細(xì)胞因子在川崎病中的臨床意義

胡具雄 盧一斌 馬效東 肖輝 汪偉

川崎病是一種全身血管炎為主的病變綜合征，其臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、手足硬性水腫、皮疹等，累及心臟者易引發(fā)心肌炎、心包炎、心律失常等，嚴(yán)重危害患者的健康[1-2]。該病多發(fā)于5歲以下嬰幼兒，成年人或3個(gè)月以下小兒極為少見[3]。近年來隨著醫(yī)療技術(shù)的快速發(fā)展，臨床上對(duì)川崎病的發(fā)病機(jī)制也逐漸清晰：可能以病毒、細(xì)菌為超抗原介導(dǎo)，引起機(jī)體免疫功能紊亂，激活免疫活化細(xì)胞并產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，發(fā)生細(xì)胞因子風(fēng)暴反應(yīng)，造成內(nèi)皮細(xì)胞及其他細(xì)胞損傷，最終引發(fā)免疫性血管炎[4-5]。據(jù)此，筆者檢測(cè)了川崎病患兒血清中的細(xì)胞因子，并與普通發(fā)熱患兒及體檢兒童進(jìn)行了對(duì)照，以進(jìn)一步探討細(xì)胞因子在川崎病中的臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2017年6月至2018年12月杭州市余杭區(qū)第三人民醫(yī)院收治的50例川崎病患兒為川崎病組，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合諸福棠實(shí)用兒科學(xué)第8版[6]；（2）未接受免疫治療；（3）年齡＜10歲；（4）患兒及家屬知情，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有麻疹、敗血癥、特發(fā)性關(guān)節(jié)炎；（2）合并其他自身免疫系統(tǒng)疾病。其中男32例，女18例；年齡8個(gè)月～8歲，平均（3.26±1.33）歲。選取同院同期收治的50例普通發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大的非川崎病感染發(fā)熱患兒為感染發(fā)熱組，其中男30例，女20例；年齡6個(gè)月～9歲，平均（3.36±1.57）歲。同期健康體檢的50例兒童為健康對(duì)照組，其中男31例，女19例；年齡6個(gè)月～8歲，平均（3.57±1.32）歲。3組兒童性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究經(jīng)杭州市余杭區(qū)第三人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審查通過。

1.2 方法 清晨采集3組兒童空腹靜脈血5ml，置于肝素抗凝管中，放在-70℃冰箱保存待測(cè)。其中川崎病患兒又在急性期（發(fā)病第1～11天）、亞急性期（發(fā)病第11～21天）及恢復(fù)期（發(fā)病第21～60天）各采集1次。

1.2.1 外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 采用流式細(xì)胞術(shù)。取抗凝血100μl，分別加入單克隆抗體FITC CD4、PE CD8及ProcP CD3各20μl，避光處理，磷酸緩沖鹽溶液洗滌2次；棄上清液，加入1%多聚甲醛，在流式細(xì)胞儀上完成樣品 T 淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD4+/CD8+）檢測(cè)。

1.2.2 血清炎癥細(xì)胞因子及其他指標(biāo)檢測(cè) 白細(xì)胞介素 6（IL-6）、腫瘤壞死因子 α（TNF-α）、干擾素 γ（IFN-γ）、巨噬細(xì)胞遷移抑制因子（MIF）檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法，血清C反應(yīng)蛋白（CRP）檢測(cè)采用免疫比濁法，紅細(xì)胞沉降率（ESR）檢測(cè)采用經(jīng)典魏氏法。使用北方邦定泰克生物技術(shù)公司生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)血清IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF水平，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。使用美國(guó)貝克曼AU2700型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定CRP、ESR水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組對(duì)象外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較 川崎病組CD4+、CD4+/CD8+水平明顯高于感染發(fā)熱組、健康對(duì)照組，而CD3+水平低于感染發(fā)熱組、健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 3組對(duì)象外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較

2.2 川崎病患兒不同病期T淋巴細(xì)胞亞群變化 川崎病患兒急性期CD4+、CD4+/CD8+水平明顯高于亞急性期和恢復(fù)期，CD3+水平明顯低于亞急性期和恢復(fù)期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；亞急性期CD4+、CD4+/CD8+水平明顯高于恢復(fù)期，CD3+水平明顯低于恢復(fù)期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表2 川崎病患兒不同病期T淋巴細(xì)胞亞群變化

2.3 3組兒童血清炎癥細(xì)胞因子及其他指標(biāo)比較 川崎病組 IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF、CRP、ESR 水平明顯高于感染發(fā)熱組、健康對(duì)照組，感染發(fā)熱組IL-6、IFN-γ、MIF、CRP、ESR水平明顯高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

2.4 川崎病患兒不同病期血清炎癥細(xì)胞因子及其他指標(biāo)變化 川崎病患兒急性期IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF、CRP、ESR水平明顯高于亞急性期和恢復(fù)期，而亞急性期又明顯高于恢復(fù)期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表4。

3 討論

近年來，我國(guó)川崎病發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)。川崎病會(huì)導(dǎo)致患兒冠狀動(dòng)脈損害發(fā)生率明顯增加，是引發(fā)后天性心臟病的主要因素之一。但目前尚未明確川崎病的發(fā)病機(jī)制，也無特異性檢測(cè)手段[7-8]。

T淋巴細(xì)胞作為機(jī)體免疫功能系統(tǒng)的重要組成部分，是反映機(jī)體免疫功能及狀態(tài)的重要指標(biāo)，當(dāng)T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量及狀態(tài)發(fā)生變化或異常時(shí)，說明機(jī)體免疫功能可能發(fā)生紊亂并出現(xiàn)病理變化[9-10]。本研究結(jié)果顯示，川崎病組T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+、CD4+/CD8+）水平明顯高于健康對(duì)照組、感染發(fā)熱組，且急性期上述指標(biāo)均高于亞急性期和恢復(fù)期，亞急性期又明顯高于恢復(fù)期。鄭麗君等[10]研究表明，川崎病患兒外周血CD4+、CD4+/CD8+水平呈明顯升高而CD3+呈下降的趨勢(shì)，其免疫抑制功能出現(xiàn)紊亂，免疫耐受失衡，CD4+T淋巴細(xì)胞出現(xiàn)亢奮，并參與川崎病的發(fā)病過程。Rowley等[11]研究也證實(shí)，川崎病急性期患兒外周血T淋巴細(xì)胞處于功能異常狀態(tài)，疾病的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞免疫功能異常密切相關(guān)，表現(xiàn)為CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞細(xì)胞數(shù)異常。可見，川崎病患兒T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)失衡會(huì)造成免疫系統(tǒng)紊亂，且病情越嚴(yán)重則表現(xiàn)得更明顯，急性期T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD4+/CD8+水平明顯升高，使機(jī)體免疫系統(tǒng)處于激活狀態(tài)，極易引發(fā)血管炎、免疫功能損傷及冠狀動(dòng)脈損傷。

表3 3組兒童血清炎癥細(xì)胞因子及其他指標(biāo)比較

表4 川崎病患兒不同病期血清炎癥細(xì)胞因子及其他指標(biāo)變化

炎癥細(xì)胞因子能進(jìn)一步引發(fā)免疫反應(yīng)增強(qiáng)。在川崎病患兒急性期，T淋巴細(xì)胞異常活躍，免疫功能處于被激活狀態(tài)，能激活B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量炎癥細(xì)胞因子；而細(xì)胞因子風(fēng)暴可進(jìn)一步引發(fā)下游分子的過度表達(dá)，使得機(jī)體產(chǎn)生系列反應(yīng)，對(duì)免疫應(yīng)答及冠狀動(dòng)脈極為不利[12-13]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，川崎病組IL-6、TNF-α、IFN-γ、CRP、ESR、MIF 水平均明顯高于感染發(fā)熱組、健康對(duì)照組，且急性期上述指標(biāo)均明顯高于亞急性期和恢復(fù)期，亞急性期又明顯高于恢復(fù)期。這提示IL-6、TNF-α、IFN-γ、CRP、ESR、MIF參與川崎病的病情發(fā)展。IL-6是炎癥細(xì)胞因子，能刺激免疫應(yīng)答導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，其過度表達(dá)能促使輔助性T細(xì)胞17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞失衡，加快免疫功能系統(tǒng)紊亂，使川崎病患兒產(chǎn)生免疫球蛋白耐藥及系列血管炎反應(yīng)[14]。研究表明，CRP、ESR與川崎病患兒炎癥程度呈正相關(guān)，被用于川崎病急性期的評(píng)估；美國(guó)心臟協(xié)會(huì)也推薦CRP、ESR作為川崎病診斷與評(píng)估的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，以及不完全川崎病的參考診斷指標(biāo)[15-16]。Rasouli等[17]研究表明，川崎病患兒急性期血清炎癥因子水平呈上升趨勢(shì)，經(jīng)阿司匹林、靜脈免疫球蛋白治療后，T淋巴細(xì)胞亞群及炎癥細(xì)胞因子水平均明顯下降。IL-6、TNF-α、IFN-γ、CRP、ESR、MIF 參與川崎病的發(fā)生、發(fā)展，可作為川崎病病情評(píng)估的重要指標(biāo)。

綜上所述，川崎病患兒存在T淋巴細(xì)胞亞群失衡與炎癥反應(yīng)，臨床表現(xiàn)為CD4+、CD4+/CD8+、IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF、CRP、ESR水平升高，且隨病情進(jìn)展而不斷上升。炎癥細(xì)胞因子結(jié)合T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)，能輔助評(píng)估川崎病的病情進(jìn)展及治療效果。