Notch信號(hào)通路抑制劑DAPT對(duì)急性白血病細(xì)胞增殖及凋亡的作用

羅鴻偉 陳日玲 宋波 田川 蔡康榮

【摘要】 目的：探討Notch信號(hào)通路抑制劑DAPT對(duì)急性白血病細(xì)胞增殖及凋亡的作用。方法：選取2017年4月-2018年3月廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院未化療白血病患者20例為研究對(duì)象，根據(jù)形態(tài)-免疫-細(xì)胞遺傳學(xué)-分子生物學(xué)（MICM）診斷分類，將研究對(duì)象骨髓樣本中的單個(gè)核細(xì)胞分離并分為急性淋巴細(xì)胞白血病（acute lymphocyte leukemia，ALL）和急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML），ALL與AML經(jīng)純化擴(kuò)增后分別隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組均予以通路抑制劑DAPT 1 μmol/L共培養(yǎng)，對(duì)照組予以等量二甲基亞砜DMSO共培養(yǎng)，共培養(yǎng)72 h后計(jì)算各組細(xì)胞增殖抑制率，同時(shí)應(yīng)用Annexin V-FIFC/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：ALL中實(shí)驗(yàn)組的增殖抑制OD值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.000 1）;AML中兩組的增殖抑制OD值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。另外AML予DAPT干預(yù)72 h后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，其中實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞個(gè)數(shù)為8.6×105/mL，對(duì)照組細(xì)胞個(gè)數(shù)為9.2×105/mL，兩組細(xì)胞數(shù)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。AML中實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。ALL的實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)72 h后細(xì)胞計(jì)數(shù)為5.2×105/mL，而對(duì)照組細(xì)胞計(jì)數(shù)9.0×105/mL，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。ALL中實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率為（15.78±0.48）%，高于對(duì)照組的（6.25±0.49）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。結(jié)論：Notch信號(hào)通路抑制劑對(duì)ALL白血病細(xì)胞的增殖及凋亡起到重要的作用，而對(duì)AML無明顯影響。

【關(guān)鍵詞】 急性白血病細(xì)胞 Notch信號(hào)通路 DAPT 增殖 凋亡

[Abstract] Objective： To investigate the effect of Notch signaling pathway inhibitor DAPT on proliferation and apoptosis of acute leukemia cells. Method： A total of 20 non-chemotherapy leukemia patients in affiliated hospital of Guangdong Medical University from April 2017 to March 2018 were selected as the research objects， according to morphoid-immunocytogenetic-molecular biology （MICM） diagnostic classification， the mononuclear cells in the bone marrow samples of research objects were isolated and divided into acute lymphocyte leukemia （ALL） and acute myeloid leukemia （AML）. After the purification and amplification of ALL and AML， they were randomly divided into the experimental group and the control group， the experimental group was co-cultured with the pathway inhibitor DAPT 1 μmol/L， and the control group was co-cultured with the same amount of dimethylsulfoxide DMSO， after co-culture for 72 hours， the inhibition rate of cell proliferation in each group was calculated. Result： In ALL， the proliferation inhibition OD value of the experimental group was lower than that of the control group， the difference was statistically significant （P<0.000 1）; in AML， there was no statistically significant difference in proliferation inhibition OD values between the two groups （P>0.05）. In addition， AML cells were counted after DAPT intervention for 72 h， the number of cells in the experimental group was 8.6×105/mL， and 9.2×105/mL in the control group， there was no significant difference in cell number between the two groups （P>0.05）. There was no statistically significant difference in apoptosis rate between the experimental group and the control group in AML （P<0.05）. In ALL， after 72 h of culture， the cell count of the experimental group was 5.2×105/mL， while 9.0×105/mL of the control group， the cell count of the experimental group was significantly lower than that of the control group， with statistically significant difference （P<0.05）. In ALL， the apoptosis rate of the experimental group was （15.78±0.48）%， higher than （6.25±0.49）% of the control group， the difference was statistically significant （P<0.001）. Conclusion： Notch signaling pathway inhibitor plays an important role in the proliferation and apoptosis of ALL leukemia cells， but has no significant effect on AML.

白血病（leukemia）為兒童發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，其造成的不良預(yù)后及相關(guān)并發(fā)癥常導(dǎo)致兒童死亡;是一類造血系統(tǒng)異常增殖的單克隆惡性疾病，可在體內(nèi)出現(xiàn)大量分化受阻的原始及幼稚細(xì)胞，與正常細(xì)胞出現(xiàn)惡性競(jìng)爭(zhēng)使其正常生理功能無法發(fā)揮而導(dǎo)致一系列臨床癥狀產(chǎn)生。盡管隨著化療方案的不斷改進(jìn)，大多數(shù)急性淋巴細(xì)胞白血病（acute lymphocyte leukemia，ALL）患兒能被治愈，但仍有約25%的患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)，嚴(yán)重威脅患兒生命安全，增加患兒死亡率。然而，近年來隨著對(duì)腫瘤細(xì)胞的深入研究發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)可在腫瘤細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常增生表達(dá)，表明Notch信號(hào)通路的改變與肺腺癌、膽管癌、淋巴瘤、結(jié)直腸癌等多種腫瘤發(fā)生有關(guān)[1]，另外日本兒童白血病研究協(xié)會(huì)（JACLS）曾在55例T-ALL患者中發(fā)現(xiàn)17例（30.9%）出現(xiàn)Notch1突變[2]，這表明Notch信號(hào)通路在急性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)病中起到重要作用，但其具體作用機(jī)制仍不明確;γ-分泌酶可切割Notch受體，使Notch細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域解離至細(xì)胞核中導(dǎo)致靶基因的表達(dá)，而γ-分泌酶抑制劑DAPT是一種在實(shí)驗(yàn)中常用的阻斷Notch信號(hào)通路的分子[3]，因此能夠抑制Notch信號(hào)通路的激活從而使靶基因沉默;本研究則通過體外實(shí)驗(yàn)，以急性淋巴細(xì)胞白血病為模型，探討Notch信號(hào)通路抑制劑DAPT與急性白血病細(xì)胞增殖及凋亡的關(guān)系，以增加對(duì)急性白血病細(xì)胞發(fā)病機(jī)制的了解，為進(jìn)一步闡明急性白血病可能的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 經(jīng)廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并在獲取家屬知情同意及簽訂書面知情同意書后，于2017年4月-2018年3月從住院部收集未經(jīng)任何化療的急性白血病患者骨髓樣本20例。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①入院前未用過糖皮質(zhì)激素等化療有關(guān)藥物;②經(jīng)MICM分型確診為急性白血病患者;③無合并肝、腎及心腦血管疾病與其他惡性腫瘤者。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)于免疫缺陷;②合并遺傳代謝病;③入院前曾有放療史;④中途要求退出者。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 倒置相差顯微鏡（Leica公司），酶標(biāo)測(cè)試儀（PerkinElmer公司），熒光顯微鏡（美國(guó)Bio-Rad公司），F(xiàn)ACSCanto流式細(xì)胞儀（BD公司），DAPT（Selleckchem貨號(hào)：S2215），RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基（Invitrogen，U.S.A貨號(hào)：SH30809.01B），胎牛血清（Gibco，貨號(hào)：04-002-1C），人骨髓分離液及樣本稀釋液（天津，貨號(hào)：TBD2013LHU），MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（碧云天生物公司，貨號(hào)：559763），AnnexinV-FIFC/PI細(xì)胞凋亡試劑盒（碧云天生物公司）。

1.3 方法

1.3.1 分組 從患者骨髓中分離出單個(gè)核細(xì)胞（MNCs），并根據(jù)MICM診斷分型將其分為ALL和急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）;同一患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞設(shè)為自身對(duì)照，經(jīng)分離純化培養(yǎng)后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組均予以γ分泌酶抑制劑即DAPT 1 μmol/L濃度共培養(yǎng);對(duì)照組為空白對(duì)照，加等量DMSO共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 骨髓標(biāo)本抽取 選取2017年4月-2018年3月

廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院初診白血病患者（化療前）20例，抽取骨髓樣本后4～6 h內(nèi)進(jìn)行密度梯度分離。骨髓涂片原始細(xì)胞比例計(jì)算方法：通過油鏡下計(jì)數(shù)每個(gè)標(biāo)本的骨髓涂片細(xì)胞250個(gè)，然后按照髓系原始細(xì)胞個(gè)數(shù)/250個(gè)有核細(xì)胞所得。

1.3.3 單個(gè)核細(xì)胞分離及培養(yǎng) 用密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞：將人淋巴細(xì)胞分離液復(fù)溫后與骨髓標(biāo)本等量混勻并離心;離心后管內(nèi)液體分為明顯的4層;提取第二層中的單個(gè)核細(xì)胞云霧狀層置于另一無菌離心管中后再次離心，管底白色沉淀即為分離的單個(gè)核細(xì)胞。單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)：將分離出的單個(gè)核細(xì)胞加入RPMI-1640培養(yǎng)基后置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)96 h;取上述生長(zhǎng)狀態(tài)良好的MNCs以1×104/mL接種于96孔板中，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，并在實(shí)驗(yàn)組加入1 μmol/mL DAPT，對(duì)照組加入1 μmol/mL DMSO后放入37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中靜置共培養(yǎng)72 h。

1.3.4 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖活性 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組培養(yǎng)72 h后于每孔均加入配制好的MTT溶液20 μL，放于CO2培養(yǎng)箱孵育4 h后離心后置于酶標(biāo)儀570 nm讀取各孔吸光度（A570）值，按（1-A570用藥組/A570未用藥組）×100%計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率（%）。

1.3.5 AnnexinV-FIFC/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組培養(yǎng)72 h后終止培養(yǎng)，離心后各組均加入100 μL 1×Binding Buffer工作液，混勻，再加5 μL Annexin V-FITC染料和5 μL PI染料，避光，室溫下孵育15 min;上機(jī)前加入400 μL 1×Binding Buffer工作液后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至流式管上機(jī)檢測(cè)且需在1 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件，正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的計(jì)量資料采用M（P25，P75）表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 骨髓樣本臨床資料 收集急性白血病患者骨髓20例，所取樣本中ALL共有11例，以B-ALL為主，占比81.81%（9/11），其中男6例，女5例，年齡1～11歲，平均5（3，10）歲，骨髓涂片原始細(xì)胞比例均值為74.15%。AML共有9例，其中男5例，女4例，年齡1～44歲，平均7（4，36.5）歲，骨髓涂片原始細(xì)胞比例均值為68.98%。根據(jù)MICM分型，臨床資料結(jié)果見表1。

2.2 MNCs細(xì)胞形態(tài)學(xué) 在倒置顯微鏡下可觀察到：骨髓中單個(gè)核細(xì)胞為圓形或類圓形，細(xì)胞大小相對(duì)一致，折光性好，見圖1。

2.3 ALL和ALM中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞增殖檢測(cè)OD值和細(xì)胞計(jì)數(shù)情況比較 （1）ALL：實(shí)驗(yàn)組的增殖抑制OD值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.000 1）;（2）AML：兩組的增殖抑制OD值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2、圖2和圖3。另外AML予DAPT干預(yù)72 h后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，其中實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞個(gè)數(shù)為8.6×105/mL（圖4A），對(duì)照組細(xì)胞個(gè)數(shù)為9.2×105/mL（圖4B），兩組細(xì)胞數(shù)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。ALL的實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)72 h后細(xì)胞計(jì)數(shù)為5.2×105/mL（圖4C），而對(duì)照組細(xì)胞計(jì)數(shù)為9.0×105/mL（圖4D），實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.4 AML和ALL中實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞及空白對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率比較 （1）AML：實(shí)驗(yàn)組予DAPT共培養(yǎng)72 h后置于熒光顯微鏡下觀察，可見實(shí)驗(yàn)組（圖5A）中代表早期凋亡的綠色熒光點(diǎn)及晚期凋亡的紅色熒光點(diǎn)較對(duì)照組（圖5B）無明顯數(shù)量差異;進(jìn)一步行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組（圖6）相比，實(shí)驗(yàn)組（圖6）的流式散點(diǎn)圖中Q2及Q4象限中細(xì)胞凋亡比例無明顯差異性。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（2）經(jīng)DAPT干預(yù)ALL實(shí)驗(yàn)組72 h后予流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組（圖7）的流式散點(diǎn)圖中Q2及Q4象限中所代表的晚期凋亡及早期凋亡細(xì)胞比例均較對(duì)照組增加（圖7），而Q4象限中活細(xì)胞比例則較對(duì)照組下降;且細(xì)胞凋亡免疫熒光圖顯示，實(shí)驗(yàn)組（圖8A）每視野下的早期凋亡及晚期凋亡比例均大于對(duì)照組（圖8B）。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率為（15.78±0.48）%，高于對(duì)照組的（6.25±0.49）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。見表3、圖9和圖10。

3 討論

白血病是一種常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤之一，但其具體發(fā)病機(jī)制仍不明確。Jundt等[4]研究表明，Notch信號(hào)通路與白血病和淋巴瘤的發(fā)病有關(guān);而Notch基因于1917年由Morgan等從果蠅中發(fā)現(xiàn)并命名，后續(xù)的進(jìn)一步研究表明包括小鼠和人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的Notch存在四種受體（Notch1-4）及五個(gè)配體（Delta-like 1、Delta-like 3、Delta-like 4、Jagged1和Jagged2），Notch通路的激活發(fā)生在五種配體中的一種與四種受體中的一種結(jié)合之后，導(dǎo)致受體的活性形式被稱為“Notch細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域”[5]。對(duì)于細(xì)胞，Notch基因具備可選擇性地抑制或誘導(dǎo)分化、促進(jìn)生存或誘導(dǎo)凋亡的能力，為促進(jìn)或阻礙多種細(xì)胞類型的癌變提供了機(jī)會(huì)，這些不同的選擇可直接或間接激活Notch下游靶基因的不同補(bǔ)體如CD25、Ptcra[6]，從而對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生不同的作用，這對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育起到重要作用。Siemers等[7]首先報(bào)道了一項(xiàng)γ-分泌酶抑制劑在體內(nèi)作用于阿爾茨海默病患者的隨機(jī)研究，但目前關(guān)于γ-分泌酶的酶活性和γ-分泌酶抑制劑作用于白血病細(xì)胞的相關(guān)研究很少，故本實(shí)驗(yàn)通過γ-分泌酶抑制劑DAPT作用于白血病細(xì)胞，從而阻斷細(xì)胞內(nèi)Notch信號(hào)通路，進(jìn)一步印證Notch信號(hào)通路對(duì)急性白血病的作用。

本研究結(jié)果顯示，當(dāng)Notch信號(hào)抑制劑DAPT作用于急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞時(shí)，ALL細(xì)胞增殖率較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.000 1）;而凋亡率則較對(duì)照組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），提示阻斷Notch信號(hào)通路可促進(jìn)ALL白血病細(xì)胞凋亡;Notch在造血發(fā)育過程中起著重要作用，早在胚胎造血早期，Notch1信號(hào)就被證實(shí)在第一代造血干細(xì)胞的發(fā)育過程中是不可缺少的，Kuang等[8]發(fā)現(xiàn)在人B-ALL白血病中Notch通路可抑制早期B細(xì)胞分化，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)停滯和凋亡，其中的機(jī)制可能與異常啟動(dòng)子DNA甲基化和組蛋白修飾致腫瘤抑癌基因的沉默有關(guān)，且使用MCA微陣列可在B-ALL樣本中在檢測(cè)到Notch通路基因Notch3和Hes5為高甲基化，提示Notch對(duì)B-ALL腫瘤細(xì)胞具有抑制作用，且Kamga等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在未經(jīng)任何有效化療的高危急性B淋巴細(xì)胞白血病患者體內(nèi)中Notch3、Notch4和Jagged2存在過表達(dá)現(xiàn)象，但在阿糖胞苷、地塞米松和阿霉素等有效化療后Notch1-4在體內(nèi)的表達(dá)水平卻出現(xiàn)下降，提示Notch信號(hào)通路可影響B(tài)-ALL的增殖及凋亡，進(jìn)一步的體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)γ-分泌酶抑制劑（GSI）和抗Notch4都能夠通過上調(diào)細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平來增強(qiáng)B-ALL細(xì)胞中化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，降低B-ALL細(xì)胞的細(xì)胞存活率，這與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致;另外在1991年Notch1被確定為T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病（T-ALL）患者t（7︰9）（q34;q34）易位的一部分時(shí)，異常Notch激活首次與癌癥相關(guān)，這種易位暗示Notch1是一種T細(xì)胞致癌基因[10]，而另一項(xiàng)研究更是認(rèn)為有大于50%以上的T-ALL病例存在Notch1基因的激活突變，揭示Notch1突變是T-ALL中最常見的致癌病變[11]，且Mendes等[12]研究顯示，阻斷Notch1可以通過多種途徑抑制PI3K/AKT/mTOR信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致T-ALL細(xì)胞在體外和體內(nèi)的存活率降低，以上研究與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，但在T-ALL患者中，Notch1和FBXW7突變通常與良好的預(yù)后和較低的微小殘留病（MRD）水平相關(guān)[13];但由于本實(shí)驗(yàn)中因T-ALL樣本量少，進(jìn)一步的結(jié)論需要更多的樣本量。

另外本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)Notch信號(hào)抑制劑DAPT作用于急性髓系白血病細(xì)胞時(shí)，AML的DAPT組細(xì)胞與Control組細(xì)胞增殖、凋亡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;而Lbory等[14]研究發(fā)現(xiàn)，Notch信號(hào)傳導(dǎo)途徑在原發(fā)性AML患者細(xì)胞中為沉默表現(xiàn)，當(dāng)使用活性形式的Notch1或Notch2的條件誘導(dǎo)型等位基因，或在體外使用重組配體介導(dǎo)的方式均能激活Notch信號(hào)通路，使體內(nèi)Notch由沉默轉(zhuǎn)變?yōu)樵偌せ睿瑥亩鸺?xì)胞周期快速停滯、AML細(xì)胞快速凋亡，因而有效地抑制AML疾病

進(jìn)展;另外Ye等[15]也認(rèn)為N-甲基血紅素氯化物（NMHC）可通過激活Notch信號(hào)強(qiáng)制表達(dá)或模擬Notch配體的多肽效應(yīng)，從而起到阻礙AML細(xì)胞分裂、并誘導(dǎo)其凋亡而成功抑制白血病的發(fā)生;Kannan等[16]研究發(fā)現(xiàn)人類AML樣本具有Notch受體的強(qiáng)大基因數(shù)據(jù)表達(dá)譜，但Notch受體的激活和下游Notch靶標(biāo)的表達(dá)卻非常低，這表明Notch雖廣泛存在于人AML中，但并未被廣泛激活而表現(xiàn)為基因沉默，而被激活的Notch1、Notch2和HES1則可導(dǎo)致體內(nèi)AML生長(zhǎng)停滯和caspase依賴性凋亡，且通過dnMAML抑制Notch則可增強(qiáng)AML在體內(nèi)的增殖，從而揭示了Notch信號(hào)對(duì)AML的作用。相反，文獻(xiàn)[17-18]研究認(rèn)為，Notch信號(hào)對(duì)AML生長(zhǎng)和生存的影響是可變的，這取決于個(gè)體AML樣本，Notch信號(hào)傳導(dǎo)途徑在AML的細(xì)胞中的表達(dá)水平并不一致，表明可能存在不同的致癌信號(hào)傳導(dǎo)途徑或涉及調(diào)節(jié)的其他未發(fā)現(xiàn)的相關(guān)因子，使得各種信號(hào)傳導(dǎo)途徑和細(xì)胞因子相互作用導(dǎo)致細(xì)胞所處的微環(huán)境或Notch受體的分子量、配體密度及活性發(fā)生變化，最終導(dǎo)致了不同AML細(xì)胞表現(xiàn)出不同的分化、增殖、凋亡等結(jié)果;此外，Tohda等[17]從12例患者的血液中分離出的AML細(xì)胞置于涂有Jagged1，Delta1或?qū)φ誌gG的孔中培養(yǎng)，使用比色法評(píng)估短期細(xì)胞生長(zhǎng)變化，結(jié)果顯示，暴露于不同配體后，膜結(jié)合的Notch受體識(shí)別Delta1和Jagged1家族的配體時(shí)，它們會(huì)被金屬蛋白酶和γ-分泌酶復(fù)合物裂解，從而使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域釋放到細(xì)胞核中，并與輔因子結(jié)合以控制大量靶標(biāo)，導(dǎo)致急性髓系白血病細(xì)胞的短期生長(zhǎng)根據(jù)不同配體產(chǎn)生不同的結(jié)果，即促進(jìn)、抑制或無明顯作用。而本實(shí)驗(yàn)中考慮可能與樣本量不夠大或細(xì)胞培養(yǎng)條件、細(xì)胞本身異質(zhì)性及其他信號(hào)通路共同作用下的癌變的影響下出現(xiàn)陰性結(jié)果，但進(jìn)一步的結(jié)論仍需要進(jìn)行更多研究以更好地描述Notch在AML中的作用。

綜上所述，DAPT阻斷Notch信號(hào)通路可促進(jìn)ALL中白血病細(xì)胞的凋亡，抑制增殖，但對(duì)AML骨髓中的白血病細(xì)胞增殖、凋亡無明顯作用，本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步明確Notch信號(hào)通路在白血病細(xì)胞增殖、凋亡中的作用以及急性白血病的靶向治療的研究提供了理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2019-11-05） （本文編輯：張爽）