羊胎盤(pán)凍干粉片對(duì)小鼠免疫的影響

董淑蕓　張世洋

[摘要]目的?探討羊胎盤(pán)凍干粉片對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法?將200只KM小鼠隨機(jī)分為5個(gè)免疫組，每個(gè)免疫群組40只。設(shè)羊胎盤(pán)凍干粉片低、中、高劑量組分別為[0.3、0.6、1.8g/（kg·BW）]和陰性對(duì)照組，每組10只動(dòng)物。 按0.2 ml/100g的體積經(jīng)口給予小鼠灌胃，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30天后，進(jìn)行各項(xiàng)免疫指標(biāo)的測(cè)定。 結(jié)果?羊胎盤(pán)凍干粉片劑量組與陰性對(duì)照組比較能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化作用（P<0.05），促進(jìn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（P<0.05），促進(jìn)小鼠的抗體生成細(xì)胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平（P<0.05），增強(qiáng)小鼠的單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力（P<0.05），對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性則無(wú)明顯影響（P>0.05）。結(jié)論 羊胎盤(pán)凍干粉片具有增強(qiáng)小鼠免疫力功能的作用。

[關(guān)鍵詞]?羊胎盤(pán)凍干粉;枸杞子提取物;維生素C;小鼠;免疫、NK

羊胎盤(pán)是由羊的子宮粘膜和尿囊絨毛膜發(fā)生聯(lián)系所形成，它是在母羊孕育胎兒時(shí)，胎兒血液和母體進(jìn)行養(yǎng)分交換的組織。胎盤(pán)中含有多種活性物質(zhì)以及豐富的營(yíng)養(yǎng)成分[1]。徐桂花[2-3]等對(duì)羊胎盤(pán)進(jìn)行化學(xué)成分分離提取后進(jìn)行定量分析發(fā)現(xiàn)，羊胎盤(pán)中具有高含量的谷氨酸，約占氨基酸總量的16.07%，精氨酸約占氨基酸總量的13.988%?除谷氨酸，精氨酸外，還含有14種常見(jiàn)氨基酸，其中8種為必需氨基酸，約占氨基酸總量的33.50%。文獻(xiàn)論證[4-5]谷氨酸，精氨酸可有效的促進(jìn)細(xì)胞免疫功能，體液免疫功能.

枸杞子甘，性平。主要?dú)w肝、腎、肺經(jīng)。為滋陰助陽(yáng)，益精補(bǔ)血之良藥。其化學(xué)成分主要含胡蘿卜素、硫胺素、核黃素、煙酸、抗壞血酸、β-谷甾醇、及微量元素等。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)通過(guò)大量藥理實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)明，枸杞其主要活性成份枸杞多糖（Lycicum barbarum polysaccbarides，LBP）具有顯著增強(qiáng)免疫功能[6-7]、保肝功能，抗衰老功能及抗疲勞等藥理作用[8]。

維生素 C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫 L-抗壞血酸，是人體必需的微量營(yíng)養(yǎng)元素之一，它具有抗氧化、參與合成膠原蛋白、治療和預(yù)防壞血病、預(yù)防動(dòng)脈硬化、治療貧血、防癌等多種生理學(xué)功能。除此之外，維生素C還能促進(jìn)機(jī)體內(nèi)抗體的形成，提高白細(xì)胞的吞噬能力和對(duì)疾病的抵抗力以及對(duì)寒冷的耐受力，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能[9-10]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)灌胃小鼠方式，觀察羊胎盤(pán)凍干粉片對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用。羊胎盤(pán)凍干粉片由羊胎盤(pán)凍干粉、枸杞子提取物和維生素C原料制成。

材料與方法

1.1 受試物?實(shí)驗(yàn)室自制，以羊胎盤(pán)凍干粉、枸杞子提取物、維生素C原料制成。每片含羊胎盤(pán)凍干粉片250mg、枸杞子提取物30mg、維生素C?10mg，規(guī)格0.6g/片。推薦成人每日口服6片。

1.2 動(dòng)物?采用健康清潔級(jí)KM種小鼠200只，雄性，體重18～22g，SPF級(jí)，廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3 主要儀器與試劑?酶標(biāo)儀、電子分析天平、二氧化碳培養(yǎng)箱、半自動(dòng)生化分析儀、顯微鏡等。MTT、RPMI1640培養(yǎng)液、、綿羊紅細(xì)胞、等。

1.4分組及劑量?先將動(dòng)物隨機(jī)分組，每40只小鼠為1個(gè)免疫組，共5個(gè)免疫組。每個(gè)免疫群組設(shè)羊胎盤(pán)凍干粉片低、中、高劑量組分別為[0.3、0.6、1.8g/（kg·BW）]和陰性對(duì)照組，每組10只小鼠。動(dòng)物灌胃按0.2ml/100g體積給予，對(duì)照組給予等體積純水。每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30d。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法 采用MTT法檢測(cè)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力和耳腫脹法檢測(cè)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)兩項(xiàng)細(xì)胞免疫功能檢測(cè);采用Jerne改良玻片法檢測(cè)抗體生成細(xì)胞數(shù)和血凝法檢測(cè)血清溶血素水平兩項(xiàng)體液免疫功能檢測(cè);采用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（半體內(nèi)法）和小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)兩項(xiàng)單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè);NK細(xì)胞活性檢測(cè)采用乳酸脫氫酶測(cè)定法。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 受試物對(duì)小鼠體重和臟器/體重比值的影響?受試物各劑量組的小鼠末期體重、體重增重、胸腺/體重及脾臟/體重比值與陰性對(duì)照組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示受試物對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)和免疫器官重量無(wú)明顯影響。

2.2 受試物對(duì)小鼠細(xì)胞免疫的影響 小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力實(shí)驗(yàn)中，中劑量組的增殖能力[（Dλ）差值]與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，中、高劑量組的左右耳片重量差值與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.3 受試物對(duì)小鼠體液免疫的影響?抗體生成細(xì)胞數(shù)檢測(cè)中，中、高劑量組的溶血空斑數(shù)與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血清溶血素水平檢測(cè)中，中、高劑量組的溶血素抗體積數(shù)與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P<0.05）。（表1）

2.4 受試物對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響?吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，各劑量組小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)均高于陰性對(duì)照組，其中高劑量組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)中，低、中劑量組的碳廓清吞噬指數(shù)與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）（表2）。

2.5 受試物對(duì)小鼠 NK 細(xì)胞活性的影響?受試物各劑量組的NK細(xì)胞活性高于陰性對(duì)照組，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

3討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，羊胎盤(pán)凍干粉片劑量組與陰性對(duì)照組比較能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化作用（P<0.05），促進(jìn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（P<0.05），促進(jìn)小鼠的抗體生成細(xì)胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平（P<0.05），增強(qiáng)小鼠的單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力（P<0.05），對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性則無(wú)明顯影響（P>0.05）。表明羊胎盤(pán)凍干粉片具有增強(qiáng)小鼠免疫力的作用。

引用文獻(xiàn)：

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