IL-10和IL-17在ITP臨床治療中的研究

朱東來　王婷　陸靜　邵江波

【摘要】目的：研究白細胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）和白細胞介素-17（Interleukin-17，IL-17）在免疫性血小板減少癥（Immune thrombocytopenia，ITP）治療前后的血清表達水平，為ITP治療提供理論依據。方法：采取酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測30例原發性ITP患者治療前后血清IL-10和IL-17表達水平。進一步按照患者體重指數BMI進行分組，分析BMI正常組和超重組IL-10和IL-17表達水平的差異。結果 BMI正常組和超重組IL-10和IL-17表達水平均無明顯差異。ITP患者有效治療后的血清IL-17的表達水平較未治療時顯著降低（P<0.05），IL-10無明顯差異。結論：IL-17表達水平的增高可能參與了ITP的發病， IL-17水平對ITP患者臨床治療有一定指導意義。

關鍵詞：白細胞介素-10;白細胞介素-17;免疫性血小板減少癥

Abstract： Objective To investigate the expression of interleukin-10 （IL-10） and interleukin-17 （IL-17） before and after the treatment of immune thrombocytopenia （ITP）， which would provide a theoretical basis for the treatment of ITP. Methods The expressions of IL-10 and IL-17 of 30 ITP patients before and after treatment were detected by ELISA. Then they were divided into two groups according to BMI. One group is normal BMI and another is overweight BMI. The relationship between BMI and the expression of IL-10 and IL-17 were analyzed. Results There were both no statistically significant differences of the expression of IL-10 and IL-17 in normal BMI group and overweight BMI group （P>0.05）.The average expression level of serum IL-17 in effective treated ITP patients was significantly lower than that in the untreated group （P<0.05）， but there was no significant difference in IL-10 （P>0.05）. Conclusion Abnormal expression of serum IL-17 is involved in the pathogenesis of ITP， and IL-17 levels are significantly decreased after treatment is effective. Therefore， IL-17 has certain guiding significance in the treatment of ITP patients.

Key words：Interleukin-10; Interleukin-17; Immune thrombocytopenia

免疫性血小板減少癥（Immune thrombocytopenia，ITP）為免疫介導的臨床出血性疾病，以骨髓中巨核細胞發育障礙、血小板數量減少、廣泛的皮膚黏膜及內臟出血、出血時間延長和血塊收縮不良為主要特征。ITP是一種復雜的自身免疫性疾病，外周血血小板計數通常小于100×109/L。自身抗體致敏的血小板被單核巨噬細胞系統吞噬破壞是ITP發病的主要機制。Cines等人發現ITP的免疫耐受缺陷主要分為三類，包括：（1）在免疫刺激時產生的外周免疫耐受缺陷;（2）B細胞的分化缺陷;（3）中樞耐受缺陷。外周免疫耐受性喪失而引起的ITP更易于治療，并且在治療后復發的可能性較小，而中樞免疫耐受性的缺陷會影響多種細胞類型，且接受治療的患者更容易復發。雖然抗血小板糖蛋白抗體（HPA）的存在傳統上被認為起著核心作用，近年來細胞因子紊亂在ITP中的作用逐漸得到了研究者們的關注。為了揭示相關炎癥因子在疾病發生發展過程中的作用，本研究采用ELISA方法檢測30例原發性ITP患者治療前和治療有效后的IL-10和IL-17表達水平，為ITP治療提供理論依據。

1.資料與方法

1.1一般資料

選取我院2019年1月至2019年8月30例原發性ITP，納入標準：ITP患者符合2013年ITP疾病診治建議：（1）正常血細胞形態，血小板計數小于100×109/L;（2）全身皮膚有瘀點/瘀斑、出血點或臟器出血和黏膜等情況;（3）一般脾臟無增大;（4）骨髓常規可見巨核細胞計數正常或增多，有成熟障礙， 以顆粒巨核細胞增生為主;（5）本研究經醫學倫理委員會批準，所有患者或家屬均自愿簽署知情同意書。排除標準：（1）系統性紅斑狼瘡患者;（2）遺傳性血小板減少癥或以血小板計數減少為主要表現的再生障礙性貧血患者;（3）低增生性白血病者;（4）其他自身免疫性疾病患者。

1.2 儀器和方法

（1）儀器：全自動血液分析儀。（2）試劑：人白介素10試劑盒，人白介素17試劑盒。（3）采集血液樣本：ITP患者剛入院時空腹抽靜脈血2mL，治療好轉后空腹抽靜脈血2mL，肝素抗凝，12000rpm離心2min，分離血清標記好后保存于-20℃待檢。（4）收集好標本后通過ELISA法檢測IL-10和IL-17水平。（5）統計學分析：正態分布資料采用平均數±標準差（X±S）表示，采用配對T檢驗比較治療前后兩組IL-10和IL-17的差異，p<0.05為有統計學意義。采用獨立樣本t檢驗比較BMI正常組和超重組IL-10和IL-17表達差異，以p<0.05為有統計學意義。

1.3觀察指標與評價標準

對每位研究對象記錄性別、年齡、BMI、血小板數量、入院時IL-10、IL-17的表達水平，治療有效后血清IL-10和IL-17的表達水平。按相關標準，治療有效為無出血，治療后血小板計數大于30×109/L，增加兩倍基礎血小板計數;ITP療效判斷需行2次檢測，2次間隔7天及以上。

2.結果

2.1 ITP患者一般情況

30例原發性ITP并行HPA檢測的患者中男14例，女16例;年齡6歲-60歲。

2.2 ITP患者不同體重指數IL-10和IL-17水平比較

根據體重指數不同分為BMI正常和超重組，其中BMI正常組13例，超重組17例。采用兩獨立樣本t檢驗對兩個體重組的IL-10和IL-17進行比較。不同BMI組IL-10和IL-17表達水平比較，BMI正常組和BMI超重組比較IL-10和IL-17表達水平比較差異無統計學意義（P>0.05）。詳見表1。

2.3 ITP患者治療前后IL-10和IL-17水平比較

采用配對t檢驗進行治療前和治療有效后的IL-10和IL-17血清表達水平的比較，治療有效后IL-10表達水平與治療前差異無統計學意義（P>0.05）。治療有效后IL-17表達水平與治療前差異有統計學意義（P<0.05）。詳見表2。

2.4 ITP患者治療前血小板數量與IL-10和IL-17水平相關性分析

采用SPSS雙變量相關性分析血小板數量與IL-10表達水平的相關性，兩組相關系數為-0.9，P=0.636，認為兩組無相關性;分析血小板數量與IL-17表達水平的相關性，兩組相關系數為-1.42，P=0.453，認為兩組無相關性。

3.討論

白細胞介素、集落刺激因子、干擾素、腫瘤壞死因子、轉化生長因子-b、生長因子和趨化因子等都屬于細胞因子，其中白細胞介素由淋巴細胞、單核細胞或其它非單個核細胞產生，在細胞間的相互作用、免疫調節、造血以及炎癥過程中起重要調節作用。

IL-10是一種多細胞源、多功能的細胞因子，是目前公認的炎癥與免疫抑制因子。它與其受體結合后可以抑制Th1細胞分泌IL-2、IL-3、干擾素和集落刺激因子，同時可以抑制自然殺傷細胞的活性，干擾巨噬細胞產生細胞因子等。研究發現IL-10與多種自身免疫病密切相關，例如系統性紅斑狼瘡，銀屑病，皮肌炎和類風濕性關節炎等。研究證明IL-10在系統性紅斑狼瘡病人血清中明顯升高，且與抗核小體抗體呈正相關，與疾病活動性有關。因此我們推測IL-10可能在ITP中也有相似的變化。Talaat RM通過對35名ITP患者和15名健康志愿者對比研究發現，IL-10在ITP患者中水平明顯升高。Tesse R等對IL-10基因啟動子區三個位點的基因多態性（-1082 （A/G），-819 （C/T） 和 -592 （C/A））進行研究發現GCC基因型的ITP患者表達更高水平的IL-10，且92%的GCC型ITP為急性病程。本研究雖然沒有做疾病組與正常組的對比研究，而是將ITP患者治療前和治療有效后的IL-10表達水平做對比研究，發現ITP患者治療前后IL-10無明顯變化，這可能與樣本數較少有關。

Th17細胞是CD4+T細胞的一種亞型，主要分泌IL-17，IL-17 是一種致炎細胞因子，可以促進T 細胞的激活和刺激上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞產生多種細胞因子如IL-6、IL-8、粒細胞-巨噬細胞刺激因子（GM-CSF）及細胞黏附分子1（cellular adhesion molecule 1，CAM-1），從而導致炎癥的產生。大量研究表明，IL-17與實驗性自身免疫性腦炎（EAE）、哮喘、類風濕性關節炎（RA）等自身免疫性疾病明顯相關。因此我們推測IL-17有可能在ITP的發生發展中起著重要作用。有研究對30例ITP患者進行IL-17檢測，發現治療前后IL-17無明顯變化，Zhou ZJ等對54例ITP患者和40例健康對照進行Th17和IL-17檢測，發現ITP患者Th17和IL-17均明顯升高。Qian C等對45?ITP患者和30例健康對照者進行IL-17檢測，發現ITP患者IL-17明顯升高，且IL-17水平與血小板數量負相關。本實驗中IL-17在ITP患者治療有效后明顯低于治療前，但是和血小板數量無相關性，提示IL-17與ITP發生密切相關。各研究之間結果的矛盾這可能是由于樣本數量較少，從而影響了結果的可信度。

4.結語

綜上所述，免疫激活和耐受平衡的打破在ITP的發生中扮演著重要的作用，細胞因子的變化較好的反應了機體免疫功能的變化。本研究中IL-10在ITP治療前后無明顯變化，而IL-17在ITP治療有效后出現了明顯的下降，反映了機體炎癥得到一定程度的抑制，故對IL-17的檢測在反映ITP的治療效果方面具有重要的臨床價值。

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【作者簡介】朱東來（1976.05-），男，漢族，江蘇省鎮江市人，本科學歷，鎮江市第三人民醫院主管檢驗師，主要研究方向：臨床檢驗學。