豬唾液檢測應(yīng)用研究進(jìn)展

楊曉培 趙靜 于菲菲

[摘 要] 唾液是一種重要的外分泌液體，是由多種來源的蛋白質(zhì)和其他分子組成的復(fù)雜混合物，可從中挖掘大量生物信息。唾液檢測以其無創(chuàng)、便捷的優(yōu)勢，成為比較熱門的人類醫(yī)學(xué)檢查方法，但在豬只飼養(yǎng)、運輸、屠宰過程中的應(yīng)用還不普遍。本文總結(jié)唾液檢測在豬只病毒性、細(xì)菌性疾病診斷以及養(yǎng)殖過程中動物福利的研究進(jìn)展，為進(jìn)一步研究提供思路。

[關(guān)鍵詞] 豬唾液檢測;疾病診斷;動物福利

[中圖分類號] S858.28 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-7909（2020）12-111-2

1 唾液概述

唾液是由超過99%的水組成的稀溶液構(gòu)成，內(nèi)含多種電解質(zhì)、蛋白質(zhì)、酶、黏液和含氮化合物[1]。Bandhakavi等發(fā)現(xiàn)，人唾液中約20%蛋白質(zhì)存在于血漿中，且唾液在一定程度上能反映血清或口腔中的激素、藥物、抗體、病毒及其他成分的濃度，表明唾液作為一種生物液體的重要性和潛力[2]。

2 唾液檢測優(yōu)勢

目前，使用唾液作為診斷介質(zhì)已可以用來監(jiān)測部分人類疾病，監(jiān)測豬的全身健康和評估系統(tǒng)性疾病的體系還未形成，多數(shù)仍停留在實驗室研究階段。

豬的唾液檢測方法是利用其好奇心理和嗜好咀嚼的特性，采用紗布球采集唾液，在動物常用檢測方式中優(yōu)勢明顯。由于豬只皮下脂肪組織豐富，樣本采集有技術(shù)要求，唾液樣本可以由非技術(shù)人員操作獲取，減少人力成本;無創(chuàng)采集的方式減少豬只應(yīng)激反應(yīng)，真實反映豬只平息狀態(tài)下的生理情況，也使得重復(fù)試驗操作便捷、高效;能減少有創(chuàng)采樣過程中可能造成的感染，監(jiān)測方式更加安全。

3 唾液檢測在豬疾病診斷中的研究進(jìn)展

豬唾液中富含的生物信息使得唾液檢測可用于免疫后抗體檢測、疾病早期診斷、治療效果判斷等。同血清檢測方式相比，除了有采集便捷的優(yōu)勢外，唾液中分泌性抗體產(chǎn)生速度快、穩(wěn)定性高，而且有對抗原的主動捕捉能力[3]，應(yīng)用前景好。

3.1 細(xì)菌性疾病

唾液中可以檢測到葡萄球菌、幽門螺旋桿菌、枯草芽孢桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、乳球菌和乳酸菌等細(xì)菌、豬鏈球菌和副鏈球菌等[4-6]，以唾液樣本檢測為手段，通過PCR、ELISA手段或者檢測特異性抗體來評估細(xì)菌感染和定植情況。例如，Sakura等通過采集4個養(yǎng)殖場不同生長階段的84頭健康豬的唾液、糞便和陰道拭子樣本，了解養(yǎng)豬場豬鏈球菌和副鏈球菌的定殖情況，確定感染源[5]。Bosi則通過檢測血樣和唾液樣本中大腸桿菌鞭毛特異性的IgA，發(fā)現(xiàn)喂食噴霧干燥血漿可以改善豬只生長性能，并減弱大腸桿菌誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[6]。

3.2 病毒性疾病

唾液中可直接檢測到的病毒包括非洲豬瘟病毒（ASFV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PPRSV）、豬口蹄疫病毒（FMDV）、偽狂犬病毒（PRV）、豬副流感病毒、豬圓環(huán)病毒和星狀病毒等，也可通過檢測抗體判斷豬是否被病毒感染[3，4，7，8]。

在非洲豬瘟的檢測和防控中，唾液檢測成為最普遍的檢測方式。除采樣優(yōu)勢外，唾液中的病毒出現(xiàn)較血液早2～5 d，更利于ASFV的早期診斷[7]。在血清和唾液中的抗體水平比較試驗中，侯亞琴等選取種公豬、母豬、育肥豬成年豬，通過正向間接血凝試驗檢測CSFV、FMDV抗體，結(jié)果表明豬血清和唾液中抗體水平有高度相關(guān)性[3]。而位玉玲則建立了唾液中豬PRV的qRT-PCR方法和唾液中豬PRV抗體間接ELISA的方法，得知血清和唾液中抗體消長規(guī)律基本一致，但由于疾病發(fā)展第一階段是在口腔、鼻黏膜增殖，因此在第一階段唾液與血清中的PRV量稍有偏差[8]。

4 唾液檢測在動物福利評估中的應(yīng)用

近年來，我國開始逐漸重視動物福利問題，不僅是因為肉類制品品質(zhì)問題遭到出口國家抵制，更是因為動物福利影響動物生產(chǎn)性能、內(nèi)分泌、免疫功能、肉類品質(zhì)。

Damian等在豬唾液蛋白組學(xué)研究中檢測到353個蛋白，通過給予刺激后發(fā)現(xiàn)，有44個蛋白發(fā)生顯著性改變，無論是受到長期的跛行困擾還是在捕捉時受到短期刺激，均影響唾液中蛋白質(zhì)的表達(dá)[9]。近年來，相關(guān)學(xué)者在不斷探索新的蛋白標(biāo)志物評估豬的應(yīng)激狀況。例如，Escribano等通過檢測唾液睪酮濃度發(fā)現(xiàn)豬只批內(nèi)、批間變異系數(shù)低，而且不同采樣時間、不同年齡無顯著差異;通過鼻套圈和短途運輸應(yīng)激分析生長豬唾液睪酮量，結(jié)果表明唾液睪酮量顯著上升，唾液睪酮水平可以作為豬急性應(yīng)激的一個可能的標(biāo)記物[10]。Muneta等首次證明了IgA在豬唾液中的表達(dá)與應(yīng)激相關(guān)，通過免疫組化染色證實IgA在豬唾液腺漿細(xì)胞中表達(dá)，通過ELISA檢測到豬唾液中的IgA，并且抑制應(yīng)激將使唾液中的IgA水平升高[11]。此外，Camila等發(fā)現(xiàn)血液樣本檢測動物應(yīng)激狀態(tài)的方法也可通過唾液檢測實現(xiàn)，母豬泌乳期唾液檢測總抗氧化能力、當(dāng)量抗氧化能力、銅還原抗氧化能力、鐵還原能力、血漿、尿酸以及氧化蛋白產(chǎn)物和過氧化氫的含量有效可靠[12]。

5 討論

唾液中存在2種分泌型抗體，其中IgG滴度總體較血液中偏低，但總體趨勢一致，IgA還可用于檢測非全身性感染性疾病，檢測范圍廣;該方法采樣容易，符合大批量檢測要求。但唾液采集易受到環(huán)境因素如養(yǎng)殖環(huán)境中存在的細(xì)菌等影響，同時檢測靈敏度較血液檢測偏低，需不斷優(yōu)化檢測標(biāo)記物、指標(biāo)值，繼續(xù)挖掘靈敏度高的標(biāo)記物，才能充分發(fā)揮唾液樣品的潛在診斷價值。

參考文獻(xiàn)

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[12]Camila Peres Rubio，Eva Mainau，José Joaquín Cerón，et al. Biomarkers of oxidative stress in saliva in pigs：analytical validation and changes in lactation[J].BMC Veterinary Research，2019（1）：144.