胃癌患者Hp感染的外周血MODCs成熟及活化分析

王雪媛

[摘要] 目的 分析胃癌患者Hp感染的外周血MODCs成熟及活化。方法 隨機(jī)選取2015年6月—2019年6月內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科胃癌患者60例，分為Hp陽性組（n=30）和Hp陰性組（n=30）兩組，統(tǒng)計(jì)分析兩組患者的外周血MODCs成熟標(biāo)記分子表達(dá)率、IFN-γ、IL-12濃度、外周血MODCs致敏T細(xì)胞對胃癌細(xì)胞毒性殺傷率。 結(jié)果Hp陽性組CagA+菌株、CagA-菌株患者的外周血CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR表達(dá)率均顯著高于Hp陰性組（t=3.182、2.776、2.571、2.447、2.365、2.306、3.365、3.306、3.300、3.247，P<0.05），但CagA+菌株、CagA-菌株患者的外周血CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR表達(dá)率之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.886、1.638，、1.533、1.476、1.460，P>0.05）。Hp陽性組患者的IFN-γ、IL-12濃度均顯著高于Hp陰性組（t=4.541、6.965，P<0.05），外周血MODCs致敏T細(xì)胞對胃癌細(xì)胞毒性殺傷率（40.4±7.0）%顯著高于Hp陰性組（29.7±6.2）%（t=4.303，P<0.05）。 結(jié)論 胃癌患者Hp感染會對外周血MODCs成熟及活化進(jìn)行刺激，促進(jìn)癌細(xì)胞殺傷作用的提升。

[關(guān)鍵詞] 胃癌;Hp感染;外周血MODCs成熟;活化

[Abstract] Objective To analyze the maturation and activation of MODCs in peripheral blood of patients with Hp infection in gastric cancer. Methods 60 patients with gastric cancer in the Department of Gastroenterology， the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College， Inner Mongolia University of Science and Technology from June 2015 to June 2019 were randomly selected and divided into two groups： Hp-positive group（n=30） and Hp-negative group （n=30）. The statistical analysis of the expression rates of mature marker molecules in peripheral blood MODCs， the concentrations of IFN-γ， IL-12， and the cytotoxicity of peripheral blood MODCs-sensitized T cells on gastric cancer cells were statistically analyzed. Results The expression rates of CD40， CD80， CD83， CD86， and HLA-DR in peripheral blood of patients with Hg-positive group CagA+strain and CagA- strain were significantly higher than those in Hp-negative group （t=3.182， 2.776， 2.571， 2.447， 2.365， 2.306， 3.365 ， 3.306， 3.300， 3.247， P<0.05）， but there was no significant difference in the expression rates of peripheral blood CD40， CD80， CD83， CD86， HLA-DR in patients with CagA+strain and CagA- strain （t=1.886， 1.638， 1.533， 1.476， 1.460， P>0.05）. The concentrations of IFN-γ and IL-12 in patients with Hp-positive group were significantly higher than those in Hp-negative group（t=4.541，6.965， P<0.05）. Peripheral blood MODCs sensitized T cells had cytotoxicity to gastric cancer cells （40.4±7.0）% The was significantly higher than that in the Hp-negative group （29.7 ± 6.2）% （t=4.303， P<0.05）. Conclusion Hp infection in patients with gastric cancer can stimulate the maturation and activation of MODCs in peripheral blood， and promote the killing effect of cancer cells.

[Key words] Gastric cancer; Hp infection; MODCs maturation in peripheral blood; Activation

在胃炎、消化性潰瘍等致病因子中，幽門螺桿菌（Hp）占有重要地位，其直接而深刻地影響著胃癌的發(fā)生發(fā)展[1]。近年來，相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[2]，如果胃癌患者Hp感染，其就具有較好的預(yù)后，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因可能為Hp將機(jī)體抗癌免疫激活并增強(qiáng)。但是目前，臨床仍然沒有明確其機(jī)制。該研究對2015年6月—2019年6月該院消化內(nèi)科胃癌患者60例的臨床資料進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，分析了胃癌患者Hp感染的外周血MODCs成熟及活化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

隨機(jī)選取該院消化內(nèi)科胃癌患者60例，分為Hp陽性組（n=30）和Hp陰性組（n=30）兩組。Hp陽性組患者中男性20例，女性10例;年齡32～64歲，平均（52.4±6.1）歲;在TNM分期方面，18例為Ⅰ～Ⅱ期，12例為Ⅲ～Ⅳ期;在菌株方面，17例為CagA+，13例為CagA-。Hp陰性組患者中男性19例，女性11例;年齡33～64歲，平均（53.2±6.6）歲。在TNM分期方面，17例為Ⅰ～Ⅱ期，13例為Ⅲ～Ⅳ期。兩組患者的一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。具有可比性。該研究所選病例經(jīng)過倫理委員會批準(zhǔn)，患者或家屬知情同意。

1.2? 方法

1.2.1? Hp感染鑒定? 胃鏡活檢，將兩組患者的3～5塊病灶黏膜或胃竇組織取出來，在RPMI1640培養(yǎng)液中放置備用。采用Warthin-Starry銀染色、14C呼氣試驗(yàn)、快速尿素酶試驗(yàn)對Hp進(jìn)行檢測。Hp陽性標(biāo)準(zhǔn)為Hp快速診斷試紙向紅色轉(zhuǎn)變，SQT1034快速銀染色藥盒染色后發(fā)現(xiàn)Hp繁殖，或14C尿素呼氣試驗(yàn)在100 dpm/mmol CO2及以上[3]。

1.2.2? 外周血MODCs培養(yǎng)? 將兩組患者的30 mL外周血抽取出來，運(yùn)用Ficoll法將DCs分離出來并重懸，在此過程中將無血清的含2 mmol/L L-谷氨酰（RPMI1640）充分利用起來，顯微鏡下將細(xì)胞密度調(diào)整為2×106/mL，在6孔板中鋪細(xì)胞培養(yǎng)，將懸浮細(xì)胞吸棄，清晰后將貼壁細(xì)胞獲取過來，在含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中加入，然后將重組人白細(xì)胞介素-4（rhIL-4）、重組人粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rhGM-CSF）依次加入，3 d半量換液1次，6 d后將重組人腫瘤壞死因子（rhTNF-α）加入，將未成熟的DCs獲取過來。

1.2.3? DCs表面成熟標(biāo)記分子檢測? 將5管100 μL/EP管未成熟的DCs細(xì)胞懸液取出來，將空白對照組設(shè)定為其中1管，將20 μL熒光抗體PE-HLA-DR、20 μL熒光抗體FITC-CD83、20 μL熒光抗體PE-CD86、20 μL熒光抗體PE-CD40分別加入其余4管，直接免疫熒光標(biāo)記成功后檢測，在此過程中采用日本Olympus流式細(xì)胞儀。

1.2.4? 人干擾素-γ（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-12（IL-12）檢測? 將培養(yǎng)第1周、2周的成熟DCs上清液分別取出來，應(yīng)用ELISA試劑盒，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對IFN-γ、IL-12進(jìn)行檢測。

1.2.5? MODCs致敏T細(xì)胞對癌細(xì)胞的殺傷力檢測? 將效應(yīng)細(xì)胞、靶細(xì)胞收集起來，按效靶比20∶1將效應(yīng)細(xì)胞靶細(xì)胞混合液制備出來。將100 μL孔細(xì)胞培養(yǎng)液加入空白對照組，將50 μL孔靶細(xì)胞培養(yǎng)液、50 μL孔細(xì)胞培養(yǎng)液加入靶細(xì)胞自然釋放組，將50 μL孔靶細(xì)胞培養(yǎng)液+10 μL細(xì)胞裂解液+40 μL細(xì)胞培養(yǎng)液加入靶細(xì)胞最大釋放組，將50 μL孔效應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液、50 μL/孔細(xì)胞培養(yǎng)液加入效應(yīng)細(xì)胞自然釋放組，將100 μL/孔效靶細(xì)胞混合液加入實(shí)驗(yàn)組。培養(yǎng)后采用酶標(biāo)儀在490 nm處對OD值進(jìn)行測量。實(shí)驗(yàn)孔、靶細(xì)胞自發(fā)釋放孔、效應(yīng)細(xì)胞自發(fā)釋放孔OD值之差與靶細(xì)胞最大釋放孔、靶細(xì)胞自發(fā)釋放孔OD值之差的百分比即為細(xì)胞毒活性[4]。

1.3? 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用率表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2? 結(jié)果

2.1? 外周血MODCs成熟標(biāo)記分子表達(dá)率

Hp陽性組CagA+菌株、CagA-菌株患者的外周血CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR表達(dá)率均顯著高于Hp陰性組（t=3.182、2.776、2.571、2.447、2.365、2.306、3.365、3.306、3.300、3.247，P<0.05），但CagA+菌株、CagA-菌株患者的外周血CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR表達(dá)率之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.886、1.638、1.533、1.476、1.460，P>0.05），見表1。

2.2? IFN-γ、IL-12濃度、外周血MODCs致敏T細(xì)胞對胃癌細(xì)胞毒性殺傷率

Hp陽性組患者的IFN-γ、IL-12濃度均顯著高于Hp陰性組（t=4.541、6.965，P<0.05），外周血MODCs致敏T細(xì)胞對胃癌細(xì)胞毒性殺傷率（40.4±7.0）%顯著高于Hp陰性組（29.7±6.2）%（t=4.303，P<0.05），見表2。

3? 討論

胃癌的癥狀主要是在腫瘤生長的部位導(dǎo)致的和上腹部相關(guān)的一些表現(xiàn)。早期的胃癌實(shí)際上很容易和一些良性胃病相混淆，包括慢性胃炎、消化性潰瘍等，因此單靠癥狀也很難確定到底是胃的良性疾病，還是胃的惡性腫瘤。對于常見的胃癌癥狀，包括上腹的一些不適，實(shí)際上是由于腫瘤在胃體或者是在胃的其他部位，導(dǎo)致胃的消化功能受到影響。如果胃癌是位于賁門的地方，會牽拉胸骨后，出現(xiàn)一些異常。如果胃癌長在靠近幽門的地方，出現(xiàn)幽門梗阻，患者就會出現(xiàn)嘔吐的癥狀，這是胃癌的一些常見的不適。

在對高效、特異的抗癌腫瘤進(jìn)行誘導(dǎo)的過程中，樹突狀細(xì)胞（DCs）發(fā)揮著極為重要的作用。在胃癌預(yù)后的預(yù)測中，其實(shí)一個(gè)可靠指標(biāo)[5]。近年來，相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[6]，Hp感染會對胃黏膜DCs表達(dá)造成影響。但是目前，還較少有相關(guān)醫(yī)學(xué)研究報(bào)道胃癌患者外周血單核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞（MODCs）成熟及活化受到Hp的影響。相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者進(jìn)行了胃癌抗原致敏DCs聯(lián)合Hp抗胃癌免疫的實(shí)驗(yàn)[7-8]，結(jié)果表明，和Hp陰性胃癌患者相比，Hp陽性胃癌患者具有顯著較高的MODCs致敏的T細(xì)胞對癌細(xì)胞的殺傷率（28% vs 40%）。該研究結(jié)果表明，Hp陽性組CagA+菌株、CagA-菌株患者的外周血CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR表達(dá)率均顯著高于Hp陰性組（P<0.05），但CagA+菌株、CagA-菌株患者的外周血CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR表達(dá)率之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Hp陽性組患者的IFN-γ、IL-12濃度均顯著高于Hp陰性組（P<0.05），外周血MODCs致敏T細(xì)胞對胃癌細(xì)胞毒性殺傷率（40.4±7.0）%顯著高于Hp陰性組（29.7±6.2）%（P<0.05），和上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致，說明Hp感染一方面能夠?yàn)镸ODCs活化提供良好的前提條件，另一方面還能夠促進(jìn)其癌細(xì)胞殺傷作用的提升。

綜上所述，胃癌患者Hp感染會對外周血MODCs成熟及活化進(jìn)行刺激，促進(jìn)癌細(xì)胞殺傷作用的提升。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 魏小果，楊帆，高翔， 等.Hp感染與胃癌患者外周血中CK19和CK20表達(dá)的相關(guān)性研究[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2017， 24（8）：906-909.

[2]? 洪蓮蓮，魏麗君，陳香瀏， 等.實(shí)時(shí)熒光定量甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)定量檢測胃癌患者外周血原鈣黏蛋白10基因甲基化水平及意義[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2018，35（2）：337-340.

[3]? 王家乙，馬其輝，王菁菁.胃癌患者Hp感染對外周血MODCs成熟及活化的影響[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2017，29（2）：239-240， 277.

[4]? 徐秀連，謝平，呂其君， 等.LGR5蛋白在胃癌中的表達(dá)及其與臨床病理學(xué)特征關(guān)系的研究[J].世界臨床醫(yī)學(xué)，2017，11（23）：4-7.

[5]? 唐春麗，劉加寧，蘇峰， 等.血清PGE2及幽門螺桿菌治療對胃癌的早期診斷應(yīng)用研究[J].中國醫(yī)藥指南，2017，15（15）：148-149.

[6]? 曾釵明.調(diào)查分析老年人上消化道出血的病因和幽門螺桿菌感染[J].中外醫(yī)療，2015，34（25）：24-25.

[7]? 郭江濤，鄧靖宇，李鴻立， 等.晚期胃癌患者化療聯(lián)合曲妥珠單抗治療長期緩解一例[J].中華胃腸外科雜志，2017，20（10）：1197-1198.

[8]? 劉憲軍.胃巨大潰瘍型低分化腺癌追蹤23年一例[J].中國保健營養(yǎng)，2018，28（33）：114.

（收稿日期：2019-12-11）