養(yǎng)箱，為上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司產(chǎn)品;全自動(dòng)立式電熱壓力蒸汽滅菌器，為上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠產(chǎn)品;核酸蛋白測(cè)定儀，為德國(guó)Eppendorf公司產(chǎn)品;微量移液器，購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司;渦旋混合器，為德國(guó)IKA公司產(chǎn)品;SevenEasy pH計(jì)，為梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司產(chǎn)品;噴霧消毒機(jī)為養(yǎng)殖場(chǎng)自有設(shè)備。

1.1.4 試驗(yàn)場(chǎng)地。

過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍飲水管線的清洗試驗(yàn)在洛陽(yáng)成大禽業(yè)有限公司的雛雞舍進(jìn)行，為雛雞出欄后的空舍。過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍空氣的消毒試驗(yàn)在洛陽(yáng)市孟津縣趙哲青年雞場(chǎng)雞舍進(jìn)行，該養(yǎng)殖場(chǎng)有3棟雞舍，其中一個(gè)養(yǎng)有青年雞，另外2個(gè)為空舍，選擇帶雞雞舍作為試驗(yàn)場(chǎng)地，雞舍面積約5 000 m3。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍自然菌的消毒效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)。

從養(yǎng)殖場(chǎng)雞舍內(nèi)采集清洗圈舍的廢水，在實(shí)驗(yàn)室接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯中進(jìn)行增菌培養(yǎng)，得到的菌液于試驗(yàn)前調(diào)整OD600值至0.15，然后依據(jù)《獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范》[6]規(guī)定，按照以下方法評(píng)價(jià)過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍內(nèi)自然菌的消毒效果。

用無(wú)菌純化水溶解并稀釋過硫酸氫鉀復(fù)合物粉至一定濃度，吸取0.5 mL制備好的試驗(yàn)菌液置于4.5 mL稀釋好的消毒劑中，作用5 min后取消毒劑與菌液的混合液0.5 mL加入4.5 mL中和劑（0.5%硫代硫酸鈉溶液）中，渦旋混勻后開始計(jì)時(shí)，作用10 ?min，計(jì)時(shí)結(jié)束后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。以純化水代替消毒劑重復(fù)上述過程作為陽(yáng)性對(duì)照組，以PBS代替消毒劑、菌液重復(fù)上述過程作為陰性對(duì)照組。當(dāng)消毒劑最高稀釋倍數(shù)的殺菌率在99.9%以上時(shí)，可判定該稀釋倍數(shù)為消毒劑的最低有效殺菌濃度。按照下述公式計(jì)算殺菌率（Pt）：殺菌率（Pt）=[（N0-Nt）/N0]×100%。其中，N0為陽(yáng)性對(duì)照組的活菌數(shù)，Nt為試驗(yàn)組的活菌數(shù)。

1.2.2 過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍飲水管線的清洗試驗(yàn)。

將過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶200比例稀釋，根據(jù)雞舍內(nèi)飲水管線的容量，制備40 L經(jīng)1∶200倍稀釋的過硫酸氫鉀復(fù)合物粉水溶液。在飲水管線首端的水桶中加入足量稀釋好的消毒劑，然后在飲水管線末端放水直至有消毒劑流出停止放水，以此清除管內(nèi)殘存的水，確保水線中充滿消毒劑，此時(shí)飲水線首端的水桶中應(yīng)至少有半桶消毒液。此后計(jì)時(shí)開始浸泡管線，共浸泡2 h。待過硫酸氫鉀復(fù)合物粉浸泡結(jié)束后，從飲水管線末端放出浸泡液至白色塑料桶中。肉眼觀察浸泡液中的懸浮物、污垢的量以及末端水管內(nèi)壁上生物膜厚度，以此判斷過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍引水管線的清洗作用。

1.2.3 過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍的空氣消毒試驗(yàn)。

進(jìn)行過硫酸氫鉀復(fù)合物粉空氣消毒前，在圈舍的前、中、后3個(gè)位置分別放置一塊TSA培養(yǎng)基，打開平皿上蓋，靜置20 min，然后將平皿上蓋蓋好，將平皿置于37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，以此作為對(duì)照組。此后用自來水將圈舍沖洗干凈，并用自來水按1∶100倍比例對(duì)過硫酸氫鉀復(fù)合物粉進(jìn)行稀釋，往噴霧消毒機(jī)內(nèi)加入足量的1∶100倍稀釋的過硫酸氫鉀復(fù)合物粉水溶液，關(guān)閉圈舍的門窗，開啟噴霧消毒機(jī)，待消毒設(shè)備噴霧結(jié)束后，持續(xù)消毒1 h。消毒結(jié)束后，在消毒前采樣的相同位置分別放置一塊TSA培養(yǎng)基，打開平皿上蓋，靜置20 min，此后將平皿上蓋蓋好，將平皿置于37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，以此作為消毒組。

比較消毒組與對(duì)照組空氣沉降菌的數(shù)量，按照以下公式計(jì)算殺菌率（Pt），評(píng)價(jià)過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)空氣的消毒效果：殺菌率（Pt）=[（N0-Nt）/N0]×100%。其中，N0為對(duì)照組的活菌數(shù)，Nt為消毒組的活菌數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍自然菌的消毒效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果 不同稀釋倍數(shù)的過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍內(nèi)自然菌的殺菌率見表1。由表1可知，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶100、1∶200稀釋時(shí)，對(duì)雞舍自然菌的殺菌率為100%;過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶400稀釋時(shí)，對(duì)雞舍自然菌的殺菌率在99.99%以上，均能有效殺滅雞舍內(nèi)的自然菌。過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶800稀釋時(shí)，雖然對(duì)雞舍自然菌都有一定的殺滅作用，但殺滅率未達(dá)到99.9%，說明過硫酸氫鉀復(fù)合物粉在這個(gè)稀釋倍數(shù)不能有效殺滅雞舍內(nèi)的自然菌。因此，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍內(nèi)自然菌的最低有效殺菌濃度為1∶400倍稀釋后的濃度。

2.2 過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍飲水管線的清洗試驗(yàn)結(jié)果 在過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍飲水管線的清洗試驗(yàn)中，當(dāng)消毒劑浸泡結(jié)束后從飲水線末端放出浸泡液至白色塑料桶中，可觀察到放出的浸泡液中含有大量污垢沉淀（沉淀呈鐵銹色）和絮狀懸浮物，消毒劑顏色由玫紅色變成磚紅色。此外，末端管線內(nèi)壁上沒有生物膜覆蓋，與未浸泡的管線內(nèi)壁相比更為清潔，結(jié)果如圖1所示。該試驗(yàn)結(jié)果表明，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉1∶200倍稀釋時(shí)，充滿雞舍內(nèi)飲水管線并浸泡2 h，對(duì)雞舍飲水管線具有較好的清洗作用。

2.3 過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍的空氣消毒試驗(yàn)結(jié)果

過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍空氣的消毒試驗(yàn)結(jié)果顯示，消毒前雞舍各位置放置的平皿上均有菌落生長(zhǎng);使用過硫酸氫鉀復(fù)合物粉噴霧消毒1 h后，前、中、后3塊培養(yǎng)基上均沒有細(xì)菌生長(zhǎng)，結(jié)果如圖2、3所示。該試驗(yàn)結(jié)果表明，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉1∶100稀釋時(shí)，消毒作用1 h，對(duì)雞舍內(nèi)空氣自然菌的殺菌率達(dá)100%。

3 討論

該試驗(yàn)結(jié)果表明，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍自然菌的最低有效濃度為1∶400稀釋，對(duì)應(yīng)的活性氧含量為250 mg/L。王娟等[7]報(bào)道過硫酸氫鉀復(fù)合鹽對(duì)禽類常見菌大腸桿菌、沙門菌、金黃色葡萄和鴨疫里墨桿菌的最低有效濃度分別為230.0、115.0、57.5和14.4 mg/L，與該試驗(yàn)結(jié)果基本一致。另外，楊俊蕓等[8]、宋曉紅等[9]、陽(yáng)艷林等[10]、付維星等[11]報(bào)道的過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)細(xì)菌的殺菌試驗(yàn)大多采用標(biāo)準(zhǔn)菌株作為測(cè)試菌，但標(biāo)準(zhǔn)菌株的抗力及特性與臨床自然菌存在一定的差異。為了給養(yǎng)殖場(chǎng)提供更接近實(shí)際的數(shù)據(jù)，該試驗(yàn)選用雞舍內(nèi)的自然菌作為測(cè)試菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶400稀釋，可以有效殺滅雞舍自然菌，殺菌率大于99.9%，提高了試驗(yàn)結(jié)果與臨床應(yīng)用的緊密性。

在該研究中將過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶200稀釋，充滿雞舍飲水管線并浸泡3 h，結(jié)果顯示對(duì)過硫酸氫鉀復(fù)合物粉雞舍飲水管線具有良好的清洗效果，目前文獻(xiàn)中尚未見過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)畜禽舍飲水管線清洗方面的相關(guān)報(bào)道。該研究結(jié)果拓寬了過硫酸氫鉀復(fù)合物粉在養(yǎng)殖場(chǎng)的應(yīng)用范圍，對(duì)該產(chǎn)品在臨床上的應(yīng)用提供了理論支持。另外，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉按1∶100稀釋時(shí)，對(duì)雞舍空氣中的自然菌殺菌率達(dá)100%，該試驗(yàn)結(jié)果與劉元元等[12]的報(bào)道相一致。上述研究結(jié)果為過硫酸氫鉀復(fù)合物粉在臨床上的應(yīng)用提供了參考依據(jù)，具有較好的臨床指導(dǎo)作用。

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