淫羊藿提取物對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度和骨代謝的影響

柴安芳　畢盼盼　安宇佳

摘要：目的 探討淫羊藿提取物對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝的影響。方法 建立去勢(shì)模型，將雌性大鼠隨機(jī)分為5組， 其中假手術(shù)組和去卵巢對(duì)照組給予相應(yīng)等體積去離子水，劑量組分別給予不同劑量淫羊藿提取物（20.8mg/kg.bw、41.6mg/kg.bw、125mg/kg.bw）;灌胃3個(gè)月后處死，測(cè)量股骨重量、骨密度、骨鈣含量。結(jié)果 經(jīng)口給予大鼠不同劑量的淫羊藿提取物樣品三個(gè)月后，模型成立前提下，與去卵巢對(duì)照組大鼠相比，去卵巢高劑量組大鼠股骨鈣含量顯著增加（P<0.01）;中、高劑量組大鼠股骨中點(diǎn)骨密度和股骨遠(yuǎn)心端骨密度均顯著增加（P<0.05，P<0.01）。結(jié)論 單味淫羊藿提取物有增加大鼠骨密度作用，提示淫羊藿提取物可以預(yù)防絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。

關(guān)鍵詞：動(dòng)物實(shí)驗(yàn);淫羊藿;骨密度;骨質(zhì)疏松

骨質(zhì)疏松癥（ Osteoporosis， OP） 是老年人的一種常見病， 已嚴(yán)重危害著老年人的身體健康。以骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)破壞， 導(dǎo)致骨脆性增加、容易發(fā)生骨折為特征。中草藥治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥已成為國內(nèi)醫(yī)學(xué)界的研究熱點(diǎn)。 淫羊藿為小檗科植物淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿或朝鮮淫羊藿的干燥葉。《中華人民共和國藥典》記載辛、甘，溫。歸肝、腎經(jīng)。具有補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕的功效，主要有效成分之一是淫羊藿苷[1] 。

本試驗(yàn)建立去勢(shì)雌性大鼠動(dòng)物模型， 探究淫羊藿提取物預(yù)防骨質(zhì)疏松作用，結(jié)果報(bào)道如下。

1材料和方法

1.1 樣品：淫羊藿提取物，棕色粉末。含淫羊藿苷5%。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)健康Wistar雌性大鼠。體重300g左右。實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度22℃±2℃，相對(duì)濕度50%±10%。

1.3飼料配方：按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》2003年版推薦配方進(jìn)行飼料配制。

1.4 主要儀器與試劑：動(dòng)物解剖器械、動(dòng)物天平、雙能X線骨密度測(cè)量儀、烘箱。碳酸鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液、氫氧化鉀、EDTA溶液等。

1.5實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 卵巢切除術(shù)及術(shù)后飼養(yǎng)：

大鼠經(jīng)30mg/kg.bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉溶液，待麻醉完全后切除雙側(cè)卵巢，術(shù)后連續(xù)3d肌注2萬U青霉素。假手術(shù)對(duì)照組大鼠操作同上，但不結(jié)扎輸卵管、不剪除卵巢。手術(shù)后觀察7天，之后以灌胃方式分別給予各組大鼠相應(yīng)受試物和溶劑。給各組大鼠飼喂配制飼料，自由飲去離子水。

1.5.2劑量設(shè)置與受試物給予方式 ??雌性大鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，按體重將其隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組、去卵巢對(duì)照組、去卵巢低劑量組、去卵巢中劑量組、去卵巢高劑量組。淫羊藿提取物各劑量組大鼠每日食用量分別為20.8mg/kg.bw、41.6mg/kg.bw、125mg/kg.bw。經(jīng)灌胃每日一次給予大鼠相應(yīng)受試物，灌胃體積均按1mL/100g.bw計(jì)。去卵巢對(duì)照組和假手術(shù)對(duì)照組給予等體積去離子水灌胃。連續(xù)給予受試物3個(gè)月后測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。

1.5.3體重測(cè)定：每周測(cè)定大鼠體重一次，并據(jù)此調(diào)整灌胃量。

1.5.4骨鈣含量測(cè)定：大鼠喂養(yǎng)3個(gè)月后處死，剝離出左、右側(cè)股骨。取右側(cè)股骨于105℃烤箱中烤至恒重，稱量骨干重。然后進(jìn)行粉碎、研磨、消化。用化學(xué)法（EDTA滴定法）測(cè)定骨鈣含量。

1.5.5骨密度測(cè)定：用骨密度測(cè)量儀測(cè)量大鼠左側(cè)股骨中點(diǎn)及股骨遠(yuǎn)心端的骨密度。

1.6實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的單因素方差分析和組間比較。

2 結(jié)果

2.1 樣品對(duì)大鼠體重的影響

由表1可見，各組大鼠初始體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，假手術(shù)對(duì)照組大鼠體重略低，但與去卵巢對(duì)照組大鼠相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;其余各組間大鼠體重差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2樣品對(duì)大鼠股骨重量和股骨鈣含量的影響

由表2可見，與去卵巢對(duì)照組比，各組大鼠股骨重量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。去卵巢對(duì)照組骨鈣含量顯著低于假手術(shù)對(duì)照組，表明模型成立。去卵巢高劑量組大鼠股骨鈣含量顯著高于去卵巢對(duì)照組（P<0.01）。

2.3 樣品對(duì)大鼠股骨骨密度的影響

由表3可見，去卵巢對(duì)照組大鼠股骨中點(diǎn)和遠(yuǎn)心端骨密度均明顯低于假手術(shù)對(duì)照組（P<0.01）。表明模型成立。與去卵巢對(duì)照組大鼠相比，去卵巢中、高劑量組大鼠股骨中點(diǎn)骨密度顯著增高（P<0.05，P<0.01）;去卵巢中、高劑量組大鼠股骨遠(yuǎn)心端骨密度顯著增高（P<0.05，P<0.01）。

3討論

近年來， 許多學(xué)者對(duì)腎虛與骨密度或骨礦含量的關(guān)系進(jìn)行了研究， 闡明腎虛與骨密度或骨礦含量的降低顯著相關(guān) [2]。這些研究結(jié)果與中醫(yī)“腎主骨”理論是相吻合的， 證實(shí)了腎虛是骨質(zhì)疏松癥的主要病機(jī)， 因此近年來中醫(yī)藥防治骨質(zhì)疏松癥多從補(bǔ)腎入手。而淫羊藿甘溫助陽， 有補(bǔ)腎壯陽之功效， 《本草綱目》稱其有 “益精氣、強(qiáng)筋骨、補(bǔ)腰膝”作用， 許多用于防治骨質(zhì)疏松癥的中藥復(fù)方中都含有淫羊藿。淫羊藿主要有效成分為黃酮類化合物，代表為淫羊藿苷，大量的試驗(yàn)已證實(shí)淫羊藿的抗骨質(zhì)疏松作用與其所含的黃酮類物質(zhì)有關(guān)。其作用機(jī)制主要體現(xiàn)在：可通過保護(hù)性腺，從而抑制骨吸收和促進(jìn)骨形成，防止骨量丟失[3];可通過阻斷與花生四烯酸代謝有關(guān)的環(huán)氧化酶，顯示抗炎作用[4];含有較豐富的銅、錳、鋅，等。為探討采用單味補(bǔ)腎中藥淫羊藿的提取物治療骨質(zhì)疏松癥的作用，本試驗(yàn)通過建立去勢(shì)模型，經(jīng)口給予大鼠不同劑量的淫羊藿提取物三個(gè)月后，觀察大鼠骨代謝指標(biāo)。結(jié)果?淫羊藿提取物可提高去勢(shì)大鼠骨鈣含量及骨密度，提示單味淫羊藿提取物對(duì)預(yù)防骨質(zhì)疏松有一定作用。

參考文獻(xiàn)

1 葉麗卡， 李國秀， 陳妍妍， 等.HPLC 法測(cè)定生物樣品中淫羊藿苷的濃度.藥物分析雜志， 1998 ， 18（1）：15

2 趙玉堂， 劉凱軍， 李金花 等.骨礦含量與腎虛、腎主骨關(guān)系的研究. 中國骨質(zhì)疏松雜志.1996; 2 （ 3） ： 19～21.

3馬慧萍，賈正平，葛欣，等.淫羊藿總黃酮抗大鼠試驗(yàn)性骨質(zhì)疏松作用研究[ J].華西藥學(xué)雜志，2002，17（3）163～ 167.

4原達(dá)雄.淫羊藿浸膏抗炎作用的藥理研究[J].國外醫(yī)藥·植物藥分冊(cè)，1997，12（6）：272.