UPLC法測定胸腺五肽制劑含量

朱昌松 張南專

摘要：目的，建立測定胸腺五肽制劑半成品含量的UPLC法并進行方法學驗證。方法 色譜條件：以0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液PH：7.0-甲醇=（90：10）為流動相，等度洗脫：進樣量為4ul，流速0.2ml/min，檢測波長275nm.結果：在1ug-3ug范圍內與主峰面積呈良好的線性關系（R=0.99996），空白溶劑對該法無干擾，重復性RSD=0.3%，中間精密度RSD=0.2%;溶液穩定性實驗RSD=0.3%;不同加標量的平均回收率為100.13%;耐用性實驗結果顯示各條件檢測結果RSD=1%以內，采用HPLC與UPLC對6批樣品的含量測定進行對比，兩法相對偏差均未超過0.5%，結論UPLC法快速、簡便、準確性、專屬性強。適用于胸腺五肽制劑半成品含量測定。

關鍵詞：胸腺五肽制劑半成品;UPLC;含量

【中圖分類號】R-02? 【文獻標識碼】B??? 【文章編號】2107-2306（2020）02-297-02

引言

胸腺五肽適用于惡性腫瘤﹑急慢性肝炎﹑外科大手術及嚴重感染﹑自身免疫性疾病﹑年老體弱免疫功能低下的患者的輔助治療，是比較安全有效的.目前國內采用HPLC測定其含量和有關物質，其方法檢測時間長，化學試劑用量大，本文參照HPLC含量測定方法建立其UPLC含量測定法。

1材料

[樣品與對照品] 胸腺五肽注射液（20190601、20190602、20190605）;注射用胸腺五肽（20190601、20190602、20190605），工作對照品（O1810026）.

[主要試劑及儀器]CQUITY? UPLC –Class型超高效液相色譜儀。ACQ? TUV 紫外檢測器;Waters? C18? 2.1*50mm 1.7um色譜柱;磷酸二氫鉀（成都市科隆化學品有限公司 批號：2018062201? 分析純）? 氫氧化鈉（成都市科隆化學品有限公司?? 批號：2018070201 ???分析純）甲醇（美國天地 批號：19025062??? 色譜純）。

[色譜條件]以0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液PH：7.0-甲醇=（90：10）為流動相，等度洗脫;進樣量為4ul，流速0.2ml/min，檢測波長275nm，同時精密稱取胸腺五肽對照品適量，加流動相溶解并制成每1 ml含主藥0.5mg，精密量取4ul注入超高效液相色譜儀，理論板數按胸腺五肽峰計應不低于2000。

2.方法與結果

[系統適用性試驗] 稱取胸腺五肽對照品適量，加流動相溶解并制成每1 ml中含0.5mg胸腺五肽約0.5mg作為系統適用性溶液，實驗結果顯示RSD=0.2%，理論板數為3625。

[專屬性]配制空白溶劑，空白輔料溶液 對照品溶液與供試品溶液，進行輔料干擾分析，結果顯示，空白溶劑與空白輔料在該條件無吸收峰，對含量測定無干擾，方法專屬性良好，結果見下表：

[線性試驗]? 配制濃度為0.5mg對照品溶液，分別精密量取2ul、3ul、4ul、5ul、 6ul 注入液相色譜儀，記錄峰面積，以主峰峰面積為縱坐標，進樣體積（ul） 為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=296469X-23302，相關系數r=0.99996，實驗結果表明，在進樣濃度為1ug-3ug范圍內與主峰面積呈良好的線性關系.

[重復性與中間精密度試驗] 結果顯示重復性實驗結果RSD=0.3%，中間精密度RSD=0.2%.

[準確度試驗]在空白輔料中加入對照品制成加標對照品約為10.24mg/ml? 12.59mg/ml ??15.13mg/ml的溶液各三份，計算回收率， 回收率分別為：99.89% 、 100.07% 、 100.43%，平均回收率為：100.13 %..表明方法準確度高.

[溶液穩定性試驗]? 取供試品溶液于第0 、2 、4、 8 、12小時進樣，進樣5次，計算峰面積RSD，結果顯示 RSD為0.3%，表明樣品在溶解后在12小時內穩定性良好.

[耐用性實驗]結果顯示 RSD均在1.0%以內，表明當色譜柱、流速、柱溫等條件微小變化時對含量測定結果無影響.

[UPLC法與HPLC法對比試驗]6批樣品的含量測定結果表明，相對偏差均未超過0.5%，該方法與HPLC法的測定結果一致性良好.

3.討論.

UPLC分析方法是一種高效、快捷的檢測方法，比HPLC法在檢測時間上節省60% ，檢出能力與HPLC法一致，方法驗證結果表明，該法是一種準確，可靠的測定方法.

參考文獻

【1】任仲輝 郭衛.胸腺五肽合成工藝的研究[J]黑龍江醫藥，2008，（05）：67-68

【2】 張璽煒 趙子儀.胸腺五肽配合化療治療中晚期惡性腫瘤[J]中外醫療，2008（22）：29+31