酒炒葫蘆巴中葫蘆巴堿的含量測定

聶姍姍，付凌燕，孫立麗，聶垚

（1.吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132000；2.黑龍江大學研究生院，黑龍江 哈爾濱 150000）

0 引言

胡蘆巴為豆科植物胡蘆巴Trigonella foenumgraecum L.的干燥成熟種子。夏季果實成熟時采割植株，曬干，打下種子，除去雜質。性溫，味苦，歸腎經，具有溫腎，祛寒，止痛等功效[1].臨床主要用于腎臟虛冷，小腹冷痛，小腸疝氣，寒濕腳氣，是我國傳統的溫腎補陽藥物[4]。由于胡蘆巴生品質堅硬，不易破碎。酒炒后易于粉碎，利于有效成分溶出[5]，并且能增強溫腎作用。清·張仲巖《修事指南》云：“凡酒制升提。”故酒炒后其苦燥之性稍緩，增強有效成分的溶解度，溫腎作用增強[8]。

1 酒炒工藝的確定

1.1 凈制

將胡蘆巴置操作臺上，手工挑選、風選，去除雜質。

1.2 酒炒工藝研究

采用L9(34)正交試驗設計[2]，用小型炒藥鍋開展酒炒胡蘆巴炮制工藝優化研究，針對黃酒加入量、悶潤時間（h）、炒制時間（min）因素[10]，以浸出物含量和胡蘆巴堿的含量為評價指標，優選最佳炮制工藝。

按照L9(34)正交試驗進行實驗，根據響應面實驗設計軟件分析[7]，確定酒炒胡蘆巴最佳炮制工藝為A2B3C1,即：黃酒加入20%，悶潤6 小時，炒制40分鐘。

1.3 不同廠家黃酒選擇的研究

考察三個不同廠家的黃酒，一號黃酒（酒精度：10%）、二號黃酒（酒精度：15%）、三號黃酒（酒精度：10%）。

考察黃酒對炮制的影響，以最佳的炮制工藝方法進行試驗[3]，測定結果，見表1。

表1 不同廠家、不同濃度的黃酒測定結果表

實驗結果，一號黃酒胡蘆巴堿含量和浸出物均為三批中的最高值，所以選擇一號黃酒作為本次炮制用酒。

2 葫蘆巴有效成分含量測定研究

2.1 儀器與材料

高效液相色譜儀（Waters e2695），色譜柱：Apollo C18 柱，超聲波清洗器。

2.企業政工隊伍建設不到位。政工人員隊伍的建設是做好員工思想政治工作的關鍵，但由于企業的不重視，許多企業政工隊伍建設不完善，政工人員結構不合理，素質跟不上時代的發展是主要問題，許多政工人員在思維方式、教育思想等方面還比較落后，這就制約了思想政治工作效果的實現。例如當前許多企業的政工人員知識老化，教育思想和教育方式過于死板，缺乏心理、社會等多方面的綜合教育。

葫蘆巴堿對照品（純度78.4%，中國食品藥品檢定研究院，批號：110883-201604）。甲醇（色譜純），純凈水，冰醋酸（色譜純）。

2.2 含量測定結果

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.05%十二烷基磺酸鈉溶液-冰醋酸(20:80:0.1)為流動相；檢測波長為265 nm。理論板數按胡蘆巴堿峰計算應不低于4000。

2.2.2 對照品溶液的制備

取胡蘆巴堿對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL 含60 μg 的溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品粉末(過三號篩)約0.5g，精密稱定，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，放置1 小時，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)45 分鐘，放冷，密塞，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 HPLC 測定方法

2.3.1 葫蘆巴堿溶液的配制

精密稱取葫蘆巴堿對照品適量，制成濃度為47.18μg·mL-1的溶液。

2.3.2 線性關系考察

精密吸取“1.2.1”項下溶液，進樣量分別為0.0944、0.2359、0.4718、0.6605、0.8493、0.9436、1.4154 μg，得回歸方程Y=3E+6X-97213（R2=1），表明葫蘆巴堿在0.0944～1.4154μg 內呈線性關系。

2.3.3 精密度考察

取“2.2.1”項下的葫蘆巴堿對照品溶液，按照“2.2.1”項下的色譜條件重復進樣6 次，計算峰面積RSD 為0.7%。

2.3.4 重復性考察

制備6 份酒炒葫蘆巴炮制品，按“2.2.1”項下的供試品溶液進行制備，計算峰面積（A）的相對標準偏差（RSD）為1.2%。

2.3.5 穩定性考察

將同一份酒炒葫蘆巴供試品溶液在0、2、5、7、12 h 進行測定，按“1.1”項下制備供試品溶液，計算峰面積RSD 為1.773%，在12h 內此樣品穩定。

2.3.6 加樣回收率考察

稱取已知含量的酒炒葫蘆巴粉末9份，按照低、中、高（0.5:1，1:1，1.5:1）三個比例，按“2.2.1”項下制備供試品溶液，平均回收率為112.13%，RSD 為2.9%。

2.3.7 測定結果

生品葫蘆巴和酒炒葫蘆巴含量測定結果，見表2。

表2 生品葫蘆巴和酒炒葫蘆巴含量測定結果表

3 酒炒葫蘆巴中葫蘆巴堿含量測定結果與討論

3.1 結果

本文采用正交法確定酒炒葫蘆巴的炮制工藝，結果證明此炮制工藝簡單易行，工藝穩定，精密度及準確度高，重現性及穩定性好。并且HPLC 法能夠準確的測定葫蘆巴和酒炒葫蘆巴中葫蘆巴堿的含量，可以為以后的藥學研究及中藥炮制提供技術支持。

3.2 討論

本法采用藥典方法發現其有不足之處，十二烷基磺酸鈉雖然增大了葫蘆巴堿目標產物的保留，有利于目標峰較好的分離，但其易堵塞液相管路。并且對溫度（冷）比較敏感。研究發現炮制前后葫蘆巴堿含量略有降低，可能原因：炮制溫度超過葫蘆巴堿熔點后引起部分葫蘆巴堿分解。炮制溫度為影響化學成分的主要因素[9]，因此在炮制過程中控制炮制溫度，主要以性狀作為炮制指標[6]。